朱立莖，李廈潔，梁麗華

(東莞市石碣醫(yī)院，廣東 東莞 523290)

0 引言

病人發(fā)生妊娠期高血壓這一疾病，將會(huì)對(duì)母嬰的身體健康造成不良的影響，并會(huì)引發(fā)妊娠期并發(fā)癥，還會(huì)對(duì)胎兒的健康生長(zhǎng)產(chǎn)生限制等諸多不種的影響。在近幾年的醫(yī)療機(jī)構(gòu)研究中表明，發(fā)生這一病情與滋養(yǎng)細(xì)胞侵入子宮部位螺旋動(dòng)脈較淺，胎盤的血管構(gòu)造中生理性結(jié)構(gòu)障礙有著密切的關(guān)系，而滋養(yǎng)細(xì)胞為母體子宮中的內(nèi)膜以及肌層的有效浸潤(rùn)是人體胎盤不斷形成的重要環(huán)節(jié)。而基質(zhì)金屬蛋白酶在人體胎盤的發(fā)育和著床過程中起著十分重要的作用?；|(zhì)金屬蛋白酶發(fā)生調(diào)控失調(diào)時(shí)，將會(huì)引發(fā)人體細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲能力出現(xiàn)異常現(xiàn)象，如果侵襲力較弱時(shí)，則將會(huì)出現(xiàn)妊娠期孕婦高血壓等相關(guān)疾病，其中基質(zhì)金屬蛋白酶特別的重要。在有關(guān)的研究中顯示，正常情況下足月的妊娠孕婦和妊娠期發(fā)生高血壓疾病的病人，其胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞當(dāng)中和血清當(dāng)中的有效表達(dá)，來(lái)研究探討基質(zhì)金屬蛋白酶在妊娠期發(fā)生高血壓疾病中的發(fā)病原理及作用。胎盤的正常發(fā)育對(duì)正常妊娠的維持至關(guān)重要，胎盤結(jié)構(gòu)或功能異常可導(dǎo)致某些妊娠并發(fā)癥。正常妊娠的維持是胚胎與母體之間極其復(fù)雜的相互協(xié)調(diào)過程，絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞(EVT)的正常侵蝕是妊娠順利進(jìn)行的重要環(huán)節(jié)之一，近年來(lái)研究表明，滋養(yǎng)層細(xì)胞侵蝕過淺可導(dǎo)致妊娠期高血壓疾病(HDCP)的發(fā)生。HDCP患者在胎盤形成過程中存在著螺旋小動(dòng)脈血管重鑄異常的現(xiàn)象，其絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)能力下降，范圍縮小，浸潤(rùn)僅達(dá)蛻膜段，子宮螺旋動(dòng)脈未經(jīng)歷正常妊娠時(shí)的變化卻保持著相對(duì)狹窄的管徑和對(duì)縮血管物質(zhì)的反應(yīng)，從而造成了胎盤缺血。滋養(yǎng)層細(xì)胞對(duì)子宮螺旋動(dòng)脈侵蝕不足，使胎盤植入過淺，導(dǎo)致胎盤血流灌注不足即胎盤缺陷，最終引發(fā)母體系統(tǒng)性血管內(nèi)皮損傷，從而表現(xiàn)出HDCP的臨床癥狀。滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲行為受子宮旁和滋養(yǎng)細(xì)胞自分泌的多種因子介導(dǎo)，其中基質(zhì)金屬蛋白酶系統(tǒng)尤其是基質(zhì)金屬蛋白酶-9 (MMP-9)對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的降解是滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲的限速步驟。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

妊高癥的入選標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠高血壓疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)按照《2012年妊娠高血壓疾病診療指南》；②單胎妊娠；③孕婦以往均無(wú)任何原發(fā)性心臟病，肝病，腎病等病史，無(wú)高血壓病家族史；④自愿接受試驗(yàn)并配合試驗(yàn)檢查；⑤年齡在18-40歲。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，選取我院婦產(chǎn)科2019年8月至2020年10月孕婦，選取其中符合要求的有妊高癥孕婦45例，再選取同期15名正常孕婦為對(duì)照組。兩組孕婦年齡，孕周，孕次，產(chǎn)次等一般臨床資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 研究方法

