傅 萍

復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院婦產(chǎn)科，上海 200090

子宮內(nèi)膜異位癥(EMT)是婦科的常見(jiàn)疾病，現(xiàn)發(fā)病機(jī)制仍不清楚，其中主要的學(xué)說(shuō)為經(jīng)血逆流學(xué)說(shuō)，認(rèn)為子宮的內(nèi)膜細(xì)胞隨著經(jīng)血倒流到盆腔，并在盆腔種植、生長(zhǎng)和蔓延，形成異位內(nèi)膜[1-2]。EMT形成過(guò)程中涉及內(nèi)膜與細(xì)胞基質(zhì)之間，細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互關(guān)系，其中細(xì)胞外基質(zhì)在EMT形成過(guò)程中具有重要作用，其主要成分為糖蛋白、膠原和蛋白聚糖。纖維粘連蛋白(FN)和層粘連蛋白(LN)是細(xì)胞外基質(zhì)中的糖蛋白成分，能夠與相應(yīng)受體結(jié)合，與細(xì)胞分化、黏附和遷移具有密切聯(lián)系[3]，雖然EMT是良性疾病，但也有類似惡性腫瘤的生物學(xué)特性。整合素β1(ITGb1)是黏合素超家族成員，介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附及白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，在EMT的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有重要作用[4]。本研究通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)EMT患者血清ITGb1、FN和LN水平，觀察其在EMT發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2019年1月至2020年12月在本院就診的EMT患者96例為EMT組。年齡22～45歲，平均(35.46±7.67)歲；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)為(22.81±2.83)kg/m2；美國(guó)生殖醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)子宮內(nèi)膜異位癥(r-AFS)分期：Ⅰ期24例，Ⅱ期27例，Ⅲ期31 例，Ⅳ期14例。根據(jù)痛經(jīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)將患者分為輕度(<8分，31例)、中度(8～13.5分，36例)和重度(>13.5分，29例)；病理結(jié)果：結(jié)節(jié)內(nèi)具有新鮮血液為活動(dòng)型(66例)，無(wú)新鮮血液為非活動(dòng)型(30例)。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均經(jīng)手術(shù)確診為EMT；自愿參與，依從性良好。排除標(biāo)準(zhǔn)：子宮腺肌?。谎合到y(tǒng)和免疫系統(tǒng)疾??；內(nèi)分泌系統(tǒng)疾?。?個(gè)月內(nèi)接受過(guò)激素藥物治療；妊娠期和哺乳期女性。選擇同期體檢健康者52例為對(duì)照組，年齡23～45歲，平均(35.78±8.67)歲，BMI為(22.72±1.96)kg/m2。兩組年齡、BMI等基線資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2方法

1.2.1痛經(jīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 經(jīng)前小腹疼痛基礎(chǔ)分為5分，腹痛明顯為0.5分，腹痛難忍為1分，疼痛坐立不安為1分，出現(xiàn)休克為2分，面色蒼白為0.5分，四肢發(fā)冷1分，冷汗淋漓1分，疼痛需要臥床休息1分，影響工作和學(xué)習(xí)1分，一般止痛措施不能緩解為1分，用一般止痛措施能緩解為0.5分，伴隨腰部酸痛、肛門(mén)墜脹和惡心嘔吐分別賦值0.5分；疼痛1 d以內(nèi)為0.5分，每增加1 d加5分。

1.2.2血清標(biāo)本留取及檢測(cè) 患者入院后抽取肘靜脈血約5 mL，在室溫下靜置約20 min，然后以3 000 r/min離心10 min，離心半徑為15 cm，去上清液約3 mL，放置于-80 ℃的冰箱中待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清ITGb1、FN和LN水平，所有試劑盒采用R&D公司產(chǎn)品，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.2.3觀察指標(biāo) (1)比較兩組血清ITGb1、FN和LN水平；(2)血清ITGb1、FN和LN對(duì)EMT的診斷效能；(3)血清ITGb1、FN和LN水平與痛經(jīng)嚴(yán)重程度、EMT分期和分型的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清ITGb1、FN和LN水平比較 EMT組血清ITGb1、FN和LN水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組血清ITGb1、FN和LN水平比較

