史利軍，李恒文，陳寶軍，賈玉璽，牟趙杰，倪倍倍

（1.大通漢麻生物科技研究院，山東 青島 266500；2.青島大學附屬醫(yī)院 藥學部，山東 青島 266000）

口唇較之身體其他部位，有角質(zhì)層薄、皮膚含水量少、天然保濕因子較少等特點，更易干裂老化和出現(xiàn)唇紋[1]。目前，亟待開發(fā)具有優(yōu)良唇部皮膚修復功能的唇部護理產(chǎn)品。大麻（Cannabis sativa L.），系桑科大麻屬草本植物，《周禮》記載其為“五谷之首”，有藥用價值[2]?，F(xiàn)證明大麻有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗衰老、抗炎和抗氧化等多種生物學活性[3]。近年來，對大麻的研究已成世界熱點，大麻在化妝品領域的應用逐漸興起。大麻非成癮成分大麻二酚（Cannabidiol，CBD） 成為化妝品追捧的成分。我國已批準富含CBD 的大麻葉提取物用于化妝品領域[4]。大麻葉提取物除富含CBD 外，還有大麻酚、大麻色烯、大麻黃酮等成分[5]。Nalli Y 等人[6]研究發(fā)現(xiàn)，大麻葉提取物可針對受損肌膚起到重建皮膚保護屏障、改善皮膚自我修復的作用。將大麻葉提取物作為皮膚調(diào)理劑，能強化潤唇啫喱的修復功效。介紹一種工業(yè)化清潔生產(chǎn)制備含大麻葉提取物的潤唇啫喱的方法，以期為我國大麻葉提取物化妝品的應用和開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料和儀器

液體石蠟、礦脂、氫化共聚物、微晶蠟、辛酸/癸酸甘油三酯、純地蠟、苯氧乙醇、香精、油橄欖果油、泛醇和無水乙醇，所用原料均為分析純試劑或化妝品級產(chǎn)。

LC-2030puls 型高效液相色譜、ATY224 型萬分之一天平，日本島津產(chǎn)品；FW135 型粉碎機、WGLL-45BE 型鼓風干燥箱，天津泰斯特產(chǎn)品；TDZ5 型離心機，赫西產(chǎn)品；YCD-EL260 型冷藏冷凍冰箱，中科美凌冰箱產(chǎn)品。

1.2 潤唇啫喱的制備

1.2.1 含高純度CBD 的大麻葉提取物的制備

大麻葉提取物來源于中國云南合法種植、加工提取的工業(yè)大麻（THC<0.3 %），大麻葉提取物中的大麻二酚（CBD） 含量為20%～50%，采用一種工業(yè)化清潔生產(chǎn)大麻二酚CBD 廣譜油的方法提取出含高純度CBD 的大麻葉提取物，然后用甘油稀釋，使其CBD 含量稀釋至20%～50%制得，操作要點如下：

（1） 原料預處理。將晾干的工業(yè)大麻花葉經(jīng)振動篩過篩，去除麻籽和麻稈、砂石雜質(zhì)，經(jīng)過粉碎機粉碎至10～30 目，得到工業(yè)大麻花葉初級原料。

（2） 原料干燥處理。將步驟（1） 得到的初級原料，經(jīng)過熱風帶式干燥設備干燥0.5～3.0 h，得到水分小于7%的干燥工業(yè)大麻花葉原料。

（3） 乙醇提取。對于步驟（2） 得到的干燥花葉原料，置于多功能提取罐內(nèi)進行乙醇溶劑提取，乙醇與花葉原料的質(zhì)量比為6∶1，得到一次提取液和殘渣；殘渣按照4∶1 進行二次乙醇提取得到二次提取液和廢渣；殘渣按照2∶1 進行第3 次乙醇提取得到3 次提取液和廢渣；3 次提取液合并得到CBD 萃取液。

（4） 濃縮。將步驟（3） 得到的萃取液進行真空減壓濃縮，得到濃縮液。

（5） 超低溫脫脂脫蠟。按照濃縮液與95%（Vol）食品級乙醇比例1∶5（W/W） 混勻，超低溫冷凍脫脂脫蠟3～8 h，離心分離，過濾得到一級處理液。

（6） 脫色。將一級處理液通過活性炭和大分子樹脂聯(lián)合脫色30～60 min，脫色時載樣量為5%～10%，過濾分離，得到二級處理液；二級處理液濃縮得到中間品CBD 濃縮粗油。

