魏菁菁，丁進亞，王冬梅，馬 巧，劉 莉

中部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院漢口院區(qū)檢驗科，湖北武漢 430014

呼吸道感染是臨床最常見的疾病之一，90%以上的呼吸道感染由病毒感染引起，呈現(xiàn)一定的季節(jié)和地域分布特點[1-4]。7種常見呼吸道病毒為呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)、A、B型流感病毒(IFA、IFB)、副流感病毒(PIV)1、PIV2、PIV3。大量研究表明，各種急性呼吸道感染(ARTI)的呼吸道病毒檢出率與其年齡、檢測季節(jié)、氣候條件等因素有關(guān)[1-4]。本研究采集2018年1月至2019年9月3 545例ARTI患者咽拭子標(biāo)本，并對7種常見呼吸道病毒進行檢測和分析，為臨床ARTI診治及疾控部門對ARTI的防治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2019年9月因ARTI到中部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院漢口院區(qū)住院的患者作為研究對象，將出院時未診斷為ARTI的病例剔除。符合入選標(biāo)準(zhǔn)的ARTI患者共3 545例。其中男性2 144例、女性1 401例。ARTI患者按年齡段分為0～<7歲2 230例，7～<18歲606例，18～<46歲406例，46～<69歲162例，≥69歲141例。ARTI患者按檢測季節(jié)分為春季(3～5月)1 160例，夏季(6～8月)804例，秋季(9～11月)491例和冬季(12月至次年2月)1 090例。ARTI患者按照其疾病類型分為肺炎、支氣管肺炎類型ARTI患者1 925例，支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎類型ARTI患者595例，上呼吸道感染、扁桃體炎類型ARTI患者928例，哮喘類型ARTI患者97例。

1.2儀器與試劑 BX53型熒光顯微鏡(日本OLYMPUS公司)，7種呼吸道病毒檢測試劑盒(上海貝西生物有限公司)。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本收集 由臨床醫(yī)生使用試劑盒配套咽拭子經(jīng)患者鼻腔在鼻咽部處旋轉(zhuǎn)2～3圈獲取黏膜上皮細(xì)胞，并放入專用管加入1 mL生理鹽水立即送檢。若不能及時送檢，標(biāo)本則放在4 ℃冰箱保存。

1.3.2標(biāo)本處理與檢測 將浸在生理鹽水內(nèi)的鼻咽拭子標(biāo)本劇烈漩渦震蕩15 s，500×g離心10 min，加入1 mL磷酸鹽緩沖液(PBS)漩渦震蕩并以500×g離心10 min，棄去上清液，加入1 mL的PBS，并反復(fù)吹吸懸浮細(xì)胞層。每孔加入25 μL標(biāo)本懸浮液，風(fēng)干后加入冷丙酮固定10 min。加入鼠球蛋白熒光試劑，標(biāo)本片放入孵箱，37 ℃孵育20 min，浸入洗滌液反復(fù)清洗，再用去離子水沖洗。將多余的液體吸干，在固定有細(xì)胞的每孔加入1滴封固液，然后蓋上蓋玻片。在激發(fā)光490 nm，發(fā)射峰520 nm參數(shù)下，使用熒光顯微鏡觀察已染色并封固的標(biāo)本玻片。

1.3.3質(zhì)量控制與結(jié)果判斷 200倍顯微鏡下每視野找到≥2個綠色熒光細(xì)胞即為陽性，否則即為陰性。陰性細(xì)胞被Evans Blue染成紅色。視野中找到≥2個帶綠色熒光的陽性細(xì)胞，則判定標(biāo)本為陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。不同組間7種呼吸道病毒檢出率比較用卡方檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.13 545例ARTI患者中7種常見呼吸道病毒的檢出率和構(gòu)成比比較 3 545例ARTI患者中共檢出陽性標(biāo)本470例，陽性檢出率為13.26%，其中RSV檢出率最高，其次是PIV3。 RSV構(gòu)成比最高，其次是PIV3。見表1。

