尹民海, 湯希雁, 劉志平, 黃燕敏

?；制に仉康暮铣膳c表征

尹民海, 湯希雁, 劉志平*, 黃燕敏

（南寧師范大學(xué)化學(xué)與材料學(xué)院， 廣西 南寧 530001）

柚皮素降血糖、降血脂、抗腫瘤、抗菌、抗氧化等作用的活性成分。以柚皮素與鹽酸羥胺反應(yīng)得到4-肟基柚皮素，然后與酰氯或乙酸酐通過選擇性酯化合成了6種酰化柚皮素肟3a-3f，其結(jié)構(gòu)經(jīng)核磁氫譜和高分辨質(zhì)譜進(jìn)行了表征。

柚皮素；乙酰化；肟

柚皮苷及柚皮素是蕓香科植物柚中的一種活性成分，屬于二氫黃酮類化合物,也存在于橙子、枳實(shí)、菝葜等植物中，具有降低血糖、抗氧化、預(yù)防和抵抗腫瘤、抗病毒、提高免疫力等多種功效。近年來，關(guān)于柚皮素及衍生物用于抗氧化[1]、抗腫瘤[2-3]、保肝作用[4]等方面的研究屢有報道。如Apak R[5]將柚皮素與鹽酸羥胺作用合成了具有強(qiáng)抗氧化作用的柚皮素肟，對羥基自由基、超氧自由基等具有明顯的清除作用明顯；文利[6]等以柚皮素能調(diào)控糖尿病腎病大鼠腎組織中細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的合成，減輕腎臟病理損害，從而起到保護(hù)腎臟的作用；薛敏等合成的柚皮素-7-O-乙酸酯和柚皮素-7-O-丙酸酯對二磷酸腺苷誘導(dǎo)的兔體外和大鼠體內(nèi)血小板聚集有顯著的抑制活性[7]；李沛波等還研究了柚皮苷和柚皮素的鎮(zhèn)咳, 祛痰,抗肺部炎癥等藥理作用,發(fā)明了一種用于止咳, 化痰和平喘的柚皮苷藥物組合物及其制劑，目前已完成了Ⅰ期臨床試驗(yàn)研究[8-9]，該藥物組合物含柚皮苷的含量為27.5～275 mg、鹽酸非索非那丁含量為30～300 mg, 能治療各種原因引起的咳嗽和痰多,以及治療咳嗽變異性哮喘,該藥物組合物可加入常規(guī)輔料,根據(jù)任何常規(guī)方法制備成止咳,化痰和平喘的藥物,組合物的藥效優(yōu)于柚皮苷或鹽酸非索非那丁單獨(dú)應(yīng)用時的藥效。

并將柚皮苷研制成國家一類新藥,柚皮素為二氫黃酮母核結(jié)構(gòu),其水溶性相對較低，生物利用度較低。以柚皮素為先導(dǎo)化合物半合成活性藥物分子，對提高柚皮素的生物利用度及應(yīng)用價值具有重要意義。本題組曾從柚皮苷出發(fā)，經(jīng)水解、醚化、肟化等步驟合成了多種結(jié)構(gòu)的柚皮素肟及柚皮素肟醚類化合物，噻唑藍(lán)（MTT）蛋白染色法體外抑制腫瘤增值活性測試顯示對人胃癌細(xì)胞SGC-7901有較好的抑制活性，部分化合物IC50值介于10～16μmol·L-1 [10-11]。為對比柚皮素酚羥基上引入不同數(shù)量?；鶊F(tuán)后對底物活性的影響，本文分別在柚皮素母體上引入了乙?；敖饎偼榛?，合成了6種不同數(shù)量?；〈蔫制に仉款愌苌?，合成路線見圖1。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

傅立葉紅外光譜儀Nicolet Avater FT-IR 360；Bruker AvanceⅢ-300M型核磁共振儀；Waters Xevo G2 QT質(zhì)譜儀；實(shí)驗(yàn)試劑均為分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 柚皮素肟（2）的制備

