代占輝，李 茜，郝 丹，王紅連，鄭利杰，趙曉鈺

（1.河北大午農(nóng)牧集團(tuán)種禽有限公司 072550；2.河北省畜牧獸醫(yī)研究所 071000；3.河北省畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì) 050000）

禽白血病主要以垂直傳播方式進(jìn)行傳播，也可水平傳播，能夠造成多種類型腫瘤,給家禽業(yè)帶來(lái)重大經(jīng)濟(jì)損失。禽白血病目前沒(méi)有疫苗，對(duì)其防控只能進(jìn)行徹底凈化。

河北大午農(nóng)牧集團(tuán)種禽有限公司經(jīng)過(guò)多年的探索與實(shí)踐，形成了蛋雞核心育種群（純系）的禽白血病凈化程序：1日齡全群胎糞檢測(cè)，6～8周齡全群血漿病毒分離，開(kāi)產(chǎn)初期母雞蛋清普檢2枚、公雞血漿和精液病毒分離，繼代選育留種前母雞蛋清普檢2枚、公雞血漿和精液病毒分離。而1日齡全群胎糞檢測(cè)對(duì)禽白血病凈化非常重要，既能評(píng)估蛋雞核心育種群上一世代的凈化進(jìn)展，又能為新世代的持續(xù)凈化打下良好基礎(chǔ)，及早淘汰陽(yáng)性雞只，從根本上避免雞群早期可能發(fā)生水平感染，因?yàn)殡u群日齡越小，禽白血病發(fā)生水平感染的幾率越大[1]。

大午褐蛋雞核心育種群由E、F、C、D四個(gè)純系組成，每年繼代

選育出雛時(shí)，需要留下母雞12000只、公雞2500只，因此大午褐蛋雞核心育種群1日齡胎糞檢測(cè)樣品至少在24000份以上，為了保證出雛后24h內(nèi)完成檢測(cè)[2]，應(yīng)做好以下幾方面：

1 組織保障

1日齡胎糞禽白血病檢測(cè)是一項(xiàng)系統(tǒng)工程，需要育種部、生產(chǎn)部、技術(shù)部、獸醫(yī)室等多部門共同參加。育種部負(fù)責(zé)胎糞采集相關(guān)工作，包括純系出雛記錄2人、雌雄鑒別與胎糞采集1人、胎糞樣品做標(biāo)記2人、分發(fā)翅號(hào)與記錄1人、帶翅號(hào)2人，以上8人為一組，本環(huán)節(jié)需要安排五個(gè)小組（每名翻肛雌雄鑒別員要鑒別5000只雛雞左右同時(shí)要采集胎糞）；技術(shù)部負(fù)責(zé)胎糞樣品的處理工作，包括樣品震蕩混勻3人、樣品冷凍1人、樣品速溶4人、樣品離心4人，樣品記錄2人、記錄輸入電腦1人、統(tǒng)計(jì)結(jié)果1人；獸醫(yī)室負(fù)責(zé)胎糞ALVp27 抗原實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作，分成兩組，每組5人；生產(chǎn)部負(fù)責(zé)胎糞檢測(cè)的后續(xù)工作，包括陽(yáng)性雞只挑選2人、陽(yáng)性雞只記錄1人。高質(zhì)量完成大午褐蛋雞1日齡胎糞禽白血病檢測(cè)，需69人的齊心合作，因此做好有效的組織保障是基礎(chǔ)。

2 胎糞的有效處理

胎糞進(jìn)行禽白血病檢測(cè)前，必須對(duì)胎糞進(jìn)行快速凍融處理，使細(xì)胞裂解，讓可能存在的禽白血病病毒從細(xì)胞中游離出來(lái)[3]，利于準(zhǔn)確檢測(cè)。