抽取實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組娩出30min內(nèi)的胎盤組織1g，注意避開壞死和鈣化區(qū)，立即置入立即置于-20攝氏度冰凍保存，Western blot測(cè)定組織中MMP-9的表達(dá)水平。試劑一抗(Anti-MMP-9 單克隆抗體)、試劑二抗(鼠抗兔IgG)均購(gòu)自武漢博士德公司，1% NP-40裂解液購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司。試驗(yàn)方法：將大約500mg組織樣本加入到400uL 1%NP-40裂解液中(上海江萊生物 科技有限公司)混勻，加入一定量的蛋白酶抑制劑后于4攝氏度、10000r/min下離心5min，測(cè)定上清液中的蛋白濃度。量取含蛋白20ug的上清液，加入到8%SDS聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行垂直電泳測(cè)定，然后轉(zhuǎn)至硝化纖維素膜上進(jìn)行轉(zhuǎn)印。硝化纖維 素膜與Anti-MMP9 抗體(BA0573，boster)于4℃下過夜孵育(1：200)。利用等級(jí)資料的秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。應(yīng)用Pearson法，分析其與圍產(chǎn)兒1min Apgar評(píng)分及體質(zhì)量的相關(guān)性，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組胎盤中MMP-9的表達(dá)及比較

結(jié)果判定：通過灰度值計(jì)算得到MMP-9的量，其含量處于總體水平5%之下的樣本判定為陰性(-), 5% ～ 15%判定為弱陽(yáng)性(+), 16% ～ 50%判定為陽(yáng)性(++), ＞50%判定為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。兩組比校，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。即妊高癥患者胎盤中MMP-9的含量顯著低于正常胎盤含量。

表1 MMP-9在妊娠期高血壓疾病患者與正常妊娠患者胎盤母面中的表達(dá)及比較

2.2 圍產(chǎn)兒結(jié)局及其相關(guān)性

實(shí)驗(yàn)組圍產(chǎn)兒1min Apgar及出生體重均低于對(duì)照組，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。見表2。Pearson相關(guān)性分析處理結(jié)果顯示胎盤MMP-9蛋白表達(dá)均與圍產(chǎn)兒結(jié)局正相關(guān)(P＜0.05)。

表2 2組圍產(chǎn)兒結(jié)局比較(±s)

表2 2組圍產(chǎn)兒結(jié)局比較(±s)

指標(biāo) 實(shí)驗(yàn)組(n=45) 對(duì)照組(n=15)1min Apgar評(píng)分(分) 8.18±1.50 9.64±0.52出生體質(zhì)量(g) 2104.32±361.23 3468.47±483.20

3 討論

3.1 基質(zhì)金屬蛋白酶屬于滋養(yǎng)細(xì)胞所產(chǎn)生的重要水解酶,其分泌量的下降將會(huì)對(duì)胎盤著床以及血管重鑄產(chǎn)生重要的影響，從而發(fā)生胎盤供血或供氧不足現(xiàn)象。出現(xiàn)胎盤缺血和缺氧將會(huì)對(duì)其局部產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，可能引起脂質(zhì)過氧化以及絨毛間隙的白細(xì)胞發(fā)生活化導(dǎo)致血管發(fā)生內(nèi)皮損傷等問題,最終將會(huì)導(dǎo)致發(fā)生妊娠高血壓等疾病。在近些年的有關(guān)研究發(fā)現(xiàn),出現(xiàn)妊娠期的高血壓與妊娠早期滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲有著密切關(guān)聯(lián),其主要機(jī)制表現(xiàn)為:妊娠期高血壓病人的滋養(yǎng)層細(xì)胞在浸潤(rùn)子宮螺旋動(dòng)脈時(shí)僅可以達(dá)蛻膜層,因植入過淺導(dǎo)致相對(duì)狹小的動(dòng)脈血管管徑和對(duì)縮血管的出現(xiàn)過極的反應(yīng),從而引發(fā)胎盤中的血流灌注情況不足,最終導(dǎo)致母體的系統(tǒng)性血管內(nèi)皮發(fā)生損傷,表現(xiàn)為妊娠期高血壓疾病的出現(xiàn)等臨床癥狀。在有關(guān)的研究中，通過查看正常胎盤以及先兆子癇性胎盤中的螺旋動(dòng)脈,可以檢測(cè)到在正常胎盤的螺旋狀動(dòng)脈壁中的厚度隨著妊娠期的發(fā)展而會(huì)變薄,而螺旋動(dòng)脈的血管薄壁上有著滋養(yǎng)細(xì)胞的浸潤(rùn),而對(duì)于先兆子痼時(shí)，螺旋動(dòng)脈的血管壁較厚,螺旋小動(dòng)脈血管中幾乎看不到滋養(yǎng)細(xì)胞,較多的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞離此部分血管會(huì)有較長(zhǎng)的距離,這樣螺旋動(dòng)脈血管很難實(shí)現(xiàn)生理重鑄,以致發(fā)生胎盤缺氧和灌注不足。妊娠期高血壓作為一種常見的產(chǎn)科疾病,據(jù)臨床統(tǒng)計(jì)，我國(guó)發(fā)病率約10%。多發(fā)于孕20周后,臨床主要病癥比較復(fù)雜,主要表現(xiàn)為血壓升高,尿蛋白含量增加,抽搐、昏迷以及心力衰竭等癥狀,可能會(huì)造成臟器功能的損害,如果患者終止妊娠期會(huì)使病情有所好轉(zhuǎn)。妊娠期高血壓也是一種比較嚴(yán)重的妊娠并發(fā)癥,病理變化主要表現(xiàn)為全身小動(dòng)脈痙攣狀態(tài),血管內(nèi)皮損傷、血管內(nèi)皮功能缺失是其中的中心發(fā)病環(huán)節(jié)。