柚皮素肟（2）的制備方法參照文獻(xiàn)[10]進(jìn)行。100 mL燒瓶中加入柚皮素(0.272 g)、三水合醋酸鈉(0.156 g）、鹽酸羥胺(0.084 g)及95%乙醇15 mL, 攪拌油浴升溫至80 ℃反應(yīng) 6 h。 TLC 監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程, 待原料點(diǎn)消失后旋轉(zhuǎn)減壓蒸干, 加適量水乙酸乙酯萃取3次, 用飽和NaHCO3和飽和食鹽水反萃, 無水硫酸鈉干燥有機(jī)相，蒸干, 并用適量70%的乙醇重結(jié)晶得白色固體0.256 g, 產(chǎn)率89%。1H NMR (C2D6O, 300 MHz) δ: 2.78(dd,＝17.4, 12.9 Hz, 1H, 3a-H), 3.46 (dd,＝17.4, 3.0Hz, 1H, 3b-H), 5.06 (dd,＝12.0, 3.0 Hz, 1H, 2-H), 5.98(d,＝2.1 Hz, 1H, 8-H), 6.01 (d,＝2.1 Hz, 1H, 6-H),6.90 (dd,＝8.7, 2.1 Hz, 2H, 3',5'-H), 7.39 (dd,＝8.4, 2.1Hz, 2H, 2',6'-H), 8.58 (s, 1H, N-OH), 8.61 (s, 1H, 7-OH),10.40 (s, 1H, 4'-OH), 12.04 (s, 1H, 5-OH). HR-ESI -MS [M＋H]＋：288.087 8（calcd for C15H14NO5:288.087 2。

1.2.2 乙?；制に仉康模?a、3b）的制備

在50 mL圓底燒瓶中加入0.287 g柚皮素肟(2)溶解在8 mL二氯甲烷中，在冰水冷卻下加入0.1 mL三乙胺，緩慢滴入0.5 mL乙酰氯，維持低溫反應(yīng)0.5 h后自然升溫到室溫繼續(xù)攪拌2 h。加入適量水，二氯甲烷萃取，有機(jī)層無水硫酸鈉干燥。硅膠柱層析（石油醚-乙酸乙酯5∶1）分離，得白色固體3a和3b。

7-O-乙?；制に仉浚?a）：白色固體0.148 g，產(chǎn)率45%。1H NMR (C2D6O, 300 MHz): 2.18 (3H,s, CH3), 2.77 (1H, dd,=17.4, 3.0Hz, 3b-H),3.45 (1H, dd,=17.1, 13.2Hz, 3a-H), 4.98(1H, d,=13.2, Hz, 2-H),6.33 (1H, d,=2.4Hz, 8-H),6.33 (1H, d,=2.4Hz, 6-H), 6.96 (2H, d,=8.4Hz, 3’,5’-H), 7.37 (2H, d,=8.4, Hz, 2’,6’-H), 8.61(s, 1H, 4’-OH), 11.86 (1H, s, 5-OH). HR-ESI-MS [M+H]+: 330.0991 (calcd for C17H16NO6: 330.0978)。

4’,7-O-二乙?；制に仉浚?b）：白色固體0.137 g，產(chǎn)率37%。1H NMR (CDCl3, 300 M) δ:2.32 (3H, s, CH3), 2.34 (3H, s, CH3), 2.81 (1H, dd,=17.1, 3.0Hz, 3b-H), 3.47 (1H, dd,=17.1, 13.2Hz, 3a-H), 5.01 (1H, dd,=13.2, 3.0Hz, 2-H), 6.33 (1H, d,=2.1Hz, 8-H), 6.34(1H, d,=1.8Hz, 6-H), 6.95 (2H, d,=8.4, Hz, 3’,5’-H), 7.36 (2H, d,=8.4Hz, 2’,6’ -H), 11.82 (1H, s, 5-OH). HR-ESI-MS [M+H]+: 372.1099 (calcd for C19H18NO7:372.1083)。

