周艷艷，文皓頲，楊倚天，徐麗瑛，鄭國安，張俊明

1.江西省醫(yī)療器械檢測中心，江西省藥物安全評價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330029；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌330004

過敏性結(jié)膜炎（allergic conjunctivitis，AC）是眼科臨床上較常見的疾病，可見眼部過敏產(chǎn)生的一些刺激性癥狀，如眼癢并伴有流淚、畏光、刺痛、分泌物等，結(jié)膜水腫同時(shí)眼瞼腫脹，血管擴(kuò)張或出血可導(dǎo)致眼結(jié)膜發(fā)紅［1-2］。過敏性結(jié)膜炎通常分為幾類亞型［3］：季節(jié)性結(jié)膜炎（SAC）、常年性結(jié)膜炎（PAC）、春季性角結(jié)膜炎（VKC）、巨乳頭性結(jié)膜炎（GPC）和特應(yīng)性角結(jié)膜炎（AKC），臨床上以季節(jié)性和常年性較為常見。季節(jié)性角結(jié)膜炎患者經(jīng)常伴隨著出現(xiàn)相關(guān)的鼻部癥狀，誘發(fā)鼻結(jié)膜炎，特應(yīng)性嚴(yán)重時(shí)，最終會導(dǎo)致視力下降，對患者日常生活產(chǎn)生不良后果?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)臨床仍主要以眼局部用藥緩解癥狀為主［4］。目前市售的鹽酸氮卓斯汀滴眼液為原研進(jìn)口藥品，用于治療過敏性結(jié)膜炎，效果良好。本試驗(yàn)通過在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察各組實(shí)驗(yàn)兔經(jīng)眼分別給藥鹽酸氮卓斯汀滴眼液（企業(yè)自制）、賦形劑及原研藥品對實(shí)驗(yàn)兔眼的刺激反應(yīng)及反應(yīng)程度，比較之間的區(qū)別，客觀評價(jià)委托方生產(chǎn)的鹽酸氮卓斯汀滴眼液可能存在的毒性反應(yīng)［5-6］。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 供試藥物

供試品：鹽酸氮卓斯汀滴眼液（企業(yè)自制），規(guī)格：8 mL∶4 mg，由江西珍視明藥業(yè)有限公司提供，批號：181102；賦形劑：不含鹽酸氮卓斯汀陰性溶液，規(guī)格：8 mL/支，由江西珍視明藥業(yè)有限公司提供，批號：190501；原研藥品：鹽酸氮卓斯汀滴眼液，規(guī)格：6 mL∶3 mg（0.05%），由Tubilux Pharma S.p.A 生產(chǎn)，批號：7M663A；空白對照：0.9%氯化鈉注射液，規(guī)格：250 mL∶2.25 g，生產(chǎn)單位：江西科倫藥業(yè)，批號：D19040605-2。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

參照《藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》［6］，本次實(shí)驗(yàn)采用普通級新西蘭兔，自長沙市天勤生物技術(shù)有限公司購入，生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2014-0010。雌雄各半，12～15 w，2.0～2.6 kg。購入動(dòng)物飼養(yǎng)于江西省藥物研究所安全評價(jià)中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號：SYXK（贛）2018-0008。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑

1.3.1 儀器LYL-Ⅱ裂隙燈（鳳凰光學(xué)儀器集團(tuán)）；JS15-01 電子天平（上海浦春計(jì)量儀器有限公司）。

1.3.2 試劑熒光素鈉（批號：C10530874，上海麥克林生化科技有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法［5］與結(jié)果

2.1 給藥前眼檢查

給藥前1 d 用裂隙燈顯微鏡檢查實(shí)驗(yàn)兔的雙眼，有存在眼及周圍組織刺激癥狀、角膜缺陷和臉結(jié)膜、球結(jié)膜損傷的動(dòng)物不能用于試驗(yàn)。

2.2 分組

將符合“2.1”要求的實(shí)驗(yàn)兔12 只分為3 組，賦形劑組、供試品組和原研藥品組，每組各4 只，雌雄各半，按組別左眼分別給予賦形劑（不含鹽酸氮卓斯汀陰性溶液）、鹽酸氮卓斯汀滴眼液（企業(yè)自制）和原研的鹽酸氮卓斯汀滴眼液，各組右眼均給予0.9%氯化鈉注射液作為空白對照，具體見表1。

表1 鹽酸氮卓斯汀滴眼液實(shí)驗(yàn)兔眼刺激性試驗(yàn)分組設(shè)計(jì)

2.3 給藥方式

用左右同體對照法，將滴眼液棄去2～3 滴，拉開實(shí)驗(yàn)兔左眼下眼瞼呈杯狀，各組實(shí)驗(yàn)兔分別滴入相應(yīng)賦形劑溶液、鹽酸氮卓斯汀滴眼液和原研藥品各1 滴，然后輕合眼瞼約10 s，實(shí)驗(yàn)兔右眼均滴入0.9%氯化鈉注射液1 滴，輕合眼瞼約10 s。2 次/d，每次給藥間隔為6 h 左右，連續(xù)給藥28 d。

2.4 觀察項(xiàng)目

（1）給藥期間，每日給藥前用1%熒光素鈉及裂隙燈對兔眼部進(jìn)行檢查，觀察角膜、結(jié)膜、虹膜和其他損傷，并按表2 進(jìn)行評分。（2）停藥后，于末次給藥后1、2、4、24、48 和72 h 用1%熒光素鈉及裂隙燈對兔眼部進(jìn)行檢查，觀察角膜、結(jié)膜、虹膜和其他損傷，并按《藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》［6］標(biāo)準(zhǔn)（見表2）進(jìn)行評分。如存在損傷，再延長21 d 的觀察期。（3）在給藥前1 d 和停藥后的觀察期（1、2、4、24、48 和72 h）對實(shí)驗(yàn)兔給藥部位進(jìn)行拍照。（4）按表2 的要求，將每只動(dòng)物所有的評分分值相加得總分，將總分與動(dòng)物數(shù)求均值，即得最后分值。按《藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》［6］中的標(biāo)準(zhǔn)（見表3）判斷其刺激程度。

