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        升角丸水提液對痤瘡丙酸桿菌體外抑菌作用的實驗研究

        2022-03-22 00:29:41何俊輝伏雨思蒲文華劉湘渝肖銳華
        健康護理 2022年2期
        關(guān)鍵詞:痤瘡

        何俊輝 伏雨思 蒲文華 劉湘渝 肖銳華

        摘要:目的 研究升角丸水提液對痤瘡丙酸桿菌( Propionibacterium acnes,P. acnes)的體外抑菌作用。方法 采用肉湯稀釋法測算升角丸水提液對痤瘡丙酸桿菌的最低抑菌濃度 (MIC),實驗組升角丸水提液,陽性對照組乳糖酸紅霉素溶液,陰性對照組生理鹽水。結(jié)果 實驗組 ,在實1-實2血平板上血平板均未見菌落,自實3血平板起可見菌落生成,故其MIC為201mg/ml;陽性對照組 MIC結(jié)果,在陽1-陽3血平板均未見菌落,自陽4血平板起可見典型菌落,故其 MIC為12.6μg/ml;陰性對照組 MIC 結(jié)果,在陰1血平板即有典型菌落生成。結(jié)論 應(yīng)用升角丸水提液對痤瘡丙酸桿菌的體外抑菌作用顯著,值得臨床研究推廣。

        關(guān)鍵詞:升角丸水提液;痤瘡丙酸桿菌;痤瘡

        痤瘡是一種常見的慢性炎癥性皮膚病,多好發(fā)于面頰部、額部以及下頜部,臨床表現(xiàn)為粉刺、結(jié)節(jié)、囊腫、丘疹、膿皰以及瘢痕等,并多見于青少年,其發(fā)病率高達 70%~87%(俗稱青春痘)[1]。升角丸是由黑龍江中醫(yī)藥大學依據(jù)古方犀角升麻丸配伍生產(chǎn),醫(yī)宗金鑒有言:“宜常服犀角升麻丸,并治一切粉刺、酒刺等證”,現(xiàn)升麻丸已用于痤瘡臨床治療中,并取得了較好療效,本文利用痤瘡丙酸桿菌的體外抑菌試驗進行觀察與分析,探究升角丸水提液對痤瘡丙酸桿菌的抑制作用,并為臨床運用提供實驗依據(jù)。

        1 材料與方法

        1. 1 實驗儀器與試劑 實驗菌株:痤瘡丙酸桿菌標準株 ;受試藥液:升角丸水提液、乳糖酸紅霉素、滅菌生理鹽水。將升角丸水提液作為實驗組 , 并以乳糖酸紅霉素溶液作為陽性對照組 , 以生理鹽水作為陰性對照組。

        1. 2 升角丸水提液的制備 稱取 20 g 升角丸(藥物組成:水牛角、升麻、羌活、防風、白附子、白芷、生地黃、川芎、紅花、黃芩、生甘草、玄參等),加入 250 mL 超純水,浸泡 25 min 后,超聲振蕩,75℃提取 1 h,過濾;在濾渣中加入 250 mL超純水,再于相同的條件下振蕩提取 1 h,過濾;合并濾液,離心 20 min(255

        000 r·min-1),取上清液濃縮至 20 mL(相當于原藥物 1 g·mL-1),置于 4℃冰箱中保存,并在 12 h 內(nèi)使用完畢。

        1. 3 實驗方法

        1.3.1液體培養(yǎng)基的制備:選用改良GAM 肉湯粉 60 mg 以及 1000 ml 蒸餾水于錐形瓶內(nèi), 加熱溶解滅菌, 降溫至50 ℃后再加入無菌脫纖維羊血 50 ml,搖勻,封口,制成液體培養(yǎng)基。

