朱明明， 潘晶晶， 柯 軻

（微康益生菌（蘇州）股份有限公司，江蘇蘇州215200）

凝結(jié)芽孢桿菌（Bacillus coagulans）是飼用益生菌之一 ，該菌屬于硬（或厚）壁菌門(mén)腸道乳酸菌， 是一類(lèi)可產(chǎn)芽孢的特殊乳酸菌 （楊立華等，2010）。凝結(jié)芽孢桿菌的芽孢體形態(tài)具有很強(qiáng)的耐受性，可經(jīng)受飼料制粒加工過(guò)程中的高溫存活。到達(dá)腸道后也能迅速萌發(fā)， 將飼料中的碳水化合物通過(guò)生物發(fā)酵作用轉(zhuǎn)化為乳酸， 從而降低腸道內(nèi)環(huán)境的pH、刺激動(dòng)物腸道的蠕動(dòng)，其還可通過(guò)分泌抑菌素抑制其他有害菌繁殖，起到與傳統(tǒng)乳酸菌相同的保健功效（鄒梅等，2017）。此外，凝結(jié)芽孢桿菌具有豐富的酶系， 生長(zhǎng)過(guò)程中可分泌多種消化酶（張韻等，2017）， 能通過(guò)生物酶解作用促進(jìn)大分子營(yíng)養(yǎng)的降解，有助于動(dòng)物對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)的消化。

隨著飼料“禁抗”政策的實(shí)施，斷奶仔豬腸道健康問(wèn)題備受關(guān)注， 如何改善斷奶所引起的一系列不良反應(yīng)成為養(yǎng)豬生產(chǎn)中的熱點(diǎn)問(wèn)題。 凝結(jié)芽孢桿菌作為一種微生態(tài)制劑， 在應(yīng)用實(shí)踐中的效果也備受行業(yè)關(guān)注。 本試驗(yàn)選用功能性菌株凝結(jié)芽孢桿菌BC66， 研究其對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、腸絨毛形態(tài)的影響， 旨在驗(yàn)證凝結(jié)芽孢桿菌BC66對(duì)斷奶仔豬腸道的保健作用， 為凝結(jié)芽孢桿菌的保健應(yīng)用及替抗產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)所用凝結(jié)芽孢桿菌BC66 由微康益生菌（蘇州）股份有限公司提供，該菌株分離自健康斷奶仔豬腸道，成品活菌含量為1.0×1011cfu/g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選取同批次體況相近的21日齡[杜×長(zhǎng)×大，（6.39±0.36）kg]斷奶仔豬 180 頭，隨機(jī)分為3 組，每組3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20 頭。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組分別在基礎(chǔ)日糧中 添 加 1.0×106、1.0×107cfu/g 凝 結(jié) 芽 孢 桿 菌BC66。 預(yù)飼期 3 d，正式期 14 d。 試驗(yàn)期間豬舍控溫，每天3 次投料飼喂、自由飲水，按常規(guī)飼養(yǎng)管理程序進(jìn)行接種免疫和衛(wèi)生消毒。 試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.3 樣品采集與指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定 豬只體重、統(tǒng)計(jì)投料量，計(jì)算平均日增重、平均日采食量、料肉比等指標(biāo)。 記錄統(tǒng)計(jì)所有處理組試驗(yàn)仔豬的腹瀉情況， 計(jì)算腹瀉率。

1.3.2 飼料養(yǎng)分表觀消化率 采用內(nèi)源指示劑法測(cè)定斷奶仔豬對(duì)飼料粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗纖維等養(yǎng)分的表觀消化率。 試驗(yàn)第21 天開(kāi)始，每組選取3 只體況相近的仔豬轉(zhuǎn)入代謝籠， 連續(xù)3 d 收集糞樣，冷凍保存。 待試驗(yàn)結(jié)束后，以重復(fù)組為單位測(cè)定各養(yǎng)分指標(biāo)的表觀消化率， 指標(biāo)測(cè)定在南京農(nóng)業(yè)大學(xué)完成。

