趙昭，閻曉玲

［關(guān)鍵字］ 垂體腺瘤；免疫組化；ESM?1

垂體腺瘤是一種好發(fā)于垂體前葉的良性腫瘤，常因壓迫癥狀就診時(shí)已十分巨大，手術(shù)全切除非常困難，殘留的腫瘤組織則成為復(fù)發(fā)的潛在風(fēng)險(xiǎn)［1］，約為 9.4%~17%［2，3］，再次手術(shù)的難度大幅提高。內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子?1（endothelial cell?specific molecule?1，ESM?1）或ESM?1 是近年來人們在人類血管內(nèi)皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種蛋白多糖，ESM?1 通過HGF/SF 信號(hào)通路導(dǎo)致腫瘤發(fā)生并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，通過NF?κB 信號(hào)通路抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，通過VEGF 和HIF 通路促進(jìn)腫瘤內(nèi)血管生成［4］。多種癌癥中發(fā)現(xiàn)了高水平的ESM?1 表達(dá)，包括肺癌［5］、腎癌［6］、結(jié)直腸癌［7］、急性髓系白血?。?］、乳腺癌［9］、膠質(zhì)細(xì)胞瘤［10］、垂體瘤［11］。關(guān)于ESM?1 與垂體瘤發(fā)生發(fā)展的研究很少，現(xiàn)有研究認(rèn)為垂體瘤進(jìn)展可能通過ESM?1 相關(guān)機(jī)制發(fā)生［12］。本研究通過免疫組化方式對患者腫瘤中ESM?1 的表達(dá)進(jìn)行檢測并分析ESM?1 表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)、ki?67 蛋白陽性表達(dá)指數(shù)以及年齡、性別等相關(guān)因素的關(guān)聯(lián)情況，試圖發(fā)現(xiàn)ESM?1 等標(biāo)志物對于腫瘤復(fù)發(fā)、指導(dǎo)治療以及預(yù)后中的作用。

1 對象及方法

1.1 一般資料

選取 2018 年 2 月至 2021 年 4 月于天津市環(huán)湖醫(yī)院行垂體腺瘤切除術(shù)的33 例患者，其中復(fù)發(fā)性垂體腺瘤16 例，首發(fā)性垂體腺瘤17 例。男女比為12∶21，平均年齡為（48.3±13.5）歲，術(shù)后經(jīng)免疫組化染色確定激素類型如下：生長激素腺瘤2 例，泌乳激素腺瘤2 例，促性腺激素10 例，零細(xì)胞腺瘤17例，多激素腺瘤2例。收集全部33例垂體腺瘤及16例復(fù)發(fā)垂體腺瘤患者的首發(fā)腫瘤標(biāo)本制成蠟塊。

1.2 腫瘤緩解及復(fù)發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)

垂體腺瘤緩解：生長激素腺瘤：血GH 濃度<2.5 ng/mL；泌乳激素腺瘤：血清PRL濃度<20 ng/mL；促腎上腺素腺瘤：24 小時(shí)尿游離皮質(zhì)醇正常；無功能腺瘤：壓迫癥狀（如頭痛、頭暈、視力視野改變）較前改善及術(shù)后影像學(xué)檢查顯示腫瘤全切除或近全切除。腫瘤復(fù)發(fā)標(biāo)準(zhǔn)：影像學(xué)復(fù)查發(fā)現(xiàn)新生腫瘤或殘余腫瘤的再次生長（無功能性腺瘤）［7］以及術(shù)后檢測已降低的激素水平再次升高（功能性腺瘤）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

所有標(biāo)本均進(jìn)行常規(guī)HE 染色（腫瘤標(biāo)本經(jīng)固定、脫水后包埋、切片，經(jīng)蘇木精、伊紅染色后封片觀察）及免疫組化染色（組織切片滴加兔抗人ESM?1、ki?67、P53 多克隆抗體，PBS 代替一抗作為陰性對照組，添加聚合生物素標(biāo)記抗兔抗體，加顯色劑后封片觀察）（染色結(jié)果見圖1）。