        1.3.2痤瘡丙酸桿菌標準株菌懸液的制備:將痤瘡丙酸桿菌菌種接種于血瓊脂平板, 放入?yún)捬跖囵B(yǎng)箱,再放入恒溫細菌培養(yǎng)箱,37°C厭氧培養(yǎng)48h, 取后再將細菌培養(yǎng)物制作成細菌涂片 , 予以革蘭染色法 , 并在鏡下觀察細菌的基本形態(tài) ,一般為呈 X狀、Y狀、或柵欄狀,無莢膜,無鞭毛的革蘭陽性桿菌 ,即為痤瘡丙酸桿菌。再用一次性接種環(huán)挑取血平板上菌落 , 同時轉(zhuǎn)種于兩個血瓊脂平板上 , 將其中一個血平板置于厭氧培養(yǎng)箱,再放入恒溫細菌培養(yǎng)箱, 37°C厭氧培養(yǎng)48h標記為 1 號 , 培養(yǎng)后可見典型菌落 , 另外一直接放置于恒溫細菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)37°C培養(yǎng) 48 h 標記為 2 號 , 培養(yǎng)后未見菌落產(chǎn)生。挑取1號血瓊脂平板上的典型菌落,以蒸餾水稀釋,用麥氏比濁計調(diào)整為0.5個麥氏濁度單位(MCF),其細菌數(shù)約1.5* 108cfu/ml,備用 。

        1.3.3抑菌實驗:實驗組:取6支實驗滅菌試管,編號為實1-實6,分別加入不同濃度的升角丸水提液1ml;陽性對照組:取6支實驗滅菌試管,編號為陽1-陽6,分別加入不同濃度的乳糖酸紅霉素溶液1ml;陰性對照組:取1支滅菌試管,編號為陰1 ,加入生理鹽水1ml,待所有試管滅菌后 , 再分別于每支試管中加入液體培養(yǎng)基 1 ml,采用移液槍,分別吸取新鮮配置的痤瘡丙酸桿菌標準株菌懸液100ul分別加入實驗組、陽性對照組各組的1-6試管以及陰性對照組陰1試管中,均勻振蕩,再將試管置于37°C恒溫厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng) 48 h, 各組試管培養(yǎng)結(jié)束后,取13個血平板,進行編號方法同試管,再采用平板澆筑法,分別吸取各組試管內(nèi)混懸液lml接種于相同編號的血瓊脂平板上,放置于37°C 恒溫厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h,觀察實驗結(jié)果。實驗重復三次,分別記錄結(jié)果。

        1. 4 觀察指標 觀察各組受試液對痤瘡丙酸桿菌的抑菌效果。若血平板未見菌落生成 , 則表明該濃度的藥液能夠抑制細菌生長;若平板上可見菌落生成, 則表明該濃度的藥液不能抑制細菌生長,能夠抑制細菌生長的最低藥物濃度即為該藥物MIC。

        2 結(jié)果

        2.1實驗組MIC結(jié)果 實驗組實1-實2血平板上均未見菌落 , 自實3血平板起可見菌落生成 , 故其 MIC 為 201mg/ml。結(jié)果見表1。

        2.2 陽性對照組MIC結(jié)果 陽性對照組陽1-陽3血平板上均未見菌落 , 自陽4血平板起可見菌落生成 , 故其 MIC 為 12.6mg/ml。結(jié)果見表2。

        2. 3 陰性對照組 MIC 結(jié)果 陰性對照組在陰1血平板即有典型菌落生成。

        3 討論

        中醫(yī)認為痤瘡是內(nèi)熱偏盛,又外受風邪或脾氣不足,濕濁化熱所致,《素問生氣通天論》曰 :“膏粱之人,內(nèi)臟滯熱。痤......皆肺氣內(nèi)郁所為”“汗出見濕,乃生痤癡 ”具體可分為肺經(jīng)風熱、肺經(jīng)血熱、胃腸濕熱、毒熱蘊結(jié)、血瘀痰凝、腎陰不足、心火上炎、沖任失調(diào)等,?中醫(yī)常用清肺胃濕熱、涼血解毒的方藥治療[2]?,F(xiàn)代青年不良飲食起居習慣也是導致痤瘡出現(xiàn)的原因,常食用辛辣油膩食物易生痤瘡,經(jīng)常飲酒抽煙,常坐在電腦手機前也比較易患痤瘡。痤瘡和皮膚的性質(zhì)也有一定的關(guān)系,中性皮膚和偏油性的皮膚患痤瘡的較多。女性化妝品不當使用,也易患上痤瘡。

