溫菲菲 何 雙 許曉陽 李揚(yáng)揚(yáng) 吳淑華

（濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東 濱州 256603）

0 引言

PI3K/AKT 通路作為重要途徑之一， 多類腫瘤的發(fā)生與其失調(diào)有關(guān)。 PI3KCA、PIK3CB 編碼的p110α、p110β 存在于機(jī)體內(nèi)， 當(dāng)其表達(dá)增多，PI3K/AKT 通路失調(diào)[1]。 在許多HPV 相關(guān)人類癌癥中，亦存在PI3K/Akt 途徑的失調(diào)。 Syrjanen 等人第一次發(fā)現(xiàn)部分食管癌的發(fā)生與HPV 有關(guān)[2]。 在高危HPV 不斷感染中，HPV E6/E7 的表達(dá)增加可能會(huì)干擾細(xì)胞周期控制，使pRb 失活，導(dǎo)致p16 表達(dá)增加。 因此，針對(duì) p16 表達(dá)的免疫組化（IHC）被作為診斷是否有HPV 感染的替代檢法[3]。

本研究在食管正常黏膜、鱗癌病例中，檢測(cè)p16、PI3Kp110α、p110β 蛋白的表達(dá)差異及相關(guān)性， 探討p16 與 PI3Kp110α、p110β 蛋白的作用，以期發(fā)現(xiàn)新的靶標(biāo)與思路指導(dǎo)食管鱗癌的治療。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集2014 年1 月至2015 年12 月于濱醫(yī)附院病理科根治切除的食管鱗癌病例137 例、 正常黏膜32例。 由2 位消化亞專科病理醫(yī)生參照《WHO 消化系統(tǒng)腫瘤分類》（2019 版）[4]，對(duì)其閱片分類。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)

應(yīng)用免疫組化染色， 一抗?jié)舛?PI3Kp110α （1∶150）、p110β（1∶250）、p16 應(yīng)用即用型工作液。 陰性對(duì)照為 PBS；p16、PI3Kp110α、p110β 指標(biāo)的陽性對(duì)照分別為宮頸癌切片、正常腦組織切片、扁桃體切片。

1.2.2 結(jié)果判斷

p16 陽性在鱗癌細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中；PI3Kp110α、p110β 陽性在鱗癌的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)。 對(duì)所染切片，鏡下觀察10 個(gè)高倍視野。 p16 指標(biāo)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)：鱗癌細(xì)胞陽性表達(dá)面積≥70%判定為陽性。 PI3Kp110α、p110β 的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)如表 1 所示。

表1 PI3Kp110α、p110β 的免疫組化評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)表

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 23.0 軟件。 正常食管黏膜與鱗癌組間蛋白的表達(dá)采用 χ2檢驗(yàn)；p16、PI3Kp110α、p110β 與各臨床病理因素間、 不同蛋白間的表達(dá)的相互關(guān)系均應(yīng)用Spearman 相關(guān)性分析； 顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為P≤0.05。

2 結(jié)果

2.1 p16、PI3Kp110α、p110β 在食管鱗癌與正常黏膜中的表達(dá)差異

采用 χ2檢驗(yàn)，p16、PI3Kp110α、p110β 在鱗癌中的表達(dá)，與正常黏膜相比，表達(dá)量顯著增多（P＜0.05，見圖1、表2）。

圖1 p16、PIKp110α、p110β 在食管鱗癌中的表達(dá)

表2 p16、PI3Kp110α、p110β 在食管鱗癌中的表達(dá)差異

2.2 食管鱗癌中 p16、PI3Kp110α、p110β 與臨床特征的相關(guān)性

在食管鱗癌中，p16 的表達(dá)與發(fā)病部位、 分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。 其中相對(duì)于食管中段與下段，頸段與上段p16 表達(dá)高，差異均具有顯著性（P<0.05）。PI3Kp110α、p110β 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)（P＜0.05，見表 3）。

表3 p16、PI3Kp110α、p110β 與臨床特征的相關(guān)性

2.3 p16 與 PI3Kp110α、p110β 表達(dá)的關(guān)系

p16 與PI3Kp110α 在食管鱗癌中有顯著相關(guān)性（r=0.177，P=0.039）； 然而，p16 與 PI3Kp110β 在食管鱗癌中的表達(dá)無相關(guān)性（P=0.760，見表4）。

表4 p16 與 PI3Kp110α、p110β 表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

食管癌是一種極具侵襲性的腫瘤，由于缺乏特定的初始癥狀，通常在晚期診斷，5 年生存率僅為15%～34%[5，6]。 食管鱗癌的治療主要是手術(shù)輔以放化療，但對(duì)于臨床分期Ⅲ~Ⅳ期的患者，預(yù)后仍然較差[7]。 因此，研究能夠預(yù)警食管癌發(fā)生的分子指標(biāo)迫在眉睫。 本實(shí)驗(yàn)中，鱗癌組織中p16 蛋白的陽性率為34.3%，明顯高于食管正常黏膜的陽性率0， 表明食管鱗癌的發(fā)生與HPV 的感染有關(guān)。 同時(shí)分析顯示，p16 與食管部位有明顯相關(guān)性。 筆者認(rèn)為，食管頸段與上段距離外環(huán)境近， 更易感染HPV。 分化程度高的食管鱗癌病例中，p16 的表達(dá)高，提示在HPV 感染誘導(dǎo)的腫瘤中，分化程度較高。 在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中，p16 的表達(dá)高，HPV 感染以后，腫瘤分化程度較高，發(fā)展相對(duì)緩慢，進(jìn)而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率低。

HPV 的持續(xù)感染，病毒多量復(fù)制，會(huì)異常激活多種信號(hào)途徑[8，9]。在本實(shí)驗(yàn)中，與正常黏膜相比，PI3Kp110α、p110β 在食管鱗癌中表達(dá)增多， 提示在食管鱗癌中，PIK3CA、CB 被激活。研究亦顯示，PI3Kp110α、p110β 與食管鱗癌的轉(zhuǎn)移有關(guān)。 筆者認(rèn)為，PIK3CA、CB 蛋白異常表達(dá)會(huì)使PI3K/AKT 途徑失衡，失衡后的PI3K/AKT途徑可導(dǎo)致mTOR 的異常表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，導(dǎo)致腫瘤的轉(zhuǎn)移。 p16 蛋白的表達(dá)均與PIK3CA 呈正相關(guān)，當(dāng)食管發(fā)生HPV 的持續(xù)感染時(shí)，HPV 感染刺激 IL-17 誘導(dǎo) Mcl-1 突變，導(dǎo)致 PIK3CA 的激活，PI3K途徑失衡，誘導(dǎo)了腫瘤進(jìn)展。

總之，在食管鱗癌的發(fā)生中，會(huì)有HPV 的感染，同時(shí)存在PI3K/AKT 信號(hào)途徑失衡。聯(lián)合檢測(cè)PIK3CA和p16 可能有助于優(yōu)化食管鱗癌的治療。