表2 眼刺激反應(yīng)分值標(biāo)準(zhǔn)

表3 眼刺激性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

2.5 結(jié)果

2.5.1 給藥前眼檢實(shí)驗(yàn)兔在給藥前雙眼裂隙燈檢測，未發(fā)現(xiàn)眼及眼周組織的刺激癥狀、角膜缺陷及結(jié)膜損傷等異常情況，可用于試驗(yàn)，如圖1 所示。

圖1 給藥前24 h眼檢結(jié)果

2.5.2 多次給藥試驗(yàn)眼檢三組實(shí)驗(yàn)兔左眼分別滴入鹽酸氮卓斯汀滴眼液、賦形劑和原研藥品，局部用藥及停藥后，用藥部位結(jié)膜、虹膜及角膜均未發(fā)現(xiàn)異常，眼瞼無水腫，未見異常分泌物，眼刺激反應(yīng)平均積分均為0。實(shí)驗(yàn)兔右眼滴入空白溶液作為自身對照，局部用藥部位結(jié)膜、虹膜及角膜均未發(fā)現(xiàn)異常，眼瞼無水腫，未見異常分泌物，眼刺激反應(yīng)平均積分均為0，結(jié)果見圖2、表4。

圖2 末次給藥后72 h眼檢結(jié)果

表4 鹽酸氮卓斯汀滴眼液實(shí)驗(yàn)兔眼刺激性試驗(yàn)結(jié)果評價(jià)表（n=4）

3 討論

過敏性結(jié)膜炎是一種變態(tài)反應(yīng)性的眼表疾病，近年來，隨著生活環(huán)境和氣候的變化，化妝品的廣泛應(yīng)用，其發(fā)病率呈逐年增長的趨勢［7］。該病首要的治療就是快速緩解患者的眼癢、眼紅等不適癥狀。氮卓斯汀滴眼液可在10～20 min 內(nèi)顯著緩解過敏性結(jié)膜炎導(dǎo)致的眼睛瘙癢、分泌物滲出、血管舒張，并在治療7 d 后抑制炎癥細(xì)胞浸潤和黏附分子-1的表達(dá)?？菇M胺藥物也是治療變態(tài)性結(jié)膜炎的常用藥物，氮卓斯汀是對組胺H1 受體具有高親和力的酞菁酮衍生物，對H2 受體也具有一定的親和力［8］，通過拮抗呼吸道H1 受體，氮卓斯汀可阻斷大鼠肥大細(xì)胞、兔和人嗜堿性細(xì)胞對組胺的釋放，對白三烯和血小板聚集因子產(chǎn)生拮抗活性，從而抑制肥大細(xì)胞及其他細(xì)胞介導(dǎo)的過敏反應(yīng)。另外還可抑制體內(nèi)IgE 介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)［9-10］。鹽酸氮卓斯汀可明顯改善結(jié)膜炎，能有效改善炎癥因子指標(biāo)水平，促進(jìn)淚膜恢復(fù)。

刺激性是非口服途徑給藥制劑對局部產(chǎn)生的毒性，為臨床前安全性評價(jià)的組成部分。眼刺激性是觀察滴眼液是否引起眼及其周圍黏膜的紅腫、充血、變性等炎癥性改變。實(shí)驗(yàn)兔眼睛對于藥物刺激性較為敏感，因此，通過兔眼結(jié)膜囊內(nèi)給予受試物，對于滴眼液安全性評價(jià)，其是重要內(nèi)容之一［11］。本實(shí)驗(yàn)參照《藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》［6］和Draize 試驗(yàn)［5］，以新西蘭兔為研究對象，通過比較委托方提供的受試物與受試物所使用的輔料（賦形劑）對實(shí)驗(yàn)兔眼的刺激性，以判斷受試物和賦形劑是否會產(chǎn)生刺激性和產(chǎn)生刺激性的原因；對委托方生產(chǎn)的鹽酸氮卓斯汀滴眼液與原研藥品對實(shí)驗(yàn)兔的眼刺激進(jìn)行試驗(yàn)和評價(jià)，比較受試物與原研藥的刺激性反應(yīng)癥狀是否一致，評估受試物臨床用藥的安全性。本研究給藥方式、給藥量及頻次與臨床擬用方案一致，采用結(jié)膜囊內(nèi)給藥，每天2 次，1 滴/次。受試物在臨床上為長期應(yīng)用藥物，根據(jù)指導(dǎo)原則［6］，選擇最長的給藥時(shí)間28 d。結(jié)果表明，受試物、賦形劑及原研藥品三者的刺激記分均為0，與自身對照無明顯的區(qū)別，按刺激判斷標(biāo)準(zhǔn)受試物對實(shí)驗(yàn)兔眼無刺激性，提示同條件下三者對實(shí)驗(yàn)兔眼均未發(fā)現(xiàn)與給藥有關(guān)的刺激性反應(yīng)，停藥后也均未觀察到與藥物有關(guān)的刺激性反應(yīng)，委托方生產(chǎn)的鹽酸氮卓斯汀滴眼液與原研藥品局部用藥安全性均較好，具有廣闊的臨床使用前景。