1.2.3 乙?；制に仉康模?c、3d）的制備

50 mL圓底燒瓶中加入0.287 g柚皮素肟(2)，滴入3.0 mL乙酸酐及3d濃硫酸，油浴升溫至60 ℃攪拌反應(yīng)3 h，原料點(diǎn)逐漸消失后冷卻，加適量水用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉溶液和水洗滌，無水硫酸鈉干燥后硅膠柱層析分離（石油醚-乙酸乙酯10∶1)，得無色油狀物3c和3d。

4’,5,7-O-三乙?；制に仉浚?c）：無色油狀0.140 g，產(chǎn)率34%。1H NMR (CDCl3, 300 M) δ:2.16 (3H, s, -CH3), 2.30 (3H, s, -CH3), 2.46 (3H, s, -CH3), 2.77 (1H, dd,=17.1, 12.9Hz, 3a-H), 3.48 (1H, dd,=17.1, 2.7Hz, 3b-H), 4.97 (1H, dd,=12.9, 2.7Hz, 2-H), 6.40 (1H, s, N-OH), 6.60 (1H, d,=2.4Hz, 8-H), 6.74(1H, d,=2.1Hz, 6-H), 6.83(2H, d,=8.7Hz, 3’,5’-H), 7.26 (2H, d,=8.7Hz, 2’,6’-H). HR- ESI-MS [M+H]+: 414.1205 (calcd for C21H19NO8:414.1189)。

4,4’,5,7-O-四乙?；制に仉浚?d）：無色油狀0.191 g，產(chǎn)率42%。1H NMR (CDCl3, 300M) δ: 2.15 (3H, s, CH3), 2.27 (3H,s, CH3), 2.31 (3H, s, -CH3), 2.44 (3H,s, CH3), 2.80 (1H, dd,=16.8, 2.7Hz, 3b-H), 3.54 (1H, dd,=16.8, 13.5Hz, 3a-H), 5.10 (1H, dd,=13.2, 2.4Hz, 2-H), 6.61 (1H, d,=2.4Hz, 8-H), 6.76 (1H, d,=2.1Hz, 6-H), 7.16 (2H, d,=8.4, Hz, 3’,5’-H), 7.46 (2H, d,=8.4Hz, 2’,6’ -H).HR-ESI-MS [M+H]+: 456.1313 (calcd for C23H22NO9:456.1295)。

1.2.4 金剛烷酰化柚皮素肟的（3e、3f）的制備

20 mL圓底燒瓶中加入干燥的金剛烷甲酸0.122 g及亞硫酰氯2 mL，在N2保護(hù)下于80 ℃回流1 h，減壓蒸干剩余SOCl2后滴加二氯甲烷溶解。再稱取0.287 g柚皮素肟(2)溶于10 mL二氯甲烷，滴加3滴N,N-二甲基甲酰胺，冰水冷卻下分批次滴入新制備的金剛烷甲酰氯反應(yīng)2h。減壓蒸干溶劑，加適量蒸餾水，乙酸乙酯萃取3次，有機(jī)層無水硫酸鈉干燥后硅膠柱層析分離（石油醚-乙酸乙酯8∶1)，得白色固體3e和油狀物3f。

7-O-金剛烷甲酰基柚皮素肟（3e）：白色固體0.272 g，產(chǎn)率61%。1H NMR (C2D6O, 300M) δ: 1.74 (6H, s, CH2×3), 1.98 (6H, s, CH2×3), 2.00 (3H, s, CH×3),3.06 (1H, dd,=17.1, 12.3Hz, 3a-H),3.48 (1H, dd,=17.1, 3.0Hz, 3b-H), 5.15 (1H, dd,=12.3, 3.0Hz, 2-H), 6.01 (1H, d,=2.1Hz, 8-H),6.07 (1H, d,=2.1Hz, 6-H), 6.92 (2H, d,=8.4Hz, 3’,5’-H),7.40 (2H, d,=8.4 Hz, 2’,6’-H), 8.62 (1H, s, N-OH), 9.19 (1H, s, 4’ -OH),11.09 (1H, s, 5-OH). HR-ESI-MS [M+H]+: 450.1938 (calcd for C26H28NO6: 450.1917)。