對(duì)胎糞的處理措施為“兩凍、三搖、兩融、一離心”，具體流程：胎糞采集→第一次震蕩混勻（時(shí)間60s）→第一次冷凍（時(shí)間10s）→第一次溶解（水溫37℃、時(shí)間60s）→第二次震蕩混勻（時(shí)間60s）→第二次冷凍（時(shí)間10s）→第二次溶解（水溫37℃、時(shí)間60s）→第三次震蕩混勻（時(shí)間60s）→高速離心（轉(zhuǎn)速10000rpm/m）。

3 胎糞實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

離心后的胎糞送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行ALVp27抗原檢測(cè)，一般流程：

樣品加入反應(yīng)板孵育1h→第一次洗板→加入酶標(biāo)二抗孵育1h→第二次洗板，加入底物液孵育15min→加入終止液→應(yīng)用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果→將結(jié)果反饋到孵化室追溯陽(yáng)性雞只、予以淘汰。

特別注意不同廠家的試劑盒，檢測(cè)要求不同，以A、B、C三個(gè)不同廠家為例：①胎糞檢測(cè)用稀釋液不同：A、B廠家稀釋液為專用，C廠家稀釋液為鹽水或PBS；②胎糞檢測(cè)孵育溫度不同：A、B廠家孵育溫度為常溫，C廠家孵育溫度為37℃；③胎糞檢測(cè)用洗液不同：A廠家洗液為蒸餾水，B、C廠家洗液為濃縮液，需要稀釋；④胎糞檢測(cè)用酶標(biāo)二抗不同：A、C廠家酶標(biāo)二抗可以直接使用，B廠家酶標(biāo)二抗需要配制后使用；⑤胎糞檢測(cè)用底物液不同：A、B廠家底物液可以直接使用，C廠家底物液分開(kāi)加入。

經(jīng)過(guò)持續(xù)進(jìn)行大午褐蛋雞核心育種群1日齡胎糞檢測(cè)，效果顯著（見(jiàn)下表）。

不同年度1日齡胎糞ALVp27檢測(cè)圖表

4 精準(zhǔn)追溯

每只純系雛雞的胎糞檢測(cè)后，為做到精準(zhǔn)追溯，也就是能夠及時(shí)、準(zhǔn)確找到陽(yáng)性雞只并予以淘汰，經(jīng)過(guò)近年來(lái)不斷改進(jìn)1日齡胎糞檢測(cè)系統(tǒng)工程相關(guān)方法、措施，建立了可精準(zhǔn)追溯關(guān)鍵控制點(diǎn)：①每只留種純系母雞的每枚種蛋在孵化至18胚齡時(shí)轉(zhuǎn)移到單個(gè)孵化紙盒，同時(shí)在紙盒上做好標(biāo)記，再進(jìn)行孵化出雛；21胚齡出雛后，再轉(zhuǎn)移至新的單個(gè)孵化紙盒、做標(biāo)記，這樣從源頭上就避免了可能出現(xiàn)的混淆，為此我們申請(qǐng)了一項(xiàng)實(shí)用新型專利（一種防止交叉感染的便于單個(gè)雛雞檢測(cè)的孵化紙盒，申請(qǐng)?zhí)枺?02121182419.5）；②選用高質(zhì)量的1.5mL離心管，用于胎糞的采集，主要是離心管蓋能夠封閉嚴(yán)密、離心管壁韌性大，防止在樣品處理過(guò)程中離心管蓋子松動(dòng)、管壁破損；③在離心管上做的標(biāo)記清晰、易辨認(rèn)；④使用液氮冷凍胎糞樣品時(shí)，為防止裝有胎糞的離心管在液氮中漂出、遺落在液氮罐里，對(duì)液氮罐配套的提筒做一個(gè)蓋子（開(kāi)關(guān)便捷），蓋上留有若干個(gè)直徑3mm小孔，便于液氮淹沒(méi)提筒。

通過(guò)對(duì)大午褐蛋雞核心育種群持續(xù)進(jìn)行1日齡全群胎糞科學(xué)檢測(cè)，及早淘汰陽(yáng)性雞只，避免可能的水平感染，為該品種禽白血病的徹底凈化打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)，同時(shí)能夠?yàn)槠渌仪莸膬艋哂薪梃b意義。