孫言非 佟成媛

作者單位：佳木斯市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，黑龍江 佳木斯 154000

乙型肝炎病毒（HBV）感染是較為嚴(yán)重的全球性公共衛(wèi)生問題，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球約有2.4 億HBV 感染者，每年約有60 萬人死于HBV 感染所致的急性或慢性并發(fā)癥。盡管乙肝疫苗的廣泛應(yīng)用降低了HBV 的感染率，但我國仍然有9 300萬慢性HBV 感染者[1]。相關(guān)研究顯示[2，3]，HBV 持續(xù)感染除引起肝臟炎癥損傷外，還會導(dǎo)致患者出現(xiàn)全身多發(fā)器官損傷，其中腎臟也是主要累及器官。有研究顯示[4]，隨著慢性乙型肝炎的治療，患者會出現(xiàn)不同程度腎小球過濾估計(jì)值下降的情況，并引起血清肌酐、血鈣、血磷、尿肌酐出現(xiàn)改變，導(dǎo)致患者肝損傷加劇，逐漸從肝纖維化進(jìn)展為肝硬化，最終可能誘發(fā)肝癌。乙肝肝硬化是一種常見疾病，是各種慢性肝病發(fā)展的晚期階段，病理特征是肝臟彌漫性纖維化、假小葉、再生結(jié)節(jié)，起病隱匿，病程長，病情發(fā)展緩慢，具有較高的死亡率，給患者的身體健康帶來嚴(yán)重的負(fù)面影響[5]。乙肝肝損傷與肝硬化病變難以控制，會嚴(yán)重影響患者的生存時(shí)間及生存質(zhì)量。因此，監(jiān)測肝損傷病情進(jìn)展對判斷疾病預(yù)后具有重要的參考價(jià)值。本研究選取我院2019年1月～2021年1月收治的60 例慢性乙型肝炎患者作為研究對象，探討慢性乙型肝炎患者血清幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1（Chitinase 3-like protein 1，CHI3L1）水平變化及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取我院2019年1月～2021年1月收治的60 例慢性乙型肝炎患者作為研究對象，依照肝損傷情況分為肝損傷組（n=25）和非肝損傷組（n=35），另取同期30 例來我院體檢的健康者作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會、中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會2015年發(fā)布的《慢性乙型肝炎防治指南》乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。近30d 內(nèi)無免疫抑制劑使用史；可以配合完成各項(xiàng)檢查；患者及家屬均在了解研究目的后簽署知情同意書；患者依從性好，自愿參加臨床試驗(yàn)，且有完整的病歷資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并酒精性肝病、病毒性肝炎、寄生蟲感染、自身免疫性疾病者；入院后7d內(nèi)死亡者；妊娠期、哺乳期；精神疾病及意識障礙者；因其他原因轉(zhuǎn)院或家屬放棄治療者。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。3 組受檢者一般資料對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 3 組患者一般資料對比

1.2 方法入院第2 天門診患者及對照組健康者清晨抽取3ml 靜脈血，轉(zhuǎn)速3 000r/min，4℃下離心10min，留取上清，于冰箱-80℃保存。應(yīng)用美國Bio-Tek 公司的ELX800 型酶標(biāo)儀，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法，對3 組受檢者的CHI3L1 蛋白水平進(jìn)行測定，應(yīng)用杭州普望生物技術(shù)有限公司提供的測定試劑盒，具體步驟按照試劑盒說明書操作；血清甲胎蛋白（Alpha fetoprotein，AFP）與血清鐵蛋白（Ferritin，F(xiàn)ER）應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光法檢測，應(yīng)用雅培化學(xué)發(fā)光儀與配套試劑，依照說明書操作；應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法對3組受檢者血清的纖維連接蛋白（Fibronection，F(xiàn)N）、Ⅲ型前膠原氨基端肽（PⅢNP）、Ⅳ型膠原（CollagenⅣ，CⅣ）、層黏蛋白（Laminin，LN）以及透明質(zhì)酸（Hyaluronic acid，HA）水平進(jìn)行檢測，試劑盒由濰坊市康華生物技術(shù)有限公司提供，全自動(dòng)發(fā)光儀由科斯邁公司提供，型號為SMART3000S，依照試劑盒說明書步驟進(jìn)行操作[7，8]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法本研究數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 23.0 進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（百分比）[n（%）]表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)；符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用F檢驗(yàn)；采用Spearman 相關(guān)分析法分析FN、PⅢNP、CⅣ、LN、HA 與CHI3L1 蛋白水平的相關(guān)性；采用Logistic 回歸分析法分析產(chǎn)生三指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測概率的新變量；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組受檢者FER、AFP、CHI3L1 水平對比3 組受檢者FER、AFP、CHI3L1 水平對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，肝損傷組高于非肝損傷組及對照組（P＜0.05），見表2。