表1 7種常見呼吸道病毒的檢出率和構(gòu)成比比較

2.2不同性別ARTI患者之間7種常見呼吸道病毒檢出率比較 不同性別ARTI患者之間IFA和PIV1檢出率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其他5種常見呼吸道病毒檢出率在不同性別ARTI患者之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

2.3不同年齡段ARTI患者之間7種常見呼吸道病毒的檢出率比較 各年齡段ARTI患者之間7種常見呼吸道病毒總檢出率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。0～<7歲ARTI患者7種常見呼吸道病毒總檢出率高于其他年齡段，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。0～<7歲、7～<18歲ARTI患者以RSV和PIV3感染為主；18～<46歲ARTI患者以RSV、PIV3和IFB感染為主；46～<69歲ARTI患者以RSV和ADV感染為主；≥69歲ARTI患者以PIV3和IFB感染為主。各年齡段ARTI患者PIV2、PIV3和RSV檢出率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.4不同季節(jié)ARTI患者7種常見呼吸道病毒的檢出率比較 ARTI患者7種常見呼吸道病毒檢出率在冬季和春季較高，夏季和秋季較低，各季節(jié)ARTI患者7種常見呼吸道病毒總檢出率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。在冬季、春季和秋季中ARTI患者以RSV感染為主，檢出率分別是10.09%、6.11%和5.00%；夏季中ARTI患者以PIV3感染為主，檢出率為3.98%。除了ADV和PIV1以外，其他5種常見呼吸道病毒檢出率在各季節(jié)之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同性別、年齡、季節(jié)的ARTI患者7種常見呼吸道病毒檢出率比較[n(%)]

續(xù)表2 不同性別、年齡、季節(jié)的ARTI患者7種常見呼吸道病毒檢出率比較[n(%)]

2.5不同疾病類型的ARTI患者7種常見呼吸道病毒檢出率比較 各疾病類型的ARTI患者7種常見呼吸道病毒總檢出率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。和上呼吸道感染、扁桃體炎類型的ARTI患者7種常見呼吸道病毒檢出率相比，肺炎、支氣管肺炎，以及支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎類型的ARTI患者7種常見呼吸道病毒檢出率較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。哮喘類型的ARTI患者7種常見呼吸道病毒檢出率最低，和肺炎、支氣管肺炎類型，以及支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎類型7種常見呼吸道病毒檢出率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。除了哮喘類型以外，其他類型的ARTI患者中以RSV和PIV3感染為主，各疾病類型的ARTI患者RSV檢出率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同疾病類型的ARTI患者7種常見呼吸道病毒檢出率比較[n(%)]

3 討 論

ARTI發(fā)病率高、傳播快、流行廣，嚴(yán)重危害人類健康[5]。本研究結(jié)果顯示，3 545例患者中，7種常見呼吸道病毒陽性檢出標(biāo)本數(shù)為470例，檢出率為13.26%，與文獻[6-7]報道的檢出率結(jié)果相似，但是低于文獻[8-10]報道的檢出率結(jié)果。一方面是因為這些研究包括的病毒種類較多，除了7種常見呼吸道病毒以外，還包括鼻病毒/腸道病毒、人偏肺病毒、冠狀病毒、人卡博拉病毒、肺炎支原體、衣原體。目前呼吸道病毒檢測的方法包括分離培養(yǎng)鑒定、核酸檢測、抗體檢測、直接抗原檢測。分離培養(yǎng)鑒定雖然是病毒病原檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，但是由于時間較長不易操作，不利于及時指導(dǎo)臨床治療；此外病毒感染6 d以上才能產(chǎn)生IgM抗體，患者既往感染也會產(chǎn)生抗體檢測假陽性結(jié)果，因此核酸檢測和直接免疫熒光法都是目前臨床常用的呼吸道病毒檢測方法。有研究表明，與直接免疫熒光法相比，分子診斷對病毒的檢測更為靈敏和特異[4-5]，然而直接免疫熒光法仍然是國內(nèi)許多醫(yī)院使用的方法。本研究中引起ARTI的主要呼吸道病毒是RSV和PIV3，構(gòu)成比分別為44.89%和20.64%。與多數(shù)研究結(jié)果一致[3-4，11-12]。