（7） 分子蒸餾。將步驟（6） 得到的CBD 濃縮粗油在90～170 ℃條件下進行短程分子蒸餾，使粗油中的CBDA 充分脫羧轉(zhuǎn)化為CBD，得到CBD 含量25%～35%的CBD 全譜油。

（8） 工業(yè)制備色譜分離純化。將步驟（7） 的CBD 全譜油輸送到樣品罐，用1∶1 的無水乙醇調(diào)配，然后上高壓色譜層析柱，載樣量（CBD） 30～50 mg/mL，解析洗脫液采用50%～85%的乙醇溶液（Vol），壓力為20～40 bar；通過工業(yè)制備高效液相色譜系統(tǒng)精準分離，先用40%～60%的乙醇溶液平衡，再用50%～85%乙醇溶液洗脫5～10 倍柱體積，最后用50%～85%的乙醇溶液洗脫5～10 倍柱體積洗脫目標成分，收集富含目標成分的洗脫液，得到CBD 組分富集液；根據(jù)洗脫液中CBD 圖譜，準確把前雜、CBD 組分富集液切到不同的儲罐。

CBD 高峰色譜圖見圖1。

圖1 CBD 高峰色譜圖

（9） 真空濃縮。將步驟（8） 的CBD 組分液真空減壓濃縮，得到CBD 含量為40%～80%的精制CBD 廣譜油。

（10） 將步驟（9） 得到的含高純度CBD 的大麻葉提取物用甘油稀釋，使其CBD 含量稀釋至20%～50%備用。

（1） 設備消毒。將真空乳化鍋和稱量器及所用到的所有設備按照規(guī)定的清洗消毒流程清洗消毒后備用。

（2） 原料稱量。按照表1 原料配比稱量各種原料。

（3） 原料混合加熱。將A 相原料投入真空乳化鍋中，攪拌分散均勻后加熱升溫至80～85 ℃，保溫80～85 ℃攪拌30 min，至料體完成溶解，料體呈透明油狀啫喱狀態(tài)；然后自然降溫至45 ℃后，投入B相原料，攪拌均勻，保持溫度40～45 ℃，攪拌5 min后，使料體呈透明、較黏稠的油狀啫喱狀態(tài)。

（4） 出料。降溫至38 ℃，送檢合格后出料，并檢測半成品外觀、香味，做微生物檢測。

（5） 產(chǎn)品灌裝。料體靜置5 d，微檢合格后，將料體倒入灌裝機進行灌裝，完成含大麻葉提取物的潤唇啫喱的制備。

潤唇啫喱配方見表1。

表1 潤唇喱配方

表1 潤唇喱配方

分類 原料 W/%45 44 A 相液體石蠟礦脂氫化共聚物微晶蠟辛酸/癸酸甘油三酯純地蠟油橄欖果油3331 0.1 B 相香精大麻葉提取物泛醇苯氧乙醇0.1 0.1 0.1 0.6

2 結果與分析

2.1 潤唇啫喱質(zhì)量檢測

2.1.1 穩(wěn)定性檢查

根據(jù)《化妝品安全技術規(guī)范》 （2015 年版），對該潤唇啫喱進行耐寒和耐熱性檢查。結果如下：40±1 ℃，24 h，恢復室溫后，性狀與原樣保持一致，無滲油；-8±2 ℃，24 h，恢復室溫后，性狀與原樣保持一致。其檢測結果符合規(guī)范。

2.1.2 衛(wèi)生指標檢測

按照國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的《化妝品安全技術規(guī)范》 （2015 年版） 對其進行微生物和重金屬的檢測。微生物檢測結果如下：菌落總數(shù)<10 CFU/kg，霉菌和酵母菌總數(shù)<10 CFU/kg，耐熱大腸桿菌、銅綠假單胞桿菌和金黃色葡萄球均未檢出，微生物和重金屬檢測均符合規(guī)范。

重金屬檢測結果見表2。

表2 重金屬檢測結果

2.2 潤唇啫喱綜合評價

隨機選取20 名試用人員，每日早晨8:00 試用潤唇啫喱，試用30 d 后對試用者進行填寫調(diào)查問卷，并統(tǒng)計試用者使用舒適度、嘴唇保濕滿意度、嘴唇干裂改善效果、唇紋淡化效果等。結果顯示，該潤唇啫喱舒適性100%，保濕性100%，防干裂有效性100%，其中顯著有效75%；淡化唇紋有效性100%，其中顯著有效85%。