3.2 MMP-9是一種基層蛋白質(zhì)水解酶，參與降解子宮內(nèi)膜細(xì)胞外基質(zhì)。其主要作用是能夠使細(xì)胞外基質(zhì)降解,與胎膜的破裂、胎盤的形成、孕婦的創(chuàng)傷修復(fù)、月經(jīng)周期的調(diào)控以及滋養(yǎng)葉細(xì)胞侵入子宮過程發(fā)生障礙有關(guān),它還能有效調(diào)節(jié)蛋白酶以及組織細(xì)胞因子的活性,通過釋放內(nèi)皮血管生長(zhǎng)因子來(lái)參與到血管的生成過程中。在妊娠過程中，胎盤絨毛的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞逐漸遷徙成絨毛的基底層形成具有強(qiáng)大侵蝕功能的絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞。這種細(xì)胞會(huì)降解細(xì)胞外基質(zhì)，侵入子宮內(nèi)膜和子宮螺旋動(dòng)脈。而MMP-9正是這一過程中重要的生化介質(zhì)。在體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn):妊娠7～11周，MMP-9的表達(dá)逐漸上升,在滋養(yǎng)細(xì)胞分泌的酶類中占主要優(yōu)勢(shì)。作為滋養(yǎng)細(xì)胞分泌的最有效的蛋白水解酶，MMP-9的分泌量與滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲能力和血管重鑄密切相關(guān)。由此推斷MMP-9的表達(dá)及活性的變化影響滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力的變化，從而有可能導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)子宮內(nèi)膜侵入過淺，子宮螺旋小動(dòng)脈重鑄障礙,血流灌注不足，胎盤缺血缺氧，最終出現(xiàn)臨床癥狀，并對(duì)圍產(chǎn)兒造成不利的影響。本研究提示妊高癥患者胎盤中MMP-9呈低表達(dá)，且MMP-9低表達(dá)水平會(huì)不利于圍產(chǎn)兒的發(fā)育。由此可見，胎盤中MMP-9水平與妊高癥及圍產(chǎn)兒結(jié)局具有相關(guān)性，可據(jù)此評(píng)估圍產(chǎn)兒結(jié)局并予以早期干預(yù)。

3.3 妊娠期高血壓疾病對(duì)新生兒出生結(jié)局的影響國(guó)內(nèi)外的研究均表明HDCP可以增加胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育受限和小于胎齡兒發(fā)生的危險(xiǎn)性。這兩者不僅是圍產(chǎn)兒死亡的重要原因，還會(huì)對(duì)嬰兒期乃至更加長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)的身體發(fā)育和智能發(fā)育產(chǎn)生影響Ⅲ。對(duì)HDCP患者新生兒出生結(jié)局的研究，是長(zhǎng)期研究的基礎(chǔ)。妊娠期的高血壓與新生兒出生結(jié)局有關(guān)的理論在幾十年前就被Taylor提出。妊娠期高血壓是全球第二位導(dǎo)致孕婦死亡的疾病，其引發(fā)的宮內(nèi)發(fā)育遲緩、胎盤早剝、早產(chǎn)等又對(duì)圍產(chǎn)結(jié)局產(chǎn)生不良影響。本次研究對(duì)象中病例組圍產(chǎn)兒1min Apgar及出生體重均低于對(duì)照組，Pearson相關(guān)性分析處理結(jié)果顯示胎盤MMP-9蛋白表達(dá)均與圍產(chǎn)兒結(jié)局正相關(guān)。

3.4 由于根據(jù)疾病嚴(yán)重程度分組樣本量少，所以在對(duì)比 Apgar及出生體重時(shí)把不同嚴(yán)重程度的妊高癥孕婦分娩的新生兒作為實(shí)驗(yàn)組，本研究未深入分析胎盤中MMP-9含量與輕重度妊娠高血壓以及圍產(chǎn)兒結(jié)局的影響，只能說明MMP-9的表達(dá)與妊高癥和圍產(chǎn)兒結(jié)局具有一定的相關(guān)性。