        痤瘡丙酸桿菌是一種桿棒狀或略彎曲、無莢膜,無鞭毛、革蘭氏染色陽性的厭氧菌,其主要寄居于皮膚、皮膚腺、腸道、生殖泌尿道,是一種機會性病原體,痤瘡丙酸桿菌(P.acne)局部異常繁殖是痤瘡四大經(jīng)典發(fā)病機制之一[3]。近年來研究發(fā)現(xiàn),P.acne可通過多個途徑影響到痤瘡的發(fā)病?;畹腜.acne可通過以下3個方面影響?zhàn)畀彽陌l(fā)?。孩僬T導炎癥的形成,P.acne一方面可通過激活Toll樣受體(TLR)-2/4、上調(diào)抗菌肽(AMPs)表達、誘導蛋白酶激活受體(PAR)和MMPs表達以及促進角質(zhì)形成細胞、巨噬細胞、皮脂腺分泌炎癥因子等途徑激活天然免疫,另一方面通過誘導CD4+T細胞活化和產(chǎn)生高滴度的抗P.acne激活細胞和體液免疫,共同促進炎癥的形成;②激活皮脂腺功能,P.acne可以直接作用于皮脂腺細胞,促進皮脂分泌增加及胰島素生長因子及其受體的表達,激活皮脂腺功能;③促進毛囊口角化,P.acne可通過誘導絲聚蛋白、角蛋白1、角蛋白10和角蛋白17等表達,增強角質(zhì)形成細胞角化,促進毛囊口角化。因此,P.acne在痤瘡發(fā)病中作用不僅重要而且涉及到痤瘡發(fā)病的多個環(huán)節(jié),所以有效殺滅抑制 P.acne 是控制痤瘡發(fā)病的重要手段之一。

        升角丸是由水牛角、升麻、羌活、防風、附子、白芷、生地黃、川芎、紅花、黃苓、玄參、生甘草等藥物,蜜調(diào)為丸。方中重用水牛角,與升麻共為君藥,同起清熱涼血解毒之功效[4]。生地黃、玄參清熱養(yǎng)陰、黃苓涼血解毒,白附子解毒排膿,四藥共為臣藥,能加強君藥清熱涼血解毒之功。羌活、防風解表祛風勝濕,白芷消腫排膿,紅花、川芎行氣活血祛瘀,五藥共為佐藥。甘草既能清熱解毒、又能調(diào)和藥性,是為佐使藥。綜觀全方,苦寒辛甘合用,于大量苦寒藥中配伍少許辛甘藥,既防止苦寒傷中,又不失清熱涼血之功。諸藥合用,共奏清熱解毒、涼血祛風、散瘀之功效。因此,升麻丸對痤瘡丙酸桿菌的體外抑菌作用非常顯著 , 值得臨床研究推廣。

        參考文獻:

        [1]紀青,張佳賓,蔡宏為,等.中西醫(yī)結(jié)合治療680例尋常性痤瘡的治療體會[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學院學報,2010,32(04):402-404.

        [2]吳美玲,朱延濤.中醫(yī)藥治療痤瘡研究進展[J].新中醫(yī),2020,52(12):13-15.

        [3]許德田,劉瑋.痤瘡丙酸桿菌和痤瘡:進展與悖論[J].臨床皮膚科雜志,2016,45(03):234-237.

        [4]綦雪巍. 升角丸治療尋常型痤瘡(肺經(jīng)血熱證)的臨床觀察[D].黑龍江中醫(yī)藥大學,2012.

        項目基金:長沙醫(yī)學院大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目:長醫(yī)教[2021]47號-109

        第一作者:何俊輝(2000.6-),男,本科,針灸推拿學

        *通訊作者:肖銳華(1994.5-),女,本科,助教、針灸推拿學專業(yè)方向

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