黃麗芬 韋花媚 陸小嬋 曾冬云 黃海寧

摘要：目的 研究不同固定液在細(xì)胞蠟塊技術(shù)中的應(yīng)用。方法 使用目前較為常見的三種不同的固定液對同一陽性涂片漿膜腔液體進(jìn)行處理并制成細(xì)胞蠟塊，對細(xì)胞蠟塊開展HE染色以及免疫組織化學(xué)染色，通過對比三種不同固定液作用下的切片效果以及抗體標(biāo)記情況，綜合分析其應(yīng)用效果。結(jié)果 10%中性福爾馬林作為固定液時HE染色最為清晰，能夠看到完好的細(xì)胞形態(tài)，免疫標(biāo)記定位情況準(zhǔn)確;無水乙醇作為固定液時HE染色清晰度不佳，少部分細(xì)胞發(fā)生變性，免疫標(biāo)記定位情況一般;甲醇作為固定液時HE染色清晰度不佳，大部分技術(shù)中的應(yīng)用效果發(fā)現(xiàn)10%中性福爾馬林作為固定液的應(yīng)用效果最好，可以作為制作細(xì)胞蠟塊的首選固定液。

關(guān)鍵詞：固定液;細(xì)胞蠟塊;應(yīng)用效果

【中圖分類號】Q26 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1673-9026（2022）03--01

臨床上病理學(xué)診斷的常用方法為脫落細(xì)胞學(xué)檢查，即將脫落細(xì)胞學(xué)標(biāo)本制成細(xì)胞蠟塊，通過觀察細(xì)胞形態(tài)以及免疫標(biāo)記定位細(xì)胞的方法分析患者的病情，具有迅速、便捷、創(chuàng)傷小等優(yōu)點(diǎn)，已成為病理檢查常規(guī)方式[1-2]。以往針對脫落細(xì)胞檢查，臨床多采取傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)涂片，該技術(shù)常因細(xì)胞量不足、細(xì)胞易出現(xiàn)退變、結(jié)構(gòu)不清等因素，增加細(xì)胞學(xué)診斷難度[3-4]。目前薄層液基因細(xì)胞學(xué)檢查，雖可改善傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)的制片質(zhì)量，但該檢查方式處理的細(xì)胞樣本不易獲得細(xì)胞排列方式與背景對照細(xì)胞，造成難以鑒別可疑與高分化癌細(xì)胞、反應(yīng)性間皮細(xì)胞與間皮瘤[5]。近年來，隨著分子病理檢測技術(shù)、免疫組化抗體檢測不斷發(fā)展，體腔積液樣本可提供更多新型檢查方式，細(xì)胞蠟塊技術(shù)的應(yīng)用顯著提升了病理診斷的敏感性與特異性，其可明確積液中細(xì)胞成分分化來源與性質(zhì)，也可為后續(xù)相關(guān)檢測提供源源不斷的樣本數(shù)量，以此為靶向治療提供有效的理論依據(jù)，具有較為顯著的應(yīng)用價值【6-7】，但細(xì)胞蠟塊制作使用的固定液種類較多，現(xiàn)在同一個標(biāo)本上使用多種固定液制定細(xì)胞蠟塊，通過對比不同固定液下細(xì)胞蠟塊的切片效果以及抗體標(biāo)記情況，綜合分析其應(yīng)用價值。

1資料與方法

1.1一般資料

抽取2019年1月到6月間我院病理科腫瘤性胸腹水1例，選取細(xì)胞學(xué)涂片經(jīng)過病理診斷確定可見癌細(xì)胞。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞蠟塊制作方法

取適量細(xì)胞學(xué)涂片診斷可見癌細(xì)胞的腹水并使用三個尖底離心管各抽取50毫升，在3000r/min的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行3min的離心處理，將上層清液去除。針對細(xì)胞量較少的腹水可以進(jìn)行多次離心處理，并保留沉淀物。針對血性標(biāo)本，在制作細(xì)胞蠟塊前需要去除紅細(xì)胞，首先將血性標(biāo)本放置在離心管內(nèi)進(jìn)行離心處理，將上層清液去除后加入適量冰醋酸酒精液不能并再次離心處理，離心完成后將上層清液去除并加入適量固定液（三個試管內(nèi)分別加入不同的固定液）。加入固定液后混合均勻并放置一小時，使用吸管抽取離心管底部的細(xì)胞并放置在顯微鏡擦鏡紙上，包裝完成后放置在自動脫水機(jī)內(nèi)進(jìn)行組織處理，將處理好的組織塊進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，制成細(xì)胞蠟塊。

1.2.2切片與烤片

細(xì)胞蠟塊在冰箱冷凍室內(nèi)放置5到10分鐘后進(jìn)行常規(guī)切片，切片的厚度為4um，最后在65攝氏度的烤箱內(nèi)進(jìn)行烤片1.5小時。

1.2.3 HE染色及免疫組織化學(xué)染色

對其中一張切片進(jìn)行常規(guī)HE染色，其余切片則根據(jù)不同的需求進(jìn)行免疫組織化學(xué)抗體染色。

2結(jié)果

2.1三種不同固定液作用下細(xì)胞蠟塊HE切片情況

10%中性福爾馬林作為固定液時HE染色最為清晰，顯微鏡觀察下能夠清楚的看到細(xì)胞的排列方式以及分布情況，細(xì)胞輪廓及形態(tài)清晰可見，腫瘤細(xì)胞與周圍的細(xì)胞形態(tài)學(xué)存在明顯差異。無水乙醇作為固定液時HE染色清晰度不佳，顯微鏡觀察下難以有效觀察細(xì)胞的排列方式以及分布情況，細(xì)胞輪廓及形態(tài)不易辨認(rèn)，腫瘤細(xì)胞與周圍細(xì)胞的形態(tài)學(xué)之間存在一定差異。甲醇作為固定液時HE染色情況與95%乙醇類似，清晰度較低，難以有效辨別細(xì)胞形態(tài)，部分細(xì)胞發(fā)生變性，細(xì)胞核體積增大或者固縮。