4’,7-O-金剛烷甲?；制に仉浚?f）：白色固體0.092 g，產(chǎn)率15%。1H NMR (CDCl3, 300M) δ: 1.74 (6H, s, CH2×3), 1.76 (6H, s, CH2×3), 1.98 (6H, s, CH2×3), 1.99 (6H, s, CH2×3), 2.02 (3H, s, CH×3),2.05 (3H,s, CH×3), 3.05 (1H, dd,=17.1, 12.3Hz, 3a-H),3.46 (1H, dd,=17.1, 3.0Hz, 3b-H), 5.13 (1H, dd,=12.3, 3.0Hz, 2-H), 6.01 (1H, d,=2.1Hz, 8-H),6.07 (1H, d,=2.1Hz, 6-H), 7.18 (2H, d,=8.4Hz, 3’,5’-H),7.30(2H, d,=8.4 Hz, 2’,6’-H), 8.62 (1H, s, N-OH),11.09 (1H, s, 5-OH). HR-ESI-MS [M+H]+: 612.298 2 (calcd for C37H42NO7: 612.296 1)。

2 結(jié)果與討論

乙?；鶠槌Ｓ玫孽；噭?，利用柚皮素肟中各羥基酸性的強(qiáng)弱差異，適當(dāng)控制乙酰氯或乙酸酐的添加量能選擇性得到不同數(shù)量乙?；〈漠a(chǎn)物?；衔?c中出現(xiàn)3個乙酰基片段，同時黃酮5-羥基消失，證明了乙?；〈恢脼?’，5,7位。此外，金剛烷具有特殊的剛性結(jié)構(gòu)，其衍生物具有重要的藥理活性，如金剛烷胺一直作為帕金森病的治療藥，后被批準(zhǔn)用于流感病毒A型感染性疾病的治療。因此也選擇了金剛烷作為酰基化的取代基。合成金剛烷酰柚皮素肟時由于二氯甲烷的極性較小，很難完全將柚皮素肟快速溶解，反應(yīng)液中加幾滴 N,N-二甲基甲酰胺既可以促進(jìn)柚皮素肟溶解，又可以束縛生成的酸，冰水控制反應(yīng)溫度，緩慢滴入金剛烷甲酰氯有利于控制反應(yīng)的產(chǎn)物。

柚皮素肟中7位和4’位酚羥基酸性較大，在二氯甲烷中與適量乙酰氯在低溫反應(yīng)可選擇性在活潑的7位或4’,7位反應(yīng)，待原料點(diǎn)消失后分離產(chǎn)物，得到化合物3a和3b；3b比3a極性小，柱層析優(yōu)先得到，其結(jié)構(gòu)由δ 2.32 (3H, s, CH3)和2.34 (3H, s, CH3)處2個甲基信號得到確認(rèn)。化合物3c和3d制備時采用了濃硫酸催化下用乙酸酐為?；噭?，反應(yīng)調(diào)劑溫和，后處理較簡單?；衔?c中δ 2.16 (3H, s, -CH3), 2.30 (3H, s, -CH3), 2.46 (3H, s, -CH3)處出現(xiàn)3個甲基信號，且氫譜δ 11.82 (1H, s, 5-OH)分子內(nèi)氫鍵的酚羥基信號消失，說明產(chǎn)物被3個乙?；〈?；而化合物3d中δ 2.15 (3H, s, CH3), 2.27 (3H,s, CH3), 2.31 (3H, s, -CH3), 2.44 (3H,s, CH3)出現(xiàn)4個甲基信號，證明柚皮素肟中四個羥基均被乙酰基所酯化?；衔?e和3f的合成采用了新制備的金剛烷甲酰氯，3e中δ 1.74 (6H, s, CH2×3), 1.98 (6H, s, CH2×3), 2.00 (3H, s, CH×3)分別出現(xiàn)了金剛烷的特征信號；3f中δ 1.74 (6H, s, CH2×3), 1.76 (6H, s, CH2×3), 1.98 (6H, s, CH2×3), 1.99 (6H, s, CH2×3), 2.02 (3H, s, CH×3),2.05 (3H,s, CH×3)出現(xiàn)了2個金剛烷信號，證實(shí)了金剛烷片段已有效的引入到柚皮素肟上。

