楊少青，邵春艷，周 彬，宋泉江，王曉杜*，宋厚輝*，姜 勝*

(1.浙江農(nóng)林大學(xué)動物科技學(xué)院、動物醫(yī)學(xué)院，杭州 311300； 2.浙江省畜禽綠色生態(tài)健康養(yǎng)殖應(yīng)用技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，杭州 311300； 3.動物健康互聯(lián)網(wǎng)檢查技術(shù)浙江省工程實(shí)驗(yàn)室，杭州 311300)

壬基酚(nonylphenol，NP)是一種非離子表面活性劑，在工、農(nóng)業(yè)產(chǎn)品中應(yīng)用廣泛[1]。但其帶來的污染問題不容忽視，在多個(gè)來自世界各地區(qū)的環(huán)境樣本中都檢出較高水平的NP[2-3]，同時(shí)，大量研究發(fā)現(xiàn)，NP具有雌激素樣效應(yīng)，除了會產(chǎn)生生殖毒性外，同樣會對肝、腎、神經(jīng)系統(tǒng)等多種器官造成損傷[4-7]。番茄紅素(lycopene，LYC)是一種類胡蘿卜素家族的異戊二烯類化合物，具有極強(qiáng)的抗氧化活性，是迄今為止自然界存在的抗氧化性最強(qiáng)的類胡蘿卜素[8-10]。大量流行病學(xué)調(diào)查及試驗(yàn)研究證實(shí)，LYC具有抗氧化、抗炎癥、活化免疫系統(tǒng)、解毒及預(yù)防和治療癌癥等功效，且至今尚未發(fā)現(xiàn)毒副作用[11-13]。然而，目前尚無研究評估LYC干預(yù)NP亞慢性毒性作用。因此，本試驗(yàn)通過建立LYC干預(yù)小鼠NP亞慢性中毒試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，探究LYC對NP造成的小鼠脾損傷的保護(hù)機(jī)制，為LYC的應(yīng)用和NP中毒的防護(hù)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物與藥品試劑

清潔級ICR小鼠(40只，雌雄各半，體重18～23 g)購自杭州子源實(shí)驗(yàn)動物科技有限公司，實(shí)驗(yàn)動物合格證號為20200514Aabz0105999491。壬基酚(GR，純度≥99%)購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；番茄紅素(UV≥98%)和玉米油均購自北京索萊寶科技有限公司；抗氧化指標(biāo)(T-AOC、SOD、CAT、GSH-Px和MDA)檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所；免疫細(xì)胞因子(IL-2、IFN-γ和TNF-α)ELISA檢測試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司；Akt、p-Akt、p53、Bcl-2、Bax，β-actin的一抗購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，羊抗兔和羊抗鼠的二抗購自美國Jackson ImmunoResearch公司。

1.2 藥品配置

根據(jù)課題組前期試驗(yàn)結(jié)果(未發(fā)表)和參考文獻(xiàn)[14]，將小鼠NP亞慢性中毒劑量和番茄紅素干預(yù)劑量分別定為150 和5 mg·kg-1。按照每10 g體重0.1 mL的灌胃量，稱取適量NP溶解于相應(yīng)體積玉米油中，配制成30 mg·mL-1NP溶液，番茄紅素使用玉米油配制成1 mg·mL-1溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組

40只清潔級ICR小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，雌雄各半：對照組(control group，CON)每天8:30經(jīng)口灌服玉米油0.1 mL，2 h后經(jīng)口灌服玉米油0.1 mL；中毒組(nonylphenol group，NPG)每天8:30經(jīng)口灌服玉米油0.1 mL，2 h后經(jīng)口灌服150 mg·kg-1壬基酚溶液；番茄紅素對照組(lycopene group，LCG)每天8:30經(jīng)口灌服5 mg·kg-1番茄紅素，2 h后經(jīng)口灌服0.1 mL玉米油；番茄紅素干預(yù)組(lycopene+ nonylphenol group，LNG)每天8:30經(jīng)口灌服5 mg·kg-1番茄紅素，2 h后經(jīng)口灌服150 mg·kg-1壬基酚溶液。所有實(shí)驗(yàn)動物雌雄分籠飼養(yǎng)，每晚21:00禁食，自由飲水，按試驗(yàn)計(jì)劃連續(xù)灌胃30 d，每5 d稱重1次，根據(jù)體重變化調(diào)整各藥物灌服量。試驗(yàn)結(jié)束后各組小鼠確保不少于8只。

1.4 樣品采集

各組小鼠經(jīng)口灌服藥物30 d后，于第31天8:30準(zhǔn)確稱量小鼠體重。稱重后小鼠進(jìn)行頜下靜脈采血0.5 mL，用于檢測外周血免疫因子水平。安樂死后，小鼠開腹，采集脾準(zhǔn)確稱重后將脾分為3份，分別用于脾組織顯微結(jié)構(gòu)測定、抗氧化指標(biāo)測定和凋亡通路蛋白水平測定。

1.5 平均日增重及脾體系數(shù)測定

按如下方法計(jì)算日均增重和脾體系數(shù)：日均增重(g·d-1)=(試驗(yàn)后體重-試驗(yàn)前體重)/試驗(yàn)天數(shù)；脾體系數(shù)=脾重量/試驗(yàn)后體重×100%。

1.6 脾組織顯微結(jié)構(gòu)測定

取適量脾組織至于10%甲醛溶液中固定，常規(guī)脫水，石臘包埋，制備切片，HE染色后光學(xué)顯微鏡下觀察脾顯微結(jié)構(gòu)變化。

1.7 外周血免疫細(xì)胞因子測定

取適量血清，按照試劑盒說明書采用ELISA法，測定血清中IL-2，IFN-γ和TNF-α的濃度。

1.8 抗氧化指標(biāo)測定

取適量脾組織與冰浴生理鹽水混合后通過組織破碎儀制備成10%勻漿，3 000 r·min-14 ℃離心15 min，取上清-80 ℃?zhèn)溆谩Ｆ⒔M織勻漿分別按照各抗氧化指標(biāo)試劑盒的說明書進(jìn)行操作，最后用酶標(biāo)儀測定血清和脾中各抗氧化指標(biāo)的含量。

1.9 脾中凋亡通路相關(guān)蛋白測定

蛋白提?。喝?80 ℃凍存的脾組織，冰上解凍后，剪取稱重50 mg組織，放入預(yù)冷的玻璃勻漿器，加入200 μL裂解液和5 μL蛋白酶抑制劑PMSF，冰浴研磨至充分裂解，冰上靜置5 min；移入1.5 mL離心管中，超聲持續(xù)10 s 5次，間隔4次，每次10 s；4 ℃ 12 000 r·min-1離心5 min。離心后上清即為脾組織全蛋白提取物。

蛋白濃度測定及樣品制備：利用BCA試劑盒測定脾組織蛋白提取物濃度。根據(jù)濃度上樣體積定為20 μg每15 μL上樣液，加入3 μL蛋白上樣緩沖液(5X)和PBS。沸水浴10 min，冷卻后分裝，-80 ℃保存。

蛋白含量表達(dá)檢測：取15 μL變性蛋白樣本，通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳后，采用濕轉(zhuǎn)法將目的蛋白從凝膠轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，隨后用5%脫脂奶粉室溫孵育2 h；封閉結(jié)束后，用TBST緩沖液洗膜3次，每次10 min。洗膜結(jié)束后，將膜置于已稀釋好相應(yīng)倍數(shù)的一抗中4 ℃孵育過夜；一抗孵育結(jié)束后，再次用TBST緩沖液洗膜3次，每次10 min。洗膜結(jié)束后，將膜置于相同種屬的二抗中室溫孵育1 h；孵育結(jié)束后，第3次用TBST緩沖液洗膜3次，每次10 min。洗膜結(jié)束后，在膜上滴加ECL顯色液放入凝膠成像系統(tǒng)中曝光成像。以β-actin為內(nèi)參蛋白，用Image J軟件進(jìn)行蛋白條帶灰度值的分析，最終計(jì)算出目的蛋白相對表達(dá)量。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)表示為“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”，使用GraphPad Prism 8.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)制圖，試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，運(yùn)用T檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)配對差異分析，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠體重增長系數(shù)及脾體系數(shù)

試驗(yàn)過程中，各組實(shí)驗(yàn)小鼠均未出現(xiàn)死亡，各組小鼠精神狀態(tài)、食欲、采食量以及排便等狀況未有明顯異常，但與CON小鼠比較，NPG小鼠日均增重顯著降低(P<0.05)，而與CON小鼠比較，LCG小鼠和LNG小鼠日均增重?zé)o顯著性差異(P>0.05)；與NPG小鼠比較，LNG小鼠日均增重顯著升高(P<0.05，圖1A)。各組實(shí)驗(yàn)小鼠脾體系數(shù)結(jié)果顯示，與CON小鼠比較，NPG小鼠和LNG小鼠脾體系數(shù)顯著升高(P<0.05)，其余各組間無顯著性差異(P>0.05，圖1B)。

*表示與CON相比差異顯著(P<0.05)；#表示與NPG比較差異顯著(P<0.05)。下同* Means significant different versus CON; # Means significant different versus NPG. The same below圖1 番茄紅素干預(yù)對NP染毒小鼠體重增長(A)及脾體系數(shù)(B)的影響Fig.1 Effect of lycopene on body weight gain(A)and spleen/body coefficient(B)of mice exposed to NP

2.2 LYC對NP亞慢性中毒小鼠脾組織結(jié)構(gòu)的影響

如圖2所示，NPG小鼠脾小結(jié)中可見生發(fā)中心擴(kuò)張(黑色箭頭)，伴有大量淋巴細(xì)胞凋亡，核碎裂(黃色箭頭)；紅髓中可見較大量的髓外造血細(xì)胞(紅色箭頭)(圖2B)，損傷嚴(yán)重；LNG小鼠脾小結(jié)邊緣帶增厚(黑色箭頭)；紅髓中可見較多髓外造血細(xì)胞(黃色箭頭)，伴有多核巨細(xì)胞數(shù)量少量增多(紅色箭頭)(圖2C)，損傷輕微；LCG小鼠脾紅髓白髓分界清晰，脾小結(jié)形狀規(guī)則、淋巴細(xì)胞數(shù)量豐富；紅髓中可見少量髓外造血細(xì)胞(黑色箭頭)(圖2D)與CON小鼠脾結(jié)構(gòu)無明顯差異。

A～D分別為CON、NPG、LNG和LCG小鼠脾組織切片圖Histological section of mouse spleen: A. CON; B. NPG; C. LNG; D. LCG圖2 番茄紅素干預(yù)對NP染毒小鼠脾組織結(jié)構(gòu)的影響(100×)Fig.2 Effect of lycopene on spleen tissue structure of NP exposed mice(100×)

2.3 LYC對NP亞慢性中毒小鼠血清中細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α的影響

如圖3所示，與CON比較，NPG小鼠血清中細(xì)胞因子IL-2顯著降低(P<0.05)，細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-α極顯著降低(P<0.01)；經(jīng)過LYC干預(yù)后，與NPG小鼠比較，LNG小鼠血清中細(xì)胞因子IL-2極顯著升高(P<0.01)，細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-α顯著升高(P<0.05)。

A.各組小鼠血清IL-2濃度；B.各組小鼠血清IFN-γ濃度；C.各組小鼠血清TNF-α濃度。**表示與CON比較差異極顯著(P<0.01)；##表示與NPG比較差異極顯著(P<0.01)。下同A. Serum IL-2 contents of mice in different group; B. Serum IFN-γ contents of mice in different group; C. Serum TNF-α contents of mice in different group. ** Means extremely significant different versus CON; ## Means extremely significant different versus NPG. The same below圖3 番茄紅素干預(yù)對NP染毒小鼠血清中細(xì)胞因子IL-2(A)、IFN-γ(B)和TNF-α(C)的影響Fig.3 Effect of lycopene on serum IL-2(A), IFN-γ(B) and TNF-α(C) of NP exposed mice

2.4 LYC干預(yù)對NP亞慢性中毒小鼠脾氧化損傷的影響

由圖4可知，與CON比較，NPG小鼠脾GSH-Px、CAT、SOD活性及總抗氧化能力(T-AOC)均顯著下降(P<0.05)；與CON比較，LNG小鼠脾GSH-Px、SOD活性均顯著下降(P<0.05)，而CAT活性和總抗氧化能力(T-AOC)無顯著性差異(P>0.05)；與NPG比較，LNG小鼠脾CAT、SOD活性及總抗氧化能力(T-AOC)均顯著升高(P<0.05)，但NPG小鼠脾GSH-Px活性與LNG比較則無顯著性差異(P>0.05)；與CON比較，LCG小鼠脾SOD活性顯著升高(P<0.05)。與CON比較，NPG小鼠脾MDA含量顯著升高(P<0.05)；與NPG相比，LNG小鼠脾MDA含量顯著下降(P<0.05)；LCG和LNG小鼠脾MDA含量與CON比較無顯著性差異(P>0.05)。

圖4 番茄紅素干預(yù)對NP染毒小鼠脾氧化應(yīng)激的影響Fig.4 Effects of lycopene on oxidative stress in spleen of NP exposed mice

2.5 LYC干預(yù)對NP亞慢性中毒小鼠凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

由圖5可知，與CON比較，NPG小鼠脾p53、Bax蛋白的表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)，Bcl-2、Akt、p-Akt蛋白的表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)，LCG小鼠脾p53、Bax蛋白的表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)，Bcl-2、p-Akt、Akt蛋白的表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)；與NPG比較，LNG和LCG組小鼠脾p53、Bax表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)，LNG和LCG組小鼠Bcl-2、p-Akt、Akt蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)。

A.番茄紅素干預(yù)對NP染毒小鼠脾凋亡相關(guān)蛋白p53/Bcl-2/Bax表達(dá)的影響；B、C、D、F、G.各蛋白表達(dá)情況灰度分析；E.番茄紅素干預(yù)對NP染毒小鼠脾凋亡相關(guān)蛋白Akt/p-Akt表達(dá)的影響A. Effects of LYC on apoptotic-related proteins p53/Bcl-2/Bax expression in NP-exposed mice; B-D, F, G. Quantitative analysis of protein expression; E. Effects of LYC on apoptotic-related proteins Akt/p-Akt expression in NP-exposed mice圖5 番茄紅素干預(yù)對NP染毒小鼠脾Akt/p53/Bcl-2通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Fig.5 Effects of lycopene on expression of related protein in Akt/p53/Bcl-2 signaling pathway in spleen of NP exposed mice

3 討 論

NP是一種典型的內(nèi)分泌干擾物，具有抗雄激素和雌激素樣作用[7]。關(guān)于NP毒性的研究主要集中在生殖毒性方面[10-11]，但有研究表明，NP還可以引起氧化應(yīng)激，并在多器官中產(chǎn)生具有高度活性的膜毒性中間產(chǎn)物[5-6]。番茄紅素是一種天然類胡蘿卜素抗氧化劑，是β-胡蘿卜素的異構(gòu)體，其在細(xì)胞培養(yǎng)和動物模型中清除自由基的能力已被證實(shí)[15]。因此，番茄紅素能夠降低氧化應(yīng)激介導(dǎo)的多種疾病風(fēng)險(xiǎn)[16]，而且有研究證實(shí)，番茄紅素可以保護(hù)黃曲霉毒素誘導(dǎo)的小鼠脾損傷[14]。盡管NP在環(huán)境中分布廣泛，對人和動物的健康危害極大，但LYC對NP毒性保護(hù)作用的具體機(jī)制尚未闡明。本研究旨在探討NP對脾損傷和氧化應(yīng)激的影響，以及應(yīng)用LYC能否逆轉(zhuǎn)NP誘導(dǎo)的小鼠脾組織氧化應(yīng)激和組織病理學(xué)改變及其變化機(jī)制。

本研究通過HE染色方法檢測了脾組織病理學(xué)變化，結(jié)果顯示，NP亞慢性中毒后小鼠脾出現(xiàn)病理學(xué)損傷，而經(jīng)過番茄紅素干預(yù)的小鼠脾組織病理學(xué)變化輕微，這一結(jié)果與小鼠日增重和脾體系數(shù)變化結(jié)果相關(guān)聯(lián)且保持一致，說明番茄紅素干預(yù)對NP導(dǎo)致的小鼠脾損傷具有保護(hù)作用。雖然對NP亞慢性暴露后小鼠日增重和脾體系數(shù)變化的檢測屬于非功能性評估，但日增重和脾體系數(shù)變化可以直觀體現(xiàn)出外源性毒物的毒性作用[17]。脾體系數(shù)變化結(jié)果顯示，NP亞慢性染毒小鼠相對于對照小鼠和LYC干預(yù)小鼠均有顯著性降低，說明亞慢性中毒劑量的NP對小鼠產(chǎn)生毒性效應(yīng)，而LYC可以對亞慢性中毒劑量NP暴露的小鼠產(chǎn)生保護(hù)作用。脾是機(jī)體最大的免疫調(diào)節(jié)器官，有研究表明NP能夠?qū)е迈庺~脾組織損傷[18]。本研究中，脾組織HE染色結(jié)果表明，NP亞慢性中毒導(dǎo)致小鼠脾小結(jié)中可見生發(fā)中心擴(kuò)張，伴有大量淋巴細(xì)胞凋亡，核碎裂，紅髓中可見較大量的髓外造血細(xì)胞，損傷嚴(yán)重。而經(jīng)過LYC干預(yù)處理的小鼠在NP亞慢性暴露后，脾邊緣帶增厚伴有多核巨細(xì)胞數(shù)量少量增多，損傷輕微。這一結(jié)果與小鼠體重增長率和脾體系數(shù)變化保持一致，兩組數(shù)據(jù)相互佐證說明LYC預(yù)處理可以保護(hù)小鼠抵抗NP亞慢性毒性效應(yīng)。

細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α與機(jī)體免疫狀態(tài)密切相關(guān)。脾是機(jī)體內(nèi)最重要的免疫器官，是淋巴細(xì)胞產(chǎn)生、成熟和存儲的場所，具有清除衰老紅細(xì)胞和參與免疫反應(yīng)等功能。脾中T細(xì)胞數(shù)量多少和活性可反映出細(xì)胞的免疫狀態(tài)，根據(jù)細(xì)胞表面蛋白表達(dá)情況，脾中T淋巴細(xì)胞可分為CD3+、CD4+和CD8+[19]。CD4+和CD8+T細(xì)胞可分泌細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-α，促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖和分化，破壞胞內(nèi)病原入侵，調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫應(yīng)答[20-21]。因此T淋巴細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子水平被認(rèn)為是細(xì)胞免疫的標(biāo)志。本研究發(fā)現(xiàn)，小鼠經(jīng)過NP灌胃后血清細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α濃度顯著降低，提示CD4+和CD8+T細(xì)胞的活化和增殖受到了抑制。CD4+和CD8+T細(xì)胞是介導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞免疫的主要細(xì)胞，所以提示小鼠NP亞慢性中毒后機(jī)體的細(xì)胞免疫功能受到抑制。本研究中LYC預(yù)處理可在一定程度上減輕NP誘導(dǎo)的小鼠血清IFN-γ濃度降低，提示LYC能夠有效減輕NP對小鼠脾免疫功能的抑制作用。此外單獨(dú)應(yīng)用LYC可不同程度提升小鼠血清中免疫細(xì)胞因子的水平，表明LYC具有較強(qiáng)的免疫增強(qiáng)活性。

MDA是氧化應(yīng)激引起脂質(zhì)過氧化的生化標(biāo)志物[22]，是指示機(jī)體氧化平衡狀態(tài)的最常用指標(biāo)。本研究顯示，NP亞慢性中毒劑量暴露的小鼠脾組織MDA顯著升高，說明小鼠在給予NP亞慢性中毒劑量后，體內(nèi)的氧化與抗氧化平衡狀態(tài)已經(jīng)被破壞。NP是親脂性化合物，因此細(xì)胞可能是脂質(zhì)過氧化的靶點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，NP暴露可對機(jī)體產(chǎn)生毒性，增加氧自由基和脂質(zhì)過氧化，抑制抗氧化酶活性，氧自由基的增加導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生膜脂過氧化，導(dǎo)致細(xì)胞損傷或死亡，并損害其周圍組織的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能[23]。經(jīng)LYC預(yù)處理小鼠給予NP亞慢性中毒劑量后，脾MDA水平比NPG小鼠顯著降低，說明LYC可以糾正機(jī)體氧化與抗氧化的失衡。試驗(yàn)中，LNG小鼠MDA水平降低的同時(shí)，脾總抗氧化能力(T-AOC)和抗氧化酶(SOD、CAT和GSH-Px)活性增強(qiáng)，說明抗氧化作用是LYC抵抗NP毒性作用機(jī)制之一。此外，LYC分子結(jié)構(gòu)中含有開鏈多烯或富電子芳香環(huán)結(jié)構(gòu)，使得LYC能有效地清除超氧陰離子自由基，具備極強(qiáng)的抗氧化能力[24-25]。因此，LYC對NP毒性的保護(hù)作用可能與其直接清除自由基和增強(qiáng)抗氧化系統(tǒng)的抗氧化能力有關(guān)。

生理狀態(tài)下的細(xì)胞凋亡是細(xì)胞程序性死亡，這一過程在控制細(xì)胞數(shù)量和維持細(xì)胞增殖活動中起著重要作用[26]。p53通路是經(jīng)典的內(nèi)源性細(xì)胞凋亡通路，p53蛋白是凋亡通路中關(guān)鍵蛋白，可以調(diào)節(jié)下游分子抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表達(dá)。Bcl-2可以阻止細(xì)胞色素C從線粒體中釋放，從而阻止半胱氨酸蛋白酶活化和啟動細(xì)胞凋亡[27]，Bax是一種促凋亡蛋白，在正常情況下以單體形式存在于細(xì)胞質(zhì)中，松散地附著在線粒體外膜上，受到刺激后，Bax進(jìn)入線粒體中促進(jìn)細(xì)胞色素C從線粒體中釋放，加速細(xì)胞凋亡[28]。因此Bcl-2和Bax平衡狀態(tài)的破壞可以促進(jìn)凋亡。除了p53通路蛋白外，Akt信號蛋白在細(xì)胞凋亡過程中也發(fā)揮關(guān)鍵作用，磷酸化的Akt可以抑制p53的表達(dá)[29]，此結(jié)果與本研究相吻合。本研究發(fā)現(xiàn)，NP暴露后磷酸化水平降低，而凋亡通路中關(guān)鍵分子p53蛋白的表達(dá)水平升高，說明NP可能抑制Akt的活化，上調(diào)p53蛋白表達(dá)水平，從促進(jìn)脾細(xì)胞凋亡發(fā)揮毒性效應(yīng)。在給予LYC處理后，檢測凋亡通路蛋白表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，與NPG小鼠相比，LNG小鼠的p53和Bax蛋白表達(dá)下調(diào)，而Bcl-2蛋白表達(dá)水平和Akt磷酸化水平上調(diào)，說明LYC可能通過激活A(yù)kt磷酸化，抑制p53/Bcl-2信號通路調(diào)節(jié)脾細(xì)胞的過度凋亡發(fā)揮保護(hù)作用。

4 結(jié) 論

LYC對NP誘導(dǎo)的小鼠脾損傷具有保護(hù)作用，這與LYC增強(qiáng)脾抗氧化能力，抑制脾細(xì)胞凋亡有關(guān)。