杜 超，卓秋琪

1.山東羅欣藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司(山東 臨沂 276000)

2.深圳萬樂藥業(yè)有限公司(廣東 深圳 518000)

鹽酸苯達(dá)莫司汀，4-{5-[雙-(2-氯乙基)氨基]-1-甲基-2-苯并咪唑基}-丁酸鹽，是水溶性雙功能烷化藥物。其機(jī)制是通過烷基化，使DNA的單鏈與雙鏈交聯(lián)，干擾DNA的功能與合成，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。鹽酸苯達(dá)莫司汀合成是20世紀(jì)60年代一位德國科學(xué)家提出，并在苯丁酸氮芥的基礎(chǔ)上進(jìn)行改造，從而擁有3個(gè)活性基團(tuán)，其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)使其具有烷基化和抗代謝雙重治療作用[1-5]。雖然目前國內(nèi)多家醫(yī)藥公司已對鹽酸苯達(dá)莫司汀進(jìn)行仿制與研究。但其使用與推廣的程度卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。相對于其它化療藥物，鹽酸苯達(dá)莫司汀及其制劑產(chǎn)品價(jià)格更加低廉，在醫(yī)藥市場的競爭下更具優(yōu)勢[6-13]。

目前鹽酸苯達(dá)莫司汀相關(guān)研究主要涉及藥理、臨床療效以及體內(nèi)代謝的研究而體外質(zhì)量研究的相關(guān)報(bào)道較少。同時(shí)，在本產(chǎn)品的制備工藝中，殘留溶劑是檢驗(yàn)成品質(zhì)量優(yōu)劣的一個(gè)重要指標(biāo)。在殘留溶劑檢驗(yàn)方法中，氣相色譜法(GC)具有準(zhǔn)確度高、分析速度快、操作簡便且檢測數(shù)據(jù)直觀、清晰等優(yōu)勢。所以建立測定鹽酸苯達(dá)莫司汀中殘留溶劑的頂空氣相色譜法(HS-GC)，以便有效檢測其殘留量情況，確保產(chǎn)品安全性[14-18]。

1 儀器與試劑

1.1主要儀器電子天平(METTLER TOLEDO，型號：XP205)；氣相色譜儀(Agilent Technologies Inc，型號：Agilent 7890A)。

1.2主要試劑鹽酸苯達(dá)莫司汀(批號：Y191201、Y191202、Y191203，廠家：深圳萬樂藥業(yè)公司)；二甲基亞砜(Fisher Chemical，批號：170606)；甲醇(Fisher Chemical，批號：182704)；乙醇(Merck，批號：K50144627815)；二氯甲烷(OCEANPAK ALEXATIVE CHEMICAL，批號：Di0010798)乙酸乙酯(Fisher Chemical，批號：166509)；四氫呋喃(Avantor Performance Materials，批號：0000186814)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件Agilent DB-624毛細(xì)管柱為色譜柱；流速1.0 mL/min；分流比10∶1；起始溫度40 ℃，維持4 min，以30 ℃/min的速率升溫至180 ℃，維持10 min；檢測器為火焰離子化檢測儀(FID)；檢測器溫度250 ℃；進(jìn)樣口溫度220 ℃；平衡溫度80 ℃，平衡時(shí)間30 min。

2.2溶液的制備

2.2.1 供試品溶液 取鹽酸苯達(dá)莫司汀0.2 g，置頂空瓶中，加二甲基亞砜(DMSO)2 mL溶解，即得。

2.2.2 對照品溶液 分別稱取甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯與四氫呋喃各適量，加DMSO稀釋制成每1 mL中含甲醇300 μg、乙醇500 μg、二氯甲烷60 μg、乙酸乙酯500 μg、四氫呋喃72 μg的混合貯備溶液。取1 mL貯備液至10 mL量瓶中，并用DMSO定容至刻度，即得。

2.3專屬性試驗(yàn)和系統(tǒng)適用性分析按“2.2.1”項(xiàng)制備對照品溶液，取空白溶劑(即DMSO)和對照品溶液各2 mL，分別置頂空瓶中，密封，記錄圖譜，考察系統(tǒng)適用性和測定方法的專屬性(表1，圖1～2)，分離度>1.5即為合格。甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯與四氫呋喃5種有機(jī)溶劑在確定的毛細(xì)管氣相色譜條件下獲得良好地分離，溶劑DMSO不存在干擾5種殘留溶劑測定的成分，樣品中其它成分也不影響相應(yīng)5種殘留溶劑的檢測結(jié)果。各相鄰色譜峰的分離度分別為9.84、13.74、19.36、2.80、52.20；5種有機(jī)溶劑的理論塔板數(shù)分別為14 867、21 328、38 620、143 959、147 040。

圖1 溶劑DMSO氣相典型色譜圖

圖2 對照品溶液氣相典型色譜圖

表1 對照品溶液氣相數(shù)據(jù)

2.4線性、定量限、檢測限分析按“2.2.2”項(xiàng)制備混合溶劑貯備溶液，依次精密量取0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 mL，分別置于10 mL量瓶中，定容至刻度，取2 mL置頂空瓶中，密封，分析，結(jié)果顯示各殘留溶劑在各濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，見表2。按“2.2.2”項(xiàng)制備混合溶劑貯備溶液，取上述各貯備溶液，逐級稀釋，當(dāng)S/N≥10時(shí)，即為定量限，當(dāng)S/N≥3時(shí)，即為檢測限，見表2。其試驗(yàn)結(jié)果符合測定結(jié)果。