3 結論

目前，工業(yè)大麻花葉提取CBD 的主要工業(yè)生產(chǎn)方法是有機溶劑浸提和超臨界二氧化碳萃??；CBD的分離純化方法主要為分子蒸餾和樹脂吸附法（工業(yè)色譜柱）[7]。工業(yè)大麻葉提取CBD 采用的方法是乙醇提取和工業(yè)色譜柱分離純化，提取純度高，適合工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。作為工業(yè)大麻來源的化妝品原料，大麻葉提取物被在《已使用化妝品原料名稱目錄（2015 版）》中收錄并允許使用。大麻葉提取物有豐富的大麻素活性成分，其中最主要的成分是CBD[8]。因為CBD 對皮膚美容異常的各種藥理作用，多個化妝品牌開始將CBD 添加到化妝品中，包括祛痘、去皺抗衰老、舒緩修護等開發(fā)方向[9]。CBD 對皮膚的修復作用主要通過抗氧化、抗炎、激活細胞等機制實現(xiàn)[10]。外界環(huán)境使皮膚活性氧（ROS） 累積，導致皮膚損傷，同時也伴隨著炎癥因子分泌的改變和局部炎癥反應[11-12]。NRF2（Nuclear factor erythroid 2-like 2） 和PPAR-γ 負責調(diào)節(jié)皮膚抗氧化防御系統(tǒng)。HMOX1（Hemeoxygenase1） 是NRF2 的靶基因，有抗炎和抗氧化作用[13]。體外研究發(fā)現(xiàn)，CBD 能誘導HMOX1 的表達[14]。大鼠皮膚局部使用CBD 后，觀察到HMOX1 水平的升高及角蛋白16 和17 表達增加[15]。在另一項利用人角質(zhì)形成細胞的體外研究中，研究者表明CBD 能夠穿透細胞，平衡UVB 照射和過氧化氫引起的氧化應激反應，并保護細胞膜的完整性[16]。

大麻葉提取物除含CBD 外，還富含其他大麻素、黃酮、萜烯類等，可能比CBD 單獨使用發(fā)揮更強大的協(xié)同抗炎作用。Sangiovanni E 等人[17]研究了大麻葉提取物和CBD 對人角質(zhì)形成細胞和人皮膚成纖維細胞的影響。使用腫瘤壞死因子-α（tumor Necrosisfactor alpha，TNF-α） 預處理人角質(zhì)形成細胞后，發(fā)現(xiàn)26 個參與炎癥通路的基因表達上調(diào)；預處理人皮膚成纖維細胞后，發(fā)現(xiàn)16 個傷口愈合相關基因上調(diào)。大麻葉提取物能下調(diào)上述所有基因，而CBD 僅下調(diào)11 個基因，對炎癥和基質(zhì)重塑起作用的基因沒有表現(xiàn)出任何抑制作用。陳來成等人[18]使用3D 表皮模型（Epikutis R） 也證明了大麻葉提取物通過抑制炎性因子IL-1α、TNF-α 及IL-8 分泌，抑制皮膚炎癥反應，從而在皮膚屏障損傷方面具有修復作用。而該含大麻葉提取物的潤唇啫喱的試用結果也表明其具有優(yōu)越得防干裂和淡化唇紋效果。CBD作用于人體皮膚中的大麻素受體，發(fā)揮保護神經(jīng)與鎮(zhèn)痛功效，起到舒緩、滋潤、緩解疼痛和修復皮膚屏障的作用[19]。

綜上所述，大麻葉提取物作為皮膚調(diào)理劑，具有促進皮膚修復的功能，能有效愈合皮膚創(chuàng)傷，刺激免疫系統(tǒng)和纖維細胞的生長，加速傷口愈合。提供了一種含大麻葉提取物的潤唇啫喱的工業(yè)化清潔制備方法。該方法制備的潤唇啫喱使用舒適，保濕效果滿意，解決唇部皮膚干燥干裂問題，修復和淡化唇紋滿意。同時還提供了一種制備含高純度CBD的大麻葉提取物方法，適用于大麻葉提取物的工業(yè)化生產(chǎn)，為我國大麻葉提取物相關化妝品的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)提供思路。