圖1 垂體瘤ESM?1 表達(dá)

ESM?1 蛋白染色評定：采用 Mattcrn 積分法以染色深度及陽性細(xì)胞所占百分比來評價(jià)。染色強(qiáng)度積分：0 分：陰性，1 分：弱陽性，2 分：中度陽性，3 分：強(qiáng)陽性；陽性細(xì)胞百分比：在每例標(biāo)本中隨機(jī)選擇5 個(gè)含有陽性細(xì)胞的高倍視野（×200）分別計(jì)數(shù)100 個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)百分比（%），取其平均值。陽性細(xì)胞百分比積分：0 分=0%陽性細(xì)胞，1 分=≤25%陽性細(xì)胞，2 分=≤50%陽性細(xì)胞，3 分=＞50%陽性細(xì)胞。染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比積分乘積作為陽性表達(dá)指數(shù)；0 分為（-），1~3 分為（+），4?5 分為（++），≥6 分為（+++）；＜4 分為陰性，≥4 分為陽性。

1.4 Ki?67 抗原染色評定標(biāo)準(zhǔn)

ki?67 主要表達(dá)于垂體腺瘤細(xì)胞的胞核中，陽性表現(xiàn)為胞核染成棕黃色或棕褐色，背景不著色。連續(xù)觀察5 個(gè)高倍鏡視野，計(jì)數(shù)100 個(gè)腫瘤細(xì)胞，取陽性細(xì)胞數(shù)均值，以百分?jǐn)?shù)表示，得出ki?67增殖細(xì)胞指數(shù)（ki?67LI）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)處理采用SPSS 19.0 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析軟件系統(tǒng)進(jìn)行。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，比較采用t檢驗(yàn)以及方差分析；計(jì)數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)表示，比較采用卡方檢驗(yàn)；兩組數(shù)據(jù)相關(guān)程度采用相關(guān)分析，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般結(jié)果

本組研究中33 例患者中有6 例出現(xiàn)內(nèi)分泌癥狀（表現(xiàn)為閉經(jīng)泌乳6 例、肢端肥大1 例），幾乎所有患者均出現(xiàn)壓迫癥狀（頭痛或頭暈11 例、視力視野改變25 例）。2 例患者沒有臨床癥狀，由體檢發(fā)現(xiàn)。隨訪時(shí)間為6~11 年，共有復(fù)發(fā)病人16 例。

2.2 腫瘤復(fù)發(fā)與ESM?1 表達(dá)

復(fù)發(fā)組垂體腺瘤較未復(fù)發(fā)組垂體腺瘤具有更高的ESM?1 表達(dá)，復(fù)發(fā)組ESM?1 分值為1.84±0.77，未復(fù)發(fā)組垂體腺瘤ESM?1 表達(dá)分值為1.53±0.41，兩組垂體腺瘤ESM?1 蛋白表達(dá)分值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.75，P<0.01）。復(fù)發(fā)組垂體腺瘤患者首次發(fā)病與復(fù)發(fā)時(shí)垂體瘤ESM?1 的表達(dá)相當(dāng)（1.59±0.66vs.1.84±0.77，P=0.54）。

2.3 復(fù)發(fā)垂體瘤ESM?1表達(dá)與疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系

ESM?1 表達(dá)與 KI?67 表達(dá)明顯相關(guān)（P=0.02）。ESM?1 表達(dá)與患者年齡、腫瘤直徑、P53 沒有發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)。本組共有男性患者12 例，ESM?1 表達(dá)分值為1.75±0.50，女性患者19 例，ESM?1 表達(dá)分值為1.56±0.57，兩者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.34）。患者腫瘤最大直徑為（34.33±9.24）cm，腫瘤最大直徑與ESM?1 表達(dá)分值之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.22）。33 例患者腫瘤P53 表達(dá)陽性比與ESM?1 表達(dá)之間無明顯相關(guān)性（P=0.78）。見表1。

