韓湘云，楊德泉，覃愛(ài)桃，徐玉輝

(1.湘西宏成制藥有限責(zé)任公司，湖南 吉首 416000；2.湘西土家族苗族自治州食品藥品檢驗(yàn)所，湖南 吉首 416000)

復(fù)方桐葉燒傷油載于《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》第77冊(cè)[1]，是由桐葉和麻油組成的土家成藥，具有清熱解毒，消腫止痛，祛腐生肌的功效，用于面積小于29%的燒燙傷.桐葉為玄參科植物白花泡桐(Paulowniafortunei(Seem.) Hemsl.)的干燥葉.桐葉中含有熊果酸、齊墩果酸、3α-羥基-熊果酸、23-羥基-烏蘇酸、2α,3α,23-三羥基-12-烯-28-烏蘇酸、2α,3β,19,23-四羥基-12-烯-28-烏蘇酸、2α,3β,19,23-四羥基-12-烯-28-烏蘇酸、2α-羥基-齊墩果酸、棕櫚酸、落葉酸、木樨草素、洋芹素、β-谷甾醇、胡蘿卜苷、2α,3β,19β-三羥基-烏蘇酸-28-O-β-D-吡喃半乳糖苷、3β,28-二羥基-烏蘇烷等成分[2-6]，其中桐葉中熊果酸含量居白花泡桐植物其他部位之首[7].麻油為脂麻科植物脂麻(SesamumindicumL.)的成熟種子通過(guò)壓榨法得到的脂肪油，主要含有芝麻素、芝麻林素、甲氧芝麻素、羥基芝麻素、芝麻明酚、芝麻酚、不飽和脂肪酸、蛋白質(zhì)等成分[7-13].目前復(fù)方桐葉燒傷油標(biāo)準(zhǔn)的鑒別項(xiàng)，采用桐葉作為對(duì)照藥材進(jìn)行薄層色譜鑒別，其供試品溶液的制備需采用樣品加體積分?jǐn)?shù)0.5%氫氧化鈉溶液皂化，過(guò)濾，萃取的方法，而樣品經(jīng)皂化后，過(guò)濾時(shí)間一般需要6～8 h；此外，桐葉對(duì)照藥材溶液的制備，因需要經(jīng)歷回流、堿化、酸化、萃取等過(guò)程，故耗時(shí)較長(zhǎng).由此可以看出，當(dāng)前供試品溶液和對(duì)照藥材溶液的制備方法均存在制備時(shí)間較長(zhǎng)等不足之處，且當(dāng)前的鑒別方法僅可以鑒別處方中的桐葉組分.為優(yōu)化和完善復(fù)方桐葉燒傷油薄層色譜鑒別方法，進(jìn)一步提高檢驗(yàn)工作效率，本研究擬建立同時(shí)定性鑒別復(fù)方桐葉燒傷油中桐葉和麻油兩個(gè)處方組分的薄層色譜方法，旨在為復(fù)方桐葉燒傷油的質(zhì)量控制提供一定參考.

1 儀器、試藥和樣品

1.1 儀器與試藥

AUW220D電子天平(日本島津公司).GoodSee-10型薄層色譜成像儀(上海科哲生化科技有限公司).定量毛細(xì)管(美國(guó)Orunond Scientigic Co).薄層硅膠預(yù)制板分別購(gòu)于青島海洋化工有限公司(批號(hào)：2021年8月9日，10 cm×20 cm)、青島海浪干燥劑有限公司(批號(hào)：20210701，10 cm×20 cm)和Merck公司(批號(hào)：1.05626.0001，10 cm×20 cm).環(huán)已烷、乙醚、乙酸丁酯、冰醋酸、甲醇試劑的純度均為分析純，水為純化水.

1.2 實(shí)驗(yàn)樣品與對(duì)照品

1.2.1 實(shí)驗(yàn)樣品及來(lái)源 復(fù)方桐葉燒傷油由湘西宏成制藥股份責(zé)任有限公司提供，批號(hào)：20191101；20201003；20210901.

1.2.2 對(duì)照品及來(lái)源 熊果酸對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院(批號(hào)：110742-201823)，芝麻素對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院(批號(hào)：110742-201823).桐葉對(duì)照藥材由湘西宏成制藥股份有限責(zé)任公司提供.

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液制備

取樣品2 mL，加甲醇20 mL，搖振5 min，4 000 r/min條件下離心5 min，取上清液，水浴揮干甲醇，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液.

2.2 對(duì)照品溶液制備

2.2.1 對(duì)照藥材溶液 取桐葉0.5 g，甲醇20 mL，超聲處理10 min，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)右颐?5 mL溶解，用15 mL水萃取，分取乙醚層，揮干，殘?jiān)眉状? mL溶解，作為對(duì)照藥材溶液.

2.2.2 熊果酸對(duì)照品溶液 取熊果酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg熊果酸的溶液，作為對(duì)照品溶液.