柚皮素肟?；髽O性變小，水溶性進(jìn)一步降低；取代的?；蕉?，水溶性越低，在DMSO中也不易溶解，不利于MTT法細(xì)胞活性篩選。在后續(xù)工作中可嘗試制備水溶性柚皮素肟鹽酸鹽，探討其對腫瘤細(xì)胞的抑制活性。

3 結(jié) 論

柚皮素經(jīng)肟化、選擇性?；铣闪?個酰基化衍生物，其結(jié)構(gòu)均得到核磁氫譜和高分辨質(zhì)譜的確認(rèn)。但?；制に仉克苄詻]有得到較大改善，抗腫瘤活性有待更深入的探討。

[1]MENG L M, HUI J, GUO H, et al. The cardioprotective effect of naringenin against ischemia-reperfusion injury through activation of ATP-sensitive potassium channel in rat[J]., 2016, 94 (9): 973-978.

[2] ZHANG F Y, DU G J, ZHANG L, et al. Naringenin Enhances the Anti-Tumor Effect of Doxorubicin Through Selectively Inhibiting the Activity of Multidrug Resistance-Associated Proteins but not P- glycoprotein [J]., 2009, 26 (4): 914-925.

[3]KRISHNAKUMAR N, SULFIKKARALI N, RAJENDRAPRASAD N, et al. Enhanced anticancer activity of naringenin-loaded nanoparticles in human cervical (HeLa) cancer cells[J]., 2011, 1(4):223-231.

[4] HERNANDEZ A, MURIEL P. Beneficial effects of naringenin in liver diseases: Molecular mechanisms[J]., 2018, 24 (16): 1679-1707.

[5] APAK R, LV K G, ZYUREK M, et al. Novel total antioxidant capacity index for dietary polyphenols and vitamins C and E[J]., 2004, 52 (26): 7970-7981.

[6]文利. 柚皮素靶向let-7a/TGFBR1信號途徑延緩糖尿病腎損傷的研究[D]. 重慶醫(yī)科大學(xué)，2016.

[7]薛敏, 張浩, 朱玉鳳,等. 柚皮素-7-O-乙酸酯和柚皮素-7-O-丙酸酯的制備及抗血小板聚集活性[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2016, 28 (8): 1273-1278.

[8]李沛波, 王永剛, 吳灝, 等. 柚皮苷及其苷元柚皮素的呼吸系統(tǒng)藥理作用研究概述[J]. 藥學(xué)研究, 2020, 39 (05):7-13.

[9]蘇薇薇, 焦豪妍, 廖彥, 等. 一種柚皮苷與鹽酸非索非那丁藥物組合物及其制劑: CN104188998A[P]. 2014.

[10]劉志平, 韋萬興, 甘春芳,等. 柚皮苷半合成E-柚皮素肟類化合物及細(xì)胞活性[J]. 有機(jī)化學(xué), 2013, 33 (012): 2551-2558.

[11] 劉志平, 甘春芳, 黃燕敏, 等. 多肟基柚皮素衍生物的合成與細(xì)胞毒活性[J]. 化學(xué)通報, 2021, 84 (1): 90-95.

Synthesis and Characterization of Acylated Naringenin Oximes

,, LIU Zhi-ping,

（College of Chemistry and Material, Nanning Normal University, Nanning Guangxi 530001, China）

Naringenin is an active ingredient with hypoglycemic, hypolipidemic, antitumor, antibacterial and antioxidant effects. In this paper, six acylated naringenin oximes were synthesized via the reaction of naringenin with hydroxylammonium chloride and then selective esterification reaction with acyl chloride or acetic anhydride, their structures were characterized by1H-NMR and MS.

Naringenin; Acetylated ; Oximes

廣西科學(xué)自然科學(xué)基金（項(xiàng)目編號：2020GXNSFAA159096、2014GXNSFBA118033）。

2021-05-06

劉志平（1979-），男，副教授，博士，研究方向：天然產(chǎn)物的分離與改性合成。

TQ0418

A

1004-0935（2021）12-1778-04