1.3.3 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu) 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)， 每個(gè)重復(fù)組選取體重接近的健康仔豬進(jìn)行屠宰。取十二指腸、空腸各3 cm 樣品，經(jīng)生理鹽水沖洗、福爾馬林浸泡保存，再經(jīng)固定、脫水、石蠟包埋、切片，用HE染色后鏡檢觀察絨毛形態(tài)。 利用成像系統(tǒng)拍照，測(cè)量并記錄視野內(nèi)的絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度， 計(jì)算絨毛高度與隱窩深度比， 指標(biāo)測(cè)定在南京農(nóng)業(yè)大學(xué)完成。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 所用試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan’s 法進(jìn)行多重比較。 所有統(tǒng)計(jì)分析均以重復(fù)為試驗(yàn)單元，P < 0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 凝結(jié)芽孢桿菌BC66 對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響 由表2 數(shù)據(jù)可知， 斷奶仔豬日糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌BC66 對(duì)平均日采食量無(wú)顯著影響（P > 0.05）。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組腹瀉率和料肉比顯著降低（P < 0.05），試驗(yàn)Ⅱ組平均日增重顯著提高（P < 0.05）。 與試驗(yàn)Ⅰ組對(duì)比，試驗(yàn)Ⅱ組平均日增重提高3.9%，料肉比、腹瀉率分別降低2.9%、36.3%（P > 0.05）。

表2 凝結(jié)芽孢桿菌BC66 對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

2.2 凝結(jié)芽孢桿菌BC66 對(duì)斷奶仔豬養(yǎng)分表觀消化率的影響 由表3 數(shù)據(jù)可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組鈣表觀消化率顯著提高（P < 0.05），粗蛋白質(zhì)、粗脂肪等指標(biāo)無(wú)顯著性差異（P > 0.05）；試驗(yàn)Ⅱ組粗蛋白質(zhì)、 粗脂肪和鈣的表觀消化率均顯著提高（P < 0.05），但粗纖維和磷的消化率無(wú)顯著性差異（P > 0.05）。 與試驗(yàn)Ⅰ組相比，試驗(yàn)Ⅱ組粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和鈣的表觀消化率顯著提高（P <0.05），粗纖維、磷消化率無(wú)顯著差異（P>0.05）。

表3 凝結(jié)芽孢桿菌BC66 對(duì)斷奶仔豬養(yǎng)分表觀消化率的影響 %

2.3 凝結(jié)芽孢桿菌BC66 對(duì)斷奶仔豬腸絨毛形態(tài)的影響 由表4 數(shù)據(jù)可知，與對(duì)照組相比，日糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌BC66 可提高十二指腸及空腸部位的絨毛高度， 其中試驗(yàn)Ⅱ組腸絨毛高度顯著提高（P < 0.05）。 添加凝結(jié)芽孢桿菌 BC66 可顯著改善十二指腸隱窩深度、 絨腺比指標(biāo) （P <0.05），但對(duì)空腸隱窩深度和絨腺比無(wú)顯著性影響（P > 0.05）。 與試驗(yàn)Ⅰ組對(duì)比，高劑量添加凝結(jié)芽孢桿菌BC66 對(duì)十二指腸、 空腸的絨毛高度和隱窩深度影響均不顯著（P > 0.05）。

表4 凝結(jié)芽孢桿菌BC66 對(duì)斷奶仔豬腸絨毛形態(tài)的影響

3 討論

3.1 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響周映華等（2007）在斷奶仔豬日糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌，結(jié)果顯示試驗(yàn)組平均日增重得到顯著改善，料肉比指標(biāo)較對(duì)照組降低了8.96%。 崔錦等（2021）將含有凝結(jié)芽孢桿菌的復(fù)合微生態(tài)制劑應(yīng)用于斷奶仔豬日糧，也得到相似的試驗(yàn)結(jié)論。趙祖艷等（2021）在日糧中添加106cfu/g 凝結(jié)芽孢桿菌時(shí)，腹瀉率和料肉比顯著降低，達(dá)到與金霉素添加組相似的效果。 黃遵錫等（2020）添加凝結(jié)芽孢桿菌達(dá)到107cfu/g 水平時(shí)，仔豬日增重、采食量、料肉比、腹瀉率的改善效果也與抗生素組相當(dāng)。在攻毒試驗(yàn)?zāi)Ｐ椭校蓶|等（2021）用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)大腸桿菌腸毒素攻毒的斷奶仔豬進(jìn)行飼喂，可以顯著改善平均日增重、料肉比，減少腹瀉率，并能使空腸和盲腸食糜中乳酸桿菌數(shù)量得到提升，起到生長(zhǎng)改善作用。 蒲俊寧等（2018）則采用含凝結(jié)芽孢桿菌的復(fù)合菌劑對(duì)大腸桿菌攻毒斷奶仔豬進(jìn)行飼喂，也得到了相似的結(jié)論，甚至腹瀉率和腹瀉降低效果優(yōu)于抗生素組。

