李偉生，謝敏靜

(珠海市人民醫(yī)院高欄港醫(yī)院，廣東 珠海 519050)

下呼吸道感染是兒科患者的常見病，高居5歲以下兒童死亡原因的第二位[1]。采用呼吸道感染患兒的病原檢測能識別呼吸道感染病原的流行現(xiàn)狀和分布特征，為臨床診斷和精準(zhǔn)治療提供科學(xué)依據(jù)。與傳統(tǒng)病原學(xué)、核酸分離培養(yǎng)檢測相比，基于液相芯片技術(shù)的核酸檢測具有效率高、通量大的優(yōu)勢[2]。本研究對我院收治的312例下呼吸道感染患兒采用液相芯片技術(shù)進(jìn)行13種呼吸道病原體核酸檢測，以期為呼吸道感染的臨床診斷提供科學(xué)參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年11月—2020年10月珠海市人民醫(yī)院高欄港醫(yī)院收治的312例下呼吸道感染患兒為研究對象，男176例，女136例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合下呼吸道感染診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)臨床檢查體內(nèi)炎性指標(biāo)升高，胸片顯示肺部病變；(3)患兒家屬知情同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)非感染原因致胸片顯示肺部病變；(2)肝腎功能不全；(3)合并其他嚴(yán)重器質(zhì)性病變。

1.2 檢測方法

入院當(dāng)日采集患兒咽拭子，置于2 mL保存液中4℃保存，于24 h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室檢測。用核酸提取試劑提取患兒的DNA和RNA，提取完成后，將待檢核酸與13項(xiàng)呼吸道病原體核酸檢測試劑盒(RNA/DNA)擴(kuò)增試劑混合后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，操作按照擴(kuò)增試劑盒說明書進(jìn)行。進(jìn)行DNA 檢測的病原體為：SP、CMV、博卡病毒(hBoV)、MC、Hi、ADV、MP、BP；進(jìn)行RNA檢測的病原體為：RSV、鼻病毒(HRV)、副流感病毒(HIV)、INF-A、乙型流感病毒(INF-B)。將已擴(kuò)增樣本進(jìn)行雜交檢測，開啟Luminex Magpix液相芯片檢測平臺，在核酸雜交試劑加入擴(kuò)增產(chǎn)物，通過PCR儀行雜交顯色反應(yīng)。顯色結(jié)束后，將樣品放入孔板加熱模塊，運(yùn)行待檢測批次并完成檢測。

1.3 觀察指標(biāo)

將患兒按年齡劃分標(biāo)準(zhǔn)分為<1歲組、1～3歲組、3～5歲組和≥5歲組，比較13種呼吸道病原體的檢出情況、混合感染及不同年齡組間病原體的檢出情況。混合感染率=病原體檢出2種及以上病原體陽性例數(shù)/該病原體檢出陽性總數(shù)[3]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)(%)表示，行χ2或秩和檢驗(yàn)；P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 13種呼吸道病原體檢出情況

在312例患兒中，有215例患兒至少有一種呼吸道病原體檢測陽性，陽性檢出率為68.91%，其中檢出單一病原體陽性患兒134例，占42.94%，檢出兩種及兩種以上病原體陽性患兒81例，占25.96%。檢出率最高的3種病原體為SP、CMV和RSV。13種呼吸道病原體檢出中，混合感染率排名前5位的病原體為MP、BP、Hi、INF-A和MC，見表1。

表1 13種呼吸道病原體檢出情況 例

2.2 不同年齡組的病原體檢出情況

不同年齡組的SP、CMV、RSV、INF-A、ADV陽性檢出率差異顯著(P<0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。低年齡段患兒常見的病原體為CMV、RSV，SP的檢出率隨患兒年齡的增長而升高。高年齡段患兒常見的病原體為INF-A、ADV。不同年齡組間(<1歲組、1～3歲組、3～5歲組、≥5歲組)其他病原體的陽性檢出率差異不顯著(P>0.05)，見表2。

表2 不同年齡組病的病原體檢出情況 例(%)

3 討論

建立一種能同時(shí)檢測多種呼吸道病原體的快速有效的檢測技術(shù)對兒童呼吸道感染的臨床診斷具有十分重要的臨床價(jià)值。本次檢測結(jié)果顯示，215例患兒中至少有一種呼吸道病原體檢測陽性，陽性檢出率為68.91%，說明基于液相芯片技術(shù)的核酸檢測具有較高的陽性檢測率。SP、CMV和RSV是檢出率最高的3種病原體，提示細(xì)菌和病毒是本地區(qū)呼吸道感染患兒的主要病原體，臨床診斷應(yīng)在參照血常規(guī)、X線檢查的基礎(chǔ)上重視病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，科學(xué)合理使用抗生素[4]。檢出兩種及兩種以上病原體陽性患兒81例，占25.96%，提示呼吸道感染患兒存在多重呼吸道病原體混合感染的情況?；旌细腥韭逝琶?位的病原體為MP、BP、Hi、INF-A和MC，可能是因?yàn)樵l(fā)病原體感染后損壞了呼吸道黏膜的防護(hù)屏障，其他病原體入侵更容易，或者是患兒感染后體質(zhì)變差，自身抵抗力下降。

不同年齡組間SP、CMV、RSV、INF-A、ADV的陽性檢出率存在顯著差異。低年齡段患兒常見的病原體為CMV、RSV，可能與低年齡患兒自身免疫力相對較低有關(guān)[5]。SP的檢出率隨年齡增長而升高，高年齡段患兒常見的病原體為INF-A、ADV，可能受機(jī)體呼吸道正常菌群建立過程的影響。

基于液相芯片技術(shù)的核酸檢測效率高、通量大，13種呼吸道病原體核酸檢測能快速有效地滿足呼吸道病原體檢測的需要，具有檢測簡單、敏感度高等優(yōu)點(diǎn)，可用于輔助診斷兒童呼吸道感染的相關(guān)疾病。在臨床診斷時(shí)要注意不同年齡組間病原體的差異和多重病原體感染。