本研究結(jié)果顯示，在0～<7歲、7～<18歲ARTI患者以RSV和PIV3感染為主；18～<46歲ARTI患者以RSV、PIV3和IFB感染為主；46～<69歲ARTI患者以RSV和ADV感染為主；≥69歲ARTI患者以PIV3和IFB感染為主。這與文獻[13-14]報道的結(jié)果相似。但何靜等[9]報道IFA是上海地區(qū)呼吸道感染患兒的主要致病原，這可能與區(qū)域和2009年爆發(fā)的甲型HIN1流感大流行相關(guān)。此外，武漢地區(qū)秋冬季兒童可以在社區(qū)免費接種流感疫苗，在一定程度上降低了流感病毒的檢出率。本研究結(jié)果提示，隨著年齡的增加，病毒的感染人數(shù)和檢出率逐漸降低，可能與呼吸道系統(tǒng)功能和免疫系統(tǒng)功能隨著年齡的增長而發(fā)育成熟完善相關(guān)；隨著年齡增長，患兒對病毒易感性逐漸下降。因此低年齡段患兒是進行病毒感染預(yù)防的重要監(jiān)控人群，應(yīng)引起呼吸道感染診療的重視。RSV是兒童、老年人和免疫功能低下患者發(fā)病和死亡的主要致病原，它對成人住院患者的臨床影響已經(jīng)通過多種多樣的分子檢測被闡明。在成年人中，RSV會產(chǎn)生多種臨床癥狀，包括上呼吸道感染、嚴(yán)重的下呼吸道感染和基礎(chǔ)疾病的加重[15]。本研究中18～<46歲、46～<69歲ARTI患者以RSV感染為主。

本研究結(jié)果顯示，不同性別ARTI患者之間IFA和PIV1檢出率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其他5種常見呼吸道病毒檢出率在不同性別ARTI患者之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。這與曾永靜等[16]研究結(jié)果一致。這兩種病毒的感染是否存在著性別的差異有待商榷。

呼吸道病毒感染具有明顯的季節(jié)性。蔣會婷等[17]研究表明，北京密云區(qū)冬季和春季是全年呼吸道病毒檢出率較高的季節(jié)，其中檢出率最高的是流感病毒；黃軍等[18]研究表明，中山地區(qū)春季、夏季時間長，雨量大，RSV在這兩個季節(jié)的檢出率較高。毛明宇等[8]研究表明，上海地區(qū)冬季和夏季的病毒檢出率高于其他季節(jié)。本地區(qū)研究中，ARTI患者在冬季病毒檢出率最高，春季次之，而RSV的檢出率在這兩個季節(jié)里也最高，這和文獻[19]研究結(jié)果一致。春季和冬季是呼吸道病毒感染的好發(fā)季節(jié)，這主要是由于春季、冬季的溫度較低，易引發(fā)機體鼻黏膜的血管收縮，導(dǎo)致呼吸道的抵抗力降低[20]；另一方面，武漢地區(qū)冬季和春季氣溫較低，人們戶外活動減少，室內(nèi)聚集較多，加上室內(nèi)空氣不流通，容易導(dǎo)致聚集人群呼吸道病毒的傳播。

本研究結(jié)果顯示，和上呼吸道感染、扁桃體炎類型的ARTI患者7種常見呼吸道病毒檢出率相比，肺炎、支氣管肺炎，以及支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎類型的ARTI患者7種常見呼吸道病毒檢出率較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。提示常見呼吸道病毒更容易引起下呼吸道疾病。

綜上所述，本院ARTI高發(fā)季節(jié)為春季、冬季，引起ARTI的主要病原體是RSV和PIV3，兒童和青少年是易感人群。急性下呼吸道疾病類型的ARTI患者的7種常見呼吸道病毒檢出率較高。 本研究為本院ARTI患者的臨床診斷治療及合理用藥提供了有力的證據(jù)。