2.2三種不同固定液作用下免疫組化標(biāo)記結(jié)果

三種不同固定液作用下腫瘤細(xì)胞檢驗結(jié)果均為陽性，免疫標(biāo)記定位效果最好的是10%中性福爾馬林作為固定液時的細(xì)胞切片，無水乙醇與甲醇作用固定液時細(xì)胞切片的染色效果以及免疫標(biāo)記定位效果相對較差，但仍可辨認(rèn)出腫瘤細(xì)胞。

3討論

腫瘤性胸腹水在臨床較為常見，主要是指發(fā)生在全身或腹腔中的腫瘤與（或）病變引起的胸腔、腹腔的臟層與（或）壁層胸腹膜發(fā)生彌漫性病變，進(jìn)而造成體腔中液體異常增多的現(xiàn)象[8]。病理診斷中常用的細(xì)胞學(xué)制片方法有細(xì)胞涂片以及液基細(xì)胞學(xué)制片兩種，細(xì)胞涂片具有操作簡單，耗時短的優(yōu)點(diǎn)，是幾乎所有病理科均常規(guī)開展的項目，但其采集細(xì)胞量較少，涂片過程中易出現(xiàn)厚薄不均的問題，因此細(xì)胞涂片下病理診斷的診斷效果受到多種因素的影響，出現(xiàn)誤診與漏診的概率較高。液基細(xì)胞學(xué)制片解決了細(xì)胞涂片中的常見問題，提升了制片的質(zhì)量，但液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)破壞了細(xì)胞排列方式，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的鑒別難度增加，而且液基細(xì)胞學(xué)制片對醫(yī)療設(shè)備的要求較高，大部分的醫(yī)院尚未落實(shí)使用[9]。細(xì)胞蠟塊制作有效結(jié)合了上述兩種細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，具有保存細(xì)胞新鮮、抗原保留完整等優(yōu)點(diǎn)，在不破壞細(xì)胞排列方式的同時最大程度的提高了細(xì)胞采集量，且可進(jìn)行多次切片，用于分子檢測、免疫組化染色、藥物分析、臨床實(shí)驗等，可顯著提高細(xì)胞學(xué)診斷陽性率，也可幫助判斷細(xì)胞來源、分型，是目前病理診斷的首選制片方法，有利于對患者預(yù)后進(jìn)行評估。在該方法的幫助下，絕大程度上提升了細(xì)胞采集工作的綜合效率，可為病理性診斷的準(zhǔn)確性以及科學(xué)性奠定有效基礎(chǔ)。

近年來，針對細(xì)胞蠟塊的制作方式已發(fā)現(xiàn)多種，且多數(shù)廠家也產(chǎn)出了細(xì)胞蠟塊制作試劑盒，但目前關(guān)于分析不同固定方法對細(xì)胞蠟塊制作效果影響的文獻(xiàn)較少。相關(guān)研究顯示，不同固定液會影響到細(xì)胞蠟塊的效果，目前臨床上使用較多的固定液有10%中性福爾馬林、無水醇以及甲醇三種，均屬于蛋白質(zhì)變性劑，作為固定液使用具有良好的應(yīng)用效果。甲醇還具有神經(jīng)毒素，能夠在患者的體內(nèi)積蓄，甲醛是生物遺傳誘變劑，部分學(xué)者認(rèn)為甲醛還具有致癌作用。乙醇對人的損害，最重要的是中樞神經(jīng)系統(tǒng)。它使神經(jīng)系統(tǒng)從興奮到高度的抑制，嚴(yán)重地破壞神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能?，F(xiàn)使用三種固定液對同一個細(xì)胞學(xué)標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞蠟塊制作，并綜合評估不同固定液在細(xì)胞蠟塊技術(shù)中的應(yīng)用效果。研究結(jié)果顯示10%中性福爾馬林作為固定液時細(xì)胞蠟塊的染色效果最好，且不會引起細(xì)胞變性等問題，腫瘤細(xì)胞與周圍組織細(xì)胞之間存在明顯的形態(tài)學(xué)差異，給臨床醫(yī)師的鑒別診斷提供了準(zhǔn)確有效的數(shù)據(jù)支持。相對而言，無水乙醇與甲醇作為固定液的細(xì)胞蠟塊HE染色效果較差，部分細(xì)胞發(fā)生變形而出現(xiàn)形態(tài)改變，但腫瘤細(xì)胞與周圍組織細(xì)胞之間仍具有特異性的形態(tài)學(xué)差異[10]。在制作細(xì)胞蠟塊過程中，使用10%中性福爾馬林固定離心后，細(xì)胞不易凝結(jié)在一起，不利于包埋，在此時應(yīng)盡可能將試管中液體取出，使用吸管將細(xì)胞沉淀物吸出，放于玻片上，使用濾紙將周圍液體吸干，在細(xì)胞沉淀物上滴上幾滴無水醇，細(xì)胞沉淀凝固成塊，極易制作成細(xì)胞蠟塊，無水醇與12%中性福爾馬林兩者固定較為迅速，細(xì)胞極易結(jié)成塊，有助于細(xì)胞蠟塊制作。

綜上所述，10%中性福爾馬林作為細(xì)胞蠟塊的固定液具有更為顯著的應(yīng)用價值，適宜推薦使用。

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