2.2.3 芝麻素對(duì)照品溶液 取芝麻素對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg芝麻素的溶液，作為對(duì)照品溶液.

2.3 鑒別方法

參照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取供試品溶液2 μL，桐葉對(duì)照藥材溶液、熊果酸對(duì)照品溶液、芝麻素對(duì)照品溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷—乙醚—乙酸丁酯—冰醋酸(體積比20∶5∶4∶0.2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以體積分?jǐn)?shù)為10%的硫酸乙醇溶液，110 ℃下烘烤至斑點(diǎn)清晰，于日光下檢視(圖1).

1—桐葉藥材；2—熊果酸對(duì)照品；3—芝麻素對(duì)照品；4—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20191101)；5—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20201003)；6—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20210901).圖1 Merck公司硅膠G薄層色譜板展開(kāi)結(jié)果(溫度：18.8 ℃，濕度：46%)Fig. 1 Development Results of Merck Silica Gel G TCL Plate (Temperture:18.8C,Humidity:46%)

結(jié)果顯示，各斑點(diǎn)分離度好、斑點(diǎn)清晰.供試品色譜與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜在相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn).

2.4 耐用性考察

采用青島海洋化工有限公司和青島海浪干燥劑有限公司生產(chǎn)的薄層硅膠G板，分別在不同的溫度、濕度條件下，按2.3節(jié)的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與2.3節(jié)結(jié)果一致(圖2、圖3).

1—桐葉藥材；2—熊果酸對(duì)照品；3—芝麻素對(duì)照品；4—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20191101)；5—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20201003)；6—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20210901).圖2 青島海洋化工有限公司硅膠G薄層色譜板展開(kāi)結(jié)果(溫度：24.8 ℃，濕度：52%)Fig. 2 Unfolding Results of Silica Gel G TCL Plate of Qingdao Ocean Chemical Engineering Co.,LTD.(Temperture:24.8C,Humidity:52%)

1—桐葉藥材；2—熊果酸對(duì)照品；3—芝麻素對(duì)照品；4—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20191101)；5—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20201003)；6—復(fù)方桐葉燒傷油供試液(20210901).圖3 青島海浪干燥劑有限公司硅膠G薄層色譜板展開(kāi)結(jié)果(溫度：28.8 ℃，濕度：69%)Fig. 3 Unfolding Results of Silica Gel G TCL Plate of Qingdao Hailang Drying Agent Co.,LTD.(Temperture:28.8C,Humidity:69%)

圖2、圖3顯示，在不同品牌硅膠G薄層色譜板、不同溫度、不同濕度條件下，不同溶液的薄層色譜結(jié)果一致，表明本方法耐用性良好.

3 討論

復(fù)方桐葉燒傷油為油劑，本研究在制備其供試品溶液時(shí)，考慮熊果酸和芝麻素均溶于甲醇，故采用甲醇為提取溶劑，經(jīng)離心處理，分離油脂等成分，取甲醇溶液制備為供試品溶液.本研究在制備桐葉對(duì)照藥材溶液時(shí)，采用桐葉粉末加甲醇超聲處理，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)砸颐讶芙?因熊果酸和芝麻素均幾乎不溶于水，故本研究用水萃取除去其中雜質(zhì)，取乙醚層，揮干，殘?jiān)眉状既芙?，作為?duì)照藥材溶液.方法簡(jiǎn)便，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示色譜中主斑點(diǎn)明顯，雜質(zhì)斑點(diǎn)少.

本研究曾試用過(guò)4種展開(kāi)劑：①環(huán)已烷—三氯甲烷—乙酸乙酯—冰醋酸(體積比20∶5∶8∶0.5)；②環(huán)已烷—氯仿—乙酸乙酯—石油醚(60～90 ℃)(體積比20∶5∶8∶1)；③環(huán)已烷—乙醚—乙酸乙酯(體積比20∶5∶2)；④環(huán)已烷—乙醚—乙酸丁酯(體積比20∶5∶2).結(jié)果發(fā)現(xiàn)，①，②，③供試品溶液色譜中芝麻素斑點(diǎn)與相鄰斑點(diǎn)未達(dá)到完全分離，④熊果酸Rf低于0.1.最終本研究確定采用環(huán)已烷—乙醚—乙酸丁酯—冰醋酸(體積比20∶5∶4∶0.1)為展開(kāi)劑，結(jié)果顯示，采用此展開(kāi)劑后，供試品溶液色譜中各斑點(diǎn)分離度好、斑點(diǎn)清晰，且熊果酸Rf為0.45，芝麻素Rf為0.23.

4 結(jié)論

本研究建立的復(fù)方桐葉燒傷油薄層色譜鑒別方法操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性良好，方法可行.供試品溶液的薄層色譜中，熊果酸、芝麻素與其他成分完全分離，能夠同時(shí)鑒別處方中桐葉和麻油兩個(gè)組方成分，為控制復(fù)方桐葉燒傷油質(zhì)量提供了可靠的方法.