表2 3 組受檢者FER、AFP、CHI3L1 蛋白水平對比（±s，ng/ml）

表2 3 組受檢者FER、AFP、CHI3L1 蛋白水平對比（±s，ng/ml）

注：與肝損傷組比較，*P＜0.05；與對照組比較，#P＜0.05

組別例數(shù)FERAFPCHI3L1肝損傷組25 156.59±38.78 4.24±2.34218.23±49.11非肝損傷組 35 119.28±21.19*# 2.85±1.25*# 143.46±39.34*#對照組30 104.76±23.89* 1.07±0.36*39.54±11.30*F 24.58432.225170.041 P＜0.001＜0.001＜0.001

2.2 血清FER、AFP、CHI3L1 單項(xiàng)及聯(lián)合檢測的診斷價(jià)值比較以CHI3L1、AFP 及FER 三項(xiàng)指標(biāo)的檢測結(jié)果為協(xié)變量，以診斷結(jié)果為因變量，進(jìn)行Logistic 回歸分析，預(yù)測概率模型用似然比校驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。3 個(gè)指標(biāo)聯(lián)合檢測的AUC為0.865（95%CI0.814～1.235，P＜0.001）。且3 項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測的診斷價(jià)值高于單項(xiàng)檢測（P＜0.05），見表3。

表3 血清FER、AFP、CHI3L1 單項(xiàng)及聯(lián)合檢測的診斷價(jià)值比較

2.3 3 組受檢者肝纖維五項(xiàng)檢測水平對比3 組受檢者FN、PⅢNP、CⅣ、LN 以及HA 表達(dá)水平對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表4。

表4 3 組受檢者肝纖維五項(xiàng)檢測水平對比（±s）

表4 3 組受檢者肝纖維五項(xiàng)檢測水平對比（±s）

注：與肝損傷組比較，*P＜0.05；與對照組比較，#P＜0.05

組別例數(shù)FN（μg/ml）PⅢNP（ng/ml）CⅣ（ng/ml）LN（ng/ml）HA（ng/ml）肝損傷組25155.43±23.1421.34±5.31142.42±24.24 212.58±67.42 317.43±87.32非肝損傷組35 110.32±19.32*#8.35±2.43*#62.41±7.46*# 72.43±21.42*# 126.32±32.55*#對照組30122.65±23.42*2.14±0.47*15.32±3.24*55.63±15.34* 81.45±12.43*F 32.022254.069594.454132.150164.003 P＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

2.4 肝纖維五項(xiàng)與CHl3L1 表達(dá)的相關(guān)性分析Spearman 相關(guān)分析結(jié)果顯示：FN 與CHI3L1 水平無相關(guān)性（P＞0.05），PⅢNP、CⅣ、LN、HA 與CHI3L1水平呈正相關(guān)（P＜0.05），見表5。

表5 肝纖維五項(xiàng)與CHI3L1 表達(dá)的相關(guān)性分析

3 討論

CHI3L1 也稱為軟骨糖蛋白-39（Cartilage glycoprotein-39，HC-gp39）或YKL-40，位于人類染色體1q31-q32 的高度保守區(qū)域，是一段含有10 個(gè)外顯子、基因組長約10.9kb 的染色體DNA，包含383個(gè)氨基酸[9]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[10]，CHI3L1 在單核細(xì)胞與中性粒細(xì)胞中少量表達(dá)，但因巨噬細(xì)胞晚期誘導(dǎo)分化階段會呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，因此有學(xué)者認(rèn)為CHI3L1 為巨噬細(xì)胞分化成熟的一個(gè)重要標(biāo)志。目前CHI3L1 的具體生物學(xué)機(jī)制還尚未明確，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)CHI3L1 和RAGE 結(jié)合會促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，而且通過激活ERK1/2-MAPK 細(xì)胞信號通路，可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖效果。研究顯示[11]，CHI3L1 對于慢性丙型肝炎和肝移植手術(shù)后肝臟纖維化進(jìn)展具有預(yù)測作用，但是對于乙型肝炎的研究較少。