表2 5種殘留溶劑線性關(guān)系、定量限、定量限試驗(yàn)結(jié)果

2.5準(zhǔn)確度分析精密稱取樣品1.0 g共9份，分別至10 mL量瓶中，分別精確移取0.8、0.8、0.8、1.0、1.0、1.0、1.2、1.2、1.2 mL線性貯備液(含甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃分別為3.01，5.01，0.61，5.01，0.73 mg/mL)至各量瓶中，定容至刻度。取2 mL置頂空瓶中，密封，分析，各殘留溶劑的RSD在0.40%～0.90%之間，符合準(zhǔn)確度的要求，見表3。

表3 鹽酸苯達(dá)莫司汀回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.6精密度

2.6.1 日內(nèi)、日間精密度 按“2.2”項(xiàng)下制備混合溶劑貯備溶液，取2 mL置頂空瓶中，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄圖譜，連續(xù)3 d，同法操作，日內(nèi)精密度(共3 d)5種殘留溶劑的RSD分別為0.52%、0.78%、1.14%、1.13%、1.08%，符合日內(nèi)精密度RSD<2.0%的要求，見表4～6。

表4 日內(nèi)精密度試驗(yàn)結(jié)果(第1 d)

表5 日內(nèi)精密度試驗(yàn)結(jié)果(第2 d)

表6 日內(nèi)精密度試驗(yàn)結(jié)果(第3 d)

2.6.2 重復(fù)性 精密稱取本品約1.0 g，共6份，分別置于10 mL量瓶中，并依次加入“2.2.2”項(xiàng)下混合對照品貯備液各1 mL，混勻并定容至刻度。量取供試液2 mL，頂空進(jìn)樣，記錄圖譜，結(jié)果顯示，各殘留溶劑的RSD均<2.0%，重復(fù)性良好，見表7。

表7 鹽酸苯達(dá)莫司汀重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.7耐用性分析將原始色譜條件中的一項(xiàng)改動，柱溫設(shè)定為(40±2) ℃，流速調(diào)為(1.0±0.2)mL/min；進(jìn)樣口溫度設(shè)定為(220±10) ℃，分流比設(shè)定為(10±2)∶1；檢測器溫度設(shè)定為(250±10)℃；頂空瓶平衡溫度設(shè)定為(80±5)℃；將原始色譜條件中的色譜柱DB-624(320 μm×30 m，0.18 μm)更換為ZB-624(530 μm×30 m，3.00 μm)，然后對樣品進(jìn)行測定，結(jié)果顯示當(dāng)設(shè)定的色譜條件略有變化時(shí)，各成分相對保留時(shí)間，理論塔板數(shù)基本穩(wěn)定，且各成分分離度良好，該法耐用性良好，見表8。

表8 鹽酸苯達(dá)莫司汀耐用性分析

2.8供試品中殘留溶劑的測定按“2.1”項(xiàng)下色譜條件與測定法，進(jìn)行測定，結(jié)果顯示3批供試品中各殘留溶劑均未檢出，此法適用于鹽酸苯達(dá)莫司汀的殘留溶劑的檢查。

3 討論

化學(xué)原料藥的合成過程中不可避免會使用各種有機(jī)溶劑溶解各種反應(yīng)原料，有時(shí)選擇合適的溶劑還可在產(chǎn)品精制過程提高產(chǎn)量、決定藥物的純度、晶型。然而，有機(jī)溶劑殘留在藥物中，如果超出安全閾值時(shí)，就會對人體產(chǎn)生危害。根據(jù)該方法的檢測結(jié)果，原料藥合成過程中使用的有機(jī)溶劑均未檢出，符合中國藥典對有機(jī)殘留物的要求，可為藥品的生產(chǎn)上市提供有效技術(shù)支持。

對于色譜柱的選擇，本次測定中因5種有機(jī)溶劑極性相差較大，且為使待測溶劑得到最大兼容和讓系統(tǒng)適應(yīng)性得到最優(yōu)化，故選擇中性色譜柱(DB-624)。

對于平衡溫度的選擇，為了兼顧效率和靈敏度，一般選擇被測有機(jī)溶劑沸點(diǎn)偏高的溫度作為平衡溫度。本實(shí)驗(yàn)5種溶劑，沸點(diǎn)約在39.75～78.5 ℃，本研究選擇了80 ℃作為平衡溫度。平衡時(shí)間，只需所有溶劑峰面積增加并趨于平緩時(shí)即可；對于空白溶劑的選擇，為了準(zhǔn)確測定各殘留溶劑含量，需選擇原料藥(API)和待測溶劑能夠完全溶解的溶劑，并且不干擾其他色譜峰。DMSO具有極性高、沸點(diǎn)高、熱穩(wěn)定性好，可溶于大多數(shù)有機(jī)物質(zhì)。同時(shí)，在測定時(shí)并不干擾其他主成分，因此選擇DMSO作為溶劑。

本實(shí)驗(yàn)建立的HS-GC準(zhǔn)確、靈敏，可用于鹽酸苯達(dá)莫司汀中殘留溶劑的測定。