以上研究結(jié)論均表明凝結(jié)芽孢桿菌在斷奶仔豬腸道保健方面具有較好的益生功效。本試驗(yàn)中，添加凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)斷奶仔豬的平均日增重、料肉比、腹瀉率均有顯著改善，與上述結(jié)論一致，進(jìn)一步驗(yàn)證了凝結(jié)芽孢桿菌的促生長(zhǎng)效果。 并且結(jié)果表明，日糧中添加107cfu/g 凝結(jié)芽孢桿菌具有更好的改善效果。

3.2 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)斷奶仔豬消化的影響 趙祖艷等（2021）在仔豬日糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌，結(jié)果表明飼料總能和粗脂肪的表觀消化率顯著提高， 粗蛋白質(zhì)消化率也較對(duì)照組提高了2.5%，起到了促消化作用。 華洵璐等（2015）對(duì)斷奶仔豬飼喂含凝結(jié)芽孢的復(fù)合微生態(tài)制劑， 也得到了相似的試驗(yàn)結(jié)論。 吳夢(mèng)郡等（2019）則對(duì)飼喂凝結(jié)芽孢桿菌的仔豬回腸黏膜進(jìn)行了研究分析， 證實(shí)凝結(jié)芽孢桿菌可促進(jìn)腸道水、氨基酸、葡萄糖、鉀離子等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)，提升腸道吸收功能。王乙茹等（2018）將復(fù)合凝結(jié)微生態(tài)制劑應(yīng)用于生長(zhǎng)保育豬發(fā)現(xiàn)，飼料干物質(zhì)總能消化率指標(biāo)有顯著改善。本試驗(yàn)中日糧添加凝結(jié)芽孢桿菌組粗蛋白質(zhì)、 粗脂肪消化率顯著提升，與上述研究結(jié)論基本一致。同時(shí)試驗(yàn)結(jié)果表明， 凝結(jié)芽孢桿菌具有促進(jìn)鈣吸收的作用，這與王繼華等（2015）的試驗(yàn)結(jié)論相符，說(shuō)明產(chǎn)乳酸的凝結(jié)芽孢桿菌有利于日糧中鈣元素的利用。

3.3 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)斷奶仔豬腸絨毛形態(tài)的影響 完整的腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)和菌群結(jié)構(gòu)， 是飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)能高效吸收利用的前提。 日糧添加凝結(jié)芽孢桿菌有助于形成正常腸道微生物區(qū)系， 減少繼發(fā)炎癥的產(chǎn)生，對(duì)維持腸絨毛形態(tài)具有促進(jìn)作用。崔錦等（2021）用復(fù)合凝結(jié)芽孢菌劑飼喂斷奶仔豬發(fā)現(xiàn)，空腸、回腸絨毛高度，絨毛高度/隱窩深度均有顯著改善。柳成東等（2021）的研究同樣顯示，凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)空腸、回腸絨毛高度有提升作用，具有維持腸道正常形態(tài)和緩解腸道炎癥反應(yīng)的作用。 黃遵錫（2020）對(duì)斷奶仔豬飼喂凝結(jié)芽孢桿菌后，不僅空腸絨毛高度顯著增加，并且盲腸食糜乳酸菌數(shù)量顯著提升、二胺氧化酶含量降低，表明腸道損傷更少。 余魁等（2019）和 Wu 等（2018）的試驗(yàn)結(jié)論也與之類(lèi)似， 且結(jié)果表明高劑量添加凝結(jié)芽孢桿菌具有更好的改善效果。 本試驗(yàn)飼喂凝結(jié)芽孢桿菌， 對(duì)十二指腸的絨毛高度和隱窩深度均有顯著改善，起到了改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的功效。對(duì)照組絨腺比顯著高于試驗(yàn)組的原因， 主要是隱窩深度大幅減少導(dǎo)致， 推測(cè)與日糧應(yīng)激和微生物屏障缺失有關(guān)。 添加凝結(jié)芽孢可提高空腸段絨毛高度，形成更大的吸收表面積，與日增重提升結(jié)果一致。

4 結(jié)論

21 日齡斷奶仔豬日糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌BC66，可增加平均日增重，降低料肉比和腹瀉率，提高飼料中粗蛋白質(zhì)、粗脂肪以及鈣的消化率，改善十二指腸、空腸絨毛高度和隱窩深度，且在日糧中添加1.0×107cfu/g 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能、 養(yǎng)分表觀消化率和腸絨毛形態(tài)的改善效果更好，具有“替抗”應(yīng)用價(jià)值。