2.2血清ITGb1、FN和LN對(duì)EMT的診斷效能 血清ITGb1、FN和LN對(duì)EMT均具有較好的診斷效能，3項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度為97.9%，特異度為86.5%，曲線下面積(AUC)為0.973，高于ITGb1(Z=3.847，P<0.05)、FN(Z=5.196，P<0.05)和LN(Z=4.268，P<0.05)單項(xiàng)檢測(cè)。見(jiàn)表2、圖1。

表2 血清ITGb1、FN和LN對(duì)EMT的診斷效能

圖1 血清TGb1、FN和LN診斷EMT的ROC曲線

2.3血清ITGb1、FN和LN水平與EMT分期的關(guān)系 EMT患者血清ITGb1、FN和LN水平隨著r-AFS分期的升高而升高(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 血清ITGb1、FN和LN水平與EMT分期的關(guān)系

2.4血清ITGb1、FN和LN水平與痛經(jīng)嚴(yán)重程度的關(guān)系 血清ITGb1、FN和LN水平隨著痛經(jīng)嚴(yán)重程度的升高而出現(xiàn)明顯升高(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 血清ITGb1、FN和LN水平與痛經(jīng)嚴(yán)重程度的關(guān)系

2.5血清ITGb1、FN和LN水平與EMT分型的關(guān)系 EMT活動(dòng)型患者血清ITGb1、FN和LN水平高于非活動(dòng)型患者(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 血清ITGb1、FN和LN水平與EMT分型的關(guān)系

3 討 論

整合素是一種黏附分子受體，廣泛分布于細(xì)胞表面，具有多種生物學(xué)功能，主要參與細(xì)胞與細(xì)胞，細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)(FN、LN和膠原蛋白等)之間的信號(hào)傳遞和黏附，與炎性反應(yīng)和血管生成具有重要聯(lián)系，對(duì)細(xì)胞增殖、遷移和分化等具有重要作用[5]。現(xiàn)有研究表明，整合素在EMT形成過(guò)程中具有重要的作用，而整合素表達(dá)失調(diào)可能是導(dǎo)致EMT形成的重要原因[6]。本研究發(fā)現(xiàn)EMT患者血清ITGb1水平明顯高于對(duì)照組，且血清ITGb1水平隨著EMT分期和痛經(jīng)評(píng)分升高而出現(xiàn)明顯升高，活動(dòng)型EMT患者血清ITGb1水平明顯高于非活動(dòng)型患者，說(shuō)明ITGb1在EMT發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有重要作用，能夠反映EMT疾病和疼痛的嚴(yán)重程度，血清ITGb1水平越高，提示EMT越可能為活動(dòng)型。關(guān)于ITGb1的研究主要集中于癌癥，血清ITGb1水平與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展具有密切聯(lián)系，并且血清ITGb1水平與子宮內(nèi)膜癌的惡性程度、轉(zhuǎn)移和預(yù)后具有密切的聯(lián)系[7]，在一項(xiàng)有關(guān)宮頸癌的研究中發(fā)現(xiàn)，沉默ITGb1基因的表達(dá)能夠明顯抑制癌癥細(xì)胞的增殖和遷移[8]。EMT具有類似腫瘤的特性，如侵襲和種植，但很少會(huì)發(fā)生惡變，本研究進(jìn)一步證實(shí)血清ITGb1水平能夠反映EMT的生物學(xué)特性和疾病的嚴(yán)重程度，與既往文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]。本研究結(jié)果顯示，血清ITGb1>3.62 μg/mL時(shí)，其診斷EMT的靈敏度為74.0%，特異度為88.5%，AUC為0.877，說(shuō)明血清ITGb1水平對(duì)EMT具有較好的診斷效能。

