姚晶晶，匡 釗，丁蘇蘇

（江蘇省揚(yáng)州市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，江蘇 揚(yáng)州 225001）

妥布霉素地塞米松滴眼液為混懸復(fù)方制劑，具有抗菌作用，主要用于治療眼瞼、球結(jié)膜、角膜及眼球前段組織病變［1］。滴眼液處方中加入依地酸二鈉（EDTA-2Na）作為螯合劑，可增強(qiáng)其穩(wěn)定性［2-4］，但過(guò)量使用依地酸二鈉會(huì)造成混懸滴眼液結(jié)塊，影響療效。依地酸二鈉的測(cè)定方法主要包括衍生化高效液相色譜法和離子色譜法［5-6］。衍生化高效液相色譜法需加入金屬離子絡(luò)合，干擾因素多；而離子色譜法常用于檢測(cè)無(wú)機(jī)離子和有機(jī)小分子離子，具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、專(zhuān)屬性好、分析準(zhǔn)確可靠等優(yōu)勢(shì)，廣泛用于藥物質(zhì)量控制［7-10］。本研究中采用抑制性離子色譜系統(tǒng)測(cè)定依地酸二鈉陰離子，為控制妥布霉素地塞米松滴眼液中依地酸二鈉的用量提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Thermo ICS-5000+型離子色譜儀（賽默飛世爾科技＜中國(guó)＞公司）；Milli-Q IQ 7000 型超純水系統(tǒng)（德國(guó)Merck Millipore 公司）；XS205DU 型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為0.01 mg）；KH-400KDB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；ARES 500 型抑制器（4 mm，美國(guó)Dionex 公司）。

1.2 試藥

依地酸二鈉對(duì)照品（曼哈格檢測(cè)技術(shù)股份有限公司，批號(hào)為C0006654，含量為99.9%）；妥布霉素地塞米松滴眼液（廠家A，批號(hào)分別為190503，190817；廠家B，批號(hào)為J 190709；廠家C，批號(hào)為19D30BA）；氫氧化鉀溶液（美國(guó)Dionex 公司）；苯扎溴銨對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為135051 -201401，含量為10.9 mg／mL）；氯化鈉、亞硫酸二鈉、硫酸鈉、硝酸鉀、磷酸氫二鈉均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

陰離子色譜柱：Dionex IonPacTMAS11-HC 分析柱（250 mm×4 mm）；Dionex IonPacTMAG11-HC 保護(hù)柱（50 mm×4 mm）；淋洗液：含30 mmol／L 的氫氧化鉀溶液；流速：1.0 mL／min；電導(dǎo)檢測(cè)器：ASRS-ULTRA 抑制模式，抑制電流為75 mA；檢測(cè)池溫度：25 ℃；進(jìn)樣量：25 μL。

2.2 溶液制備

1.EDTA2- 2.Cl- 3.SO32- 4.SO42- 5.Br- 6.NO3- 7.PO43-圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)離子色譜圖1.EDTA2- 2.Cl - 3.SO32- 4.SO42- 5.Br - 6.NO3- 7.PO43-Fig.1 Ion chromatogram of the system suitability test

取依地酸二鈉對(duì)照品37.22 mg，精密稱(chēng)定，置25 mL 容量瓶中，加水定容，即得對(duì)照品溶液。精密量取樣品（廠家A）1 mL，置50 mL 容量瓶中，加水定容，搖勻，即得供試品溶液A；精密量取樣品（廠家B、廠家C）各1 mL，分別置10 mL 容量瓶中，加水定容，搖勻，即得供試品溶液B，C。取氯化鈉29.21 mg，亞硫酸二鈉25.20 mg，硫酸鈉14.17 mg，依地酸二鈉27.22 mg，硝酸鉀20.25 mg，磷酸氫二鈉27.60 mg，精密稱(chēng)定，分別置25 mL 容量瓶中，加水定容，精密量取上述溶液各0.25 mL，苯扎溴銨對(duì)照品0.1 mL，置20 mL 容量瓶中，加水定容，即得質(zhì)量濃度為5～100 mg／L 的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用混合溶液。以水為空白溶劑。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)和專(zhuān)屬性試驗(yàn)：取2.2 項(xiàