何金峰 張敏 邱玲玲 王文敏 周婷 徐小輝

[摘要] 目的 探討分析SOX17基因多態(tài)性和中國漢族人群顱內(nèi)動脈瘤（IA）的相關(guān)性。 方法 選擇2018年1月至2019年8月臺州市立醫(yī)院收治的顱內(nèi)動脈瘤患者161例作為IA組，選擇同期在臺州市立醫(yī)院健康體檢的健康志愿者150名作為對照組。采集兩組受試者外周靜脈血，通過PCR-熒光探針法檢測SOX17基因各位點基因型，分析SOX17基因各位點基因多態(tài)性與顱內(nèi)動脈瘤的相關(guān)性。 結(jié)果 兩組受試者rs9298506、rs1072737位點基因型分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。IA患者破裂組與未破裂組患者SOX17基因rs9298506位點基因型、rs1072737位點基因型及等位基因分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001），其中破裂組患者A等位基因分布顯著低于未破裂組，G等位基因分布顯著高于未破裂組（P<0.05）。 結(jié)論 SOX17基因rs9298506及rs1072737位點多態(tài)性與中國漢族人群顱內(nèi)動脈瘤發(fā)生及動脈瘤的破裂有關(guān)，其中rs9298506位點A基因是漢族人群顱內(nèi)動脈瘤的保護性因素，而rs1072737位點G等位基因是漢族人群顱內(nèi)動脈瘤的危險因素。

[關(guān)鍵詞] SOX17基因多態(tài)性;中國漢族人群;顱內(nèi)動脈瘤;相關(guān)性

[中圖分類號] R445.2? ? ? ? ? [文獻標(biāo)識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2022）02-0092-04

Correlation between SOX17 gene polymorphism and intracranial aneurysm in Chinese Han population

HE Jinfeng1? ?ZHANG Min2? ?QIU Lingling1? ?WANG Wenmin1? ?ZHOU Ting1? ?XU Xiaohui1

1.Department of Neurology， Taizhou Municipal Hospital， Taizhou? ?318000， China; 2.Vascular Surgery， Taizhou Hospital of Zhejiang Province Affiliated to Wenzhou Medical University， Taizhou? ?317000， China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between SOX17 gene polymorphism and intracranial aneurysm （IA） in Chinese Han population. Methods A total of 161 patients with intracranial aneurysm who were admitted to Taizhou Municipal Hospital from January 2018 to August 2019 were selected as the IA group， and 150 healthy volunteers who underwent physical examination in Taizhou Municipal Hospital during the same period were selected as the control group. Peripheral venous blood was collected from the two groups of subjects， and the genotypes of each SOX17 gene point were detected by the PCR-fluorescence probe method， and the correlation between the polymorphism of each SOX17 gene point and intracranial aneurysm was analyzed. Results The genotype distributions of rs9298506 and rs1072737 were significantly different between the two groups （P<0.05）. The distributions of rs9298506 genotype， rs1072737 genotype and allele of SOX17 gene in patients with IA in the ruptured group and the unruptured group had statistically significant differences （P<0.001）. The distribution of A allele in the ruptured group was significantly lower than that in the unruptured group， and the distribution of G allele was significantly higher than that of the unruptured group （P<0.05）. Conclusion The rs9298506 and rs1072737 polymorphisms of SOX17 gene are associated with the occurrence and rupture of intracranial aneurysms in Chinese Han population. The rs9298506 A gene is a protective factor of intracranial aneurysms in Han population， and the rs1072737 G allele is a risk factor for intracranial aneurysms in Han population.

[Key words] SOX17 gene polymorphism; Chinese Han population; Intracranial aneurysm; Correlation

顱內(nèi)動脈瘤（intracranial aneurysms， IA）是由于顱內(nèi)局部血管異常改變而導(dǎo)致顱內(nèi)動脈壁產(chǎn)生瘤樣突起，IA發(fā)病率為1%～8%，位居顱內(nèi)病變的第三位，IA的高病死率及高致殘率給家庭以及社會帶來了沉重的負擔(dān)[1]。目前一般認為IA是遺傳因素以及環(huán)境因素共同作用的產(chǎn)物，其病理機制復(fù)雜，由多個基因共同參與而形成[2]。目前已經(jīng)有學(xué)者在不同種族的IA患者中報道了多個SOX17基因突變位點，作為內(nèi)皮特異性轉(zhuǎn)錄因子，在正常的腦動脈內(nèi)皮細胞中具有強有力的表達，在血管內(nèi)皮細胞形成以及修復(fù)方面有著重要作用[3-4]。但SOX17基因多態(tài)性與顱內(nèi)動脈瘤的相關(guān)性僅限于日本人群以及歐美人群，且研究結(jié)果不一致，因此有必要針對不同人群進行研究認證[5-6]。本研究探討分析SOX17基因多態(tài)性與中國漢族人群顱內(nèi)動脈瘤的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月至2019年8月臺州市立醫(yī)院收治的顱內(nèi)動脈瘤患者161例作為IA組，患者均經(jīng)頭顱CT平掃篩查后全腦血管造影術(shù)（digital subtraction angiography， DSA）確診為顱內(nèi)動脈瘤，其中男75例，女86例，其中顱內(nèi)動脈瘤破裂者93例，未破裂者68例;平均年齡（58.37±12.75）歲，平均BMI（22.45±2.15）kg/m2。此外，選擇同期在臺州市立醫(yī)院健康體檢的志愿者150名作為對照組，男、女志愿者分別為68名、82名，平均年齡（56.97±13.42）歲，平均BMI（22.17±2.64）kg/m2。兩組的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。所有受試者均自愿簽署知情同意書，本研究經(jīng)臺州市立醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（審批號：LW035）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①IA組、對照組受試者均經(jīng)頭顱MRA或CTA或DSA影像學(xué)檢查明確診斷或排除顱內(nèi)動脈瘤和蛛網(wǎng)膜下腔出血者;②兩組受試者均為漢族。排除標(biāo)準(zhǔn)：①入院前由動脈瘤夾閉或血管內(nèi)治療者;②臨床資料不全者;③對造影劑過敏者;④合并精神疾病無法配合完成檢查者[7-8]。

1.2 標(biāo)本采集及基因組DNA提取

抽取三組受試者清晨空腹肘靜脈血5 ml，使用乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid， ETDA）抗凝，使用上海生工生物工程公司全血基因組提取試劑盒提取基因組DNA，將其置于-20℃保存待用。

1.3 PCR引物以及反應(yīng)條件

分別擴增SOX17基因rs10958409、rs9298506和rs1072737多態(tài)性位點基因序列。根據(jù)文獻設(shè)計引物，PCR反應(yīng)體系為25μL，內(nèi)涵緩沖液、引物、Taq酶以及dNTP等，采用Bio-Rad熱循環(huán)儀。PCR反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性4 min，95℃ 15 s、60℃ 1 min，共45個循環(huán)。

1.4 擴增產(chǎn)物檢測及分析

取PCR反應(yīng)產(chǎn)物10 μl，使用10 U BamHI內(nèi)切酶于37℃條件下酶切消化4 h，反應(yīng)終止后產(chǎn)物經(jīng)2.5%瓊脂糖凝膠電泳，以DNA片段長度標(biāo)準(zhǔn)物作為參考，在紫外燈下觀察結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料采用（x±s）表示，計數(shù)資料采用[n（%）]表示。計量資料比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。采用在線軟件SHEsis（http：//analysis.bio-x.cn/myAnalysis.php）檢驗基因型頻率分布是否符合哈迪-溫伯格（hardy-weinberg，HWE）平衡，若P>0.05，則符合HWE平衡，說明本實驗樣本群體代表性好，無選擇偏倚。多因素分析采用多因素logistic回歸，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SOX17基因3個單核苷酸多態(tài)性位點在兩組受試者中的基因型分布

經(jīng)Hardy-Weinberg遺傳平衡定律檢驗，各組的觀察數(shù)與預(yù)期數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），表明各基因頻率符合遺傳平衡，具有群體代表性。兩組受試者SOX17基因rs10958409位點基因型分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），而兩組受試者rs9298506、rs1072737位點基因型分布差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）。見表1。

2.2 SOX17基因3個單核苷酸多態(tài)性位點在兩組受試者中的等位基因分布

兩組受試者SOX17基因rs10958409位點等位基因分布無顯著差異（P>0.05），rs9298506以及rs1072737位點等位基因分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）。見表2。

2.3 IA患者破裂組與未破裂組rs10958409位點多態(tài)性分布比較

IA患者破裂組與未破裂組患者SOX17基因rs10958409位點基因型及等位基因分布比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

2.4 IA患者破裂組與未破裂組rs9298506位點多態(tài)性分布比較

IA患者破裂組與未破裂組患者SOX17基因rs9298506位點基因型及等位基因分布差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其中破裂組患者A等位基因分布顯著低于未破裂組（P<0.05）。見表4。

2.5 IA患者破裂組與未破裂組rs1072737位點多態(tài)性分布比較

IA患者破裂組與未破裂組患者SOX17基因rs1072737位點基因型及等位基因分布比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其中破裂組患者G等位基因分布顯著高于未破裂組（P<0.05）。見表5。

3 討論

顱內(nèi)動脈瘤是常見的一種腦部血管畸形，顱內(nèi)動脈瘤平時不易被發(fā)現(xiàn)，但動脈瘤破裂時急性發(fā)病對機體腦神經(jīng)具有極大的危害，該病發(fā)病機制復(fù)雜且與多種病理因素有關(guān)[9]。流行病學(xué)和遺傳學(xué)研究結(jié)果表明，顱內(nèi)動脈瘤的發(fā)病與多基因遺傳、環(huán)境因素以及相互作用有關(guān)，具有群體遺傳異質(zhì)性強、外顯率低、多基因共同參與等特征[10]。

近年來，顱內(nèi)動脈瘤的分子遺傳學(xué)機制研究成為熱點，各種與該病發(fā)病有關(guān)的染色體位點和候選基因相繼被報道[11-12]。通過全基因關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，與顱腦動脈瘤相關(guān)的基因功能主要涉及血管內(nèi)皮功能、細胞外基質(zhì)的維持和炎癥反應(yīng)等方面。SOX17基因作為一種內(nèi)皮特異性的轉(zhuǎn)錄因子，其染色體位置為8q11附近，在正常的腦內(nèi)動脈內(nèi)皮細胞中，SOX17基因有著強有力的表達，在血管內(nèi)皮細胞形成、脈管系統(tǒng)的發(fā)展修復(fù)方面具有重要作用[13-14]。國外學(xué)者針對不同種族的顱內(nèi)動脈瘤患者進行報道，具體對SOX17基因的rs10958409、rs9298506以及rs1072737三個變異位點進行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SOX17基因多態(tài)性與顱內(nèi)動脈瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。

本研究探討分析SOX17基因多態(tài)性和中國漢族人群顱內(nèi)動脈瘤的相關(guān)性，結(jié)果顯示，顱內(nèi)動脈瘤患者的rs9298506、rs1072737位點基因型及等位基因分布與健康體檢者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其中rs9298506位點G等位基因是漢族人群顱內(nèi)動脈瘤的保護性因素（OR=0.716，95%CI：0.472～0.893），而rs1072737位點G等位基因是漢族人群顱內(nèi)動脈瘤的危險因素（OR=1.318，95%CI：1.028～1.562），與國外學(xué)者相關(guān)研究報道結(jié)果基本一致[15-17]，上述提示在中國漢族人群中，SOX17基因多態(tài)性與顱內(nèi)動脈瘤的發(fā)病密切相關(guān)。

此外，本研究針對SOX17三個多態(tài)性位點進行分析，分析SOX17基因多態(tài)性位點與顱內(nèi)動脈瘤患者動脈瘤破裂的關(guān)系。結(jié)果顯示，顱內(nèi)動脈瘤患者中破裂的患者與未破裂的患者在SOX17基因rs10958409位點基因型及等位基因分布比較未見顯著差異。破裂的患者與未破裂的患者的SOX17基因rs9298506及rs1072737位點基因型及等位基因分布比較差異明顯。上述結(jié)果表明在顱內(nèi)動脈瘤患者中，SOX17基因的多態(tài)性表達與動脈瘤是否發(fā)生破裂有關(guān)，提示基因的表達調(diào)控不僅影響顱內(nèi)動脈瘤的發(fā)生，同時也可以影響顱內(nèi)動脈瘤的破裂，考慮可能與SOX17基因突變導(dǎo)致顱內(nèi)動脈血管內(nèi)皮細胞形成以及修復(fù)受到影響，從而影響顱內(nèi)動脈瘤的破裂[18-21]。

由于本研究納入樣本量較小，且多態(tài)性位點僅針對目前報道可知的三個位點進行分析，后續(xù)研究還需進一步擴大樣本量，并分析更多的可能潛在的多態(tài)性位點。

綜上所述，SOX17基因rs9298506及rs1072737位點多態(tài)性與中國漢族人群顱內(nèi)動脈瘤發(fā)生及動脈瘤的破裂有關(guān)，其中rs9298506G等位基因是漢族人群顱內(nèi)動脈瘤的保護性因素、而rs1072737位點G等位基因是漢族人群顱內(nèi)動脈瘤的危險因素。

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（收稿日期：2021-07-09）