本研究結(jié)果表明，3 組受檢者FER、AFP、CHI3L1水平對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，肝損傷組高于非肝損傷組及對照組（P＜0.05），提示CHI3L1 與FER 和AFP一樣在慢性乙型肝炎與肝炎肝纖維化等方面具有重要的檢測價(jià)值。FER 是一種由肝臟合成的糖蛋白，是體內(nèi)鐵貯存的主要形式。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[12]，肝纖維化進(jìn)展加劇會導(dǎo)致FER 合成分泌增多。AFP 是臨床上原發(fā)肝癌早期篩查應(yīng)用比較廣泛的一種血清腫瘤標(biāo)志物。研究發(fā)現(xiàn)[13]，AFP 在健康成人血液中水平較低，隨著肝纖維化加劇，AFP 水平呈現(xiàn)上升狀態(tài)。而CHI3L1 水平表達(dá)升高可能會比炎癥反應(yīng)更加明顯，而且CHI3L1 水平對于病變的性質(zhì)具有一定判斷作用；以CHI3L1、AFP 及FER 三項(xiàng)指標(biāo)的檢測結(jié)果為協(xié)變量，以診斷結(jié)果為因變量，進(jìn)行Logistic 回歸分析，預(yù)測概率模型使用似然比校驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。3 個(gè)指標(biāo)聯(lián)合檢測的AUC 為0.865（95%CI0.814～1.235，P＜0.001），3 項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測的診斷價(jià)值高于單項(xiàng)檢測（P＜0.05），提示CHI3L1、AFP及FER 三項(xiàng)指標(biāo)對于慢性乙型肝炎肝損傷診斷均具有一定準(zhǔn)確性和特異性，并且也有研究證明AFP與FER 關(guān)系比較密切[14]；3 組受檢者FN、PⅢNP、CⅣ、LN 以及HA 表達(dá)水平對比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），肝纖維五項(xiàng)是肝臟纖維化的重要標(biāo)志物，其中FN 參與干細(xì)胞損傷修復(fù)、調(diào)節(jié)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)、膠原代謝等功能，F(xiàn)N 的水平會隨著肝臟纖維化程度加重而增加。PⅢNP 是反映肝臟內(nèi)部Ⅲ型膠原合成的一個(gè)重要指標(biāo)，其血清含量與肝纖維化發(fā)展程度相一致，隨肝臟纖維化程度加重呈上升趨勢。LN 是基底膜中特有的非膠原性結(jié)構(gòu)蛋白，其水平和纖維化發(fā)展程度也呈正相關(guān)。HA 屬于基質(zhì)IDE 成分之一，也是肝硬化與肝纖維化的敏感指標(biāo)之一。從本研究結(jié)果可以看出，肝損傷、非肝損傷以及健康者肝纖維五項(xiàng)指標(biāo)差異顯著；Spearman 相關(guān)分析結(jié)果顯示：FN 與CHI3L1 水平無相關(guān)性（P＞0.05），PⅢNP、CⅣ、LN、HA 與CHI3L1 水平呈正相關(guān)（P＜0.05），說明CHI3L1 水平與PⅢNP、CⅣ、LN、HA 水平均能夠判斷慢性乙型肝炎肝損傷情況。相關(guān)研究顯示[15]，CHI3L1 是一種與炎癥相關(guān)的生物標(biāo)志物，為結(jié)締組織細(xì)胞生長因子，并且在血管異常、抗凋亡、癌細(xì)胞增殖以及組織重塑中具有重要作用。

綜上所述，慢性乙型肝炎肝損傷患者血清CHI3L1 水平高于未出現(xiàn)肝損傷的患者及健康者。FER、AFP、CHI3L1 三種蛋白聯(lián)合檢測對慢性乙型肝炎患者預(yù)后預(yù)測價(jià)值更高，且CHI3L1表達(dá)與肝纖維五項(xiàng)檢測水平具有一定相關(guān)性，因此可以根據(jù)血清CHI3L1 水平來判斷慢性乙型肝炎患者的疾病嚴(yán)重程度。