本研究結(jié)果顯示，EMT患者血清FN水平明顯高于對(duì)照組，并且隨著EMT分期和痛經(jīng)評(píng)分的升高而升高，活動(dòng)型EMT患者明顯高于非活動(dòng)型患者，說(shuō)明FN參與了EMT的發(fā)生發(fā)展，是反映EMT嚴(yán)重程度的指標(biāo)，F(xiàn)N可能參與了EMT的粘連形成過(guò)程，并且影響子宮內(nèi)膜的植入和生長(zhǎng)。FN是細(xì)胞外基質(zhì)的重要細(xì)胞黏附分子，不僅在維持組織形態(tài)方面具有重要作用，而且在調(diào)控黏附、生長(zhǎng)、分化和促進(jìn)細(xì)胞的增殖和遷移方面具有重要作用，在阻斷FN表達(dá)后，膠原纖維形成受阻[10]。FN是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分，在細(xì)胞生長(zhǎng)中具有重要作用，在惡性腫瘤晚期階段，F(xiàn)N表達(dá)水平出現(xiàn)明顯升高，有利于腫瘤細(xì)胞侵襲周?chē)M織，導(dǎo)致腫瘤進(jìn)一步發(fā)展，F(xiàn)N被認(rèn)為可作為腫瘤早期轉(zhuǎn)移的指標(biāo)[11-13]。FN引起EMT發(fā)生增殖和侵襲的機(jī)制可能為：FN與特異性受體整合素結(jié)合后，對(duì)細(xì)胞的黏附起到定向移動(dòng)作用，促進(jìn)內(nèi)膜細(xì)胞向降解后的基質(zhì)區(qū)發(fā)生浸潤(rùn)，有利于內(nèi)膜細(xì)胞的侵襲和增殖[14]。本研究發(fā)現(xiàn)血清FN水平>128.64 μg/mL時(shí)，其診斷EMT的靈敏度為62.5%，特異度為86.5%，AUC為0.813，說(shuō)明血清FN對(duì)EMT具有較好的診斷效能。

本研究結(jié)果顯示，EMT患者血清LN水平明顯高于對(duì)照組，并且隨著EMT分期和痛經(jīng)評(píng)分升高而升高，并且發(fā)現(xiàn)活動(dòng)型EMT患者血清LN水平明顯高于非活動(dòng)型，說(shuō)明LN與EMT的發(fā)生發(fā)展具有密切聯(lián)系，血清LN水平與EMT嚴(yán)重程度相關(guān)?，F(xiàn)已知LN是一種存在于基底膜的大分子非膠原性糖蛋白，與整合素結(jié)合后可發(fā)揮多種生理功能[15]。LN最早是作為惡性腫瘤預(yù)后評(píng)估的重要指標(biāo)，在一項(xiàng)研究中發(fā)現(xiàn)腫瘤患者LN水平明顯高于健康對(duì)照組，LN水平隨著腫瘤浸潤(rùn)程度的升高而升高，并且發(fā)現(xiàn)其水平與惡性腫瘤的預(yù)后具有明顯相關(guān)性，LN水平越高，其生存期越短[16-18]。在一項(xiàng)對(duì)子宮腺肌病患者的研究中發(fā)現(xiàn)，LN水平與子宮腺肌病的病灶增大有密切相關(guān)性，其會(huì)影響子宮腺肌病的發(fā)展[19]。有研究顯示，EMT患者無(wú)論腹腔液還是血液中的LN水平均高于對(duì)照組，并且隨著疾病嚴(yán)重程度的升高而升高[20]。本研究發(fā)現(xiàn)血清LN>93.90 ng/mL時(shí)，其診斷EMT的靈敏度為89.6%，特異度為69.2%，AUC為0.858，說(shuō)明LN對(duì)EMT具有較好的診斷效能。

本研究結(jié)果顯示，血清ITGb1、FN和LN聯(lián)合診斷EMT的靈敏度高達(dá)97.9%，特異度為86.5%，AUC為0.973，明顯高于各項(xiàng)單獨(dú)檢測(cè)，說(shuō)明3項(xiàng)指標(biāo)具有某種內(nèi)在聯(lián)系和互補(bǔ)性?，F(xiàn)已知FN和LN是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分，廣泛分布于基底膜透明層，與膠原蛋白結(jié)合形成基底膜的骨架，在基底膜的形成過(guò)程中具有重要作用，與ITGb1結(jié)合后，對(duì)基質(zhì)進(jìn)行破壞，導(dǎo)致EMT的發(fā)生發(fā)展[21]。故ITGb1、FN和LN在EMT發(fā)生過(guò)程中具有不同的作用，聯(lián)合檢測(cè)有助于提高其對(duì)EMT的診斷效能。

綜上所述，血清ITGb1、FN和LN水平能夠反映EMT的嚴(yán)重程度，3項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)EMT具有較好的診斷效能。