表1 垂體腺瘤復(fù)發(fā)ESM?1 表達(dá)的相關(guān)因素分析

3 討 論

雖然垂體腺瘤組織學(xué)上為良性腫瘤，但有一部分腫瘤可表現(xiàn)出侵襲性，向鞍上、海綿竇內(nèi)及蝶竇內(nèi)等結(jié)構(gòu)生長，手術(shù)治療的難度較大，無論是經(jīng)顱還是經(jīng)鼻蝶切除均有可能殘留部分腫瘤，從而導(dǎo)致首次外科治療后的復(fù)發(fā)。大部分垂體腺瘤復(fù)發(fā)時(shí)間在3~5 年［13］，但也有部分垂體腺瘤在術(shù)后甚至30 年才復(fù)發(fā)［14］。

圖2 復(fù)發(fā)患者垂體瘤ki?67 陽性表達(dá) ×100

圖3 復(fù)發(fā)患者垂體瘤p53 陽性表達(dá) ×100

研究證明，血管內(nèi)皮在包括炎癥、凝血、血管生成、腫瘤侵襲、感受器與受體相互影響以及多種介質(zhì)的分泌等過程中均扮演著重要的角色。ESM?1，是一種由內(nèi)皮細(xì)胞分泌的內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子。它的本質(zhì)是一種由165 個(gè)氨基酸及一條單皮膚素磷酸鏈組成的皮膚素磷酸根蛋白多糖。因在正常情況下，ESM?1 的表達(dá)主要局限于人體的肺、腎及胃腸道組織中，而在其它組織中表達(dá)量很低，而在敗血癥及多種腫瘤患者的血液中，ESM?1 的表達(dá)量呈現(xiàn)明顯的增高。Bechard 等［15］人研究發(fā)現(xiàn)ESM?1 具有調(diào)節(jié)干細(xì)胞生長因子的促進(jìn)有絲分裂行為的作用。而在具體腫瘤中ESM?1 表達(dá)與腫瘤惡性程度及患者預(yù)后的關(guān)系方面，人們做了很多研究。Grigoriu 等發(fā)現(xiàn)在肺癌患者中，血清中ESM?1水平與患者整體生存期及發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的概率有明確聯(lián)系，并且ESM?1低水平組的患者比ESM?1高水平組的患者有著更長的生存時(shí)間［5］。van't Veer等人發(fā)現(xiàn)在乳腺癌中RNDOCAN 與另一個(gè)70 基因標(biāo)簽共同作為早期遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物［16］。同時(shí)，ESM?1 可能通過誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲在乳腺癌細(xì)胞的腫瘤發(fā)生中起關(guān)鍵作用［17］。在同屬中樞神經(jīng)系統(tǒng)的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，免疫組化染色陰性的腫瘤患者平均生存期為16.8個(gè)月，而免疫組化染色陽性的腫瘤患者平均生存期為10.8 個(gè)月，兩者之間存在明顯差異，這或許可以解釋ESM?1的表達(dá)是否反映膠質(zhì)母細(xì)胞瘤血管重建的問題以及ESM?1 表達(dá)水平是否可以作為腫瘤復(fù)發(fā)的標(biāo)志［10］。通過以上研究可以看出，ESM?1 的表達(dá)不僅在腫瘤發(fā)生等病理過程中至關(guān)重要，在腫瘤的預(yù)后及復(fù)發(fā)過程中也扮演著重要的角色。

ESM?1 基因不僅可以作為腫瘤血管內(nèi)皮的標(biāo)志物，更可以作為治療的靶點(diǎn)［4，18］。例如，位于腫瘤血管的ESM?1 的催化因子的定位就為基因治療提供了框架，另外調(diào)節(jié)腫瘤血管內(nèi)皮上ESM?1 表達(dá)的細(xì)胞外因子及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)旁路也可能在治療過程中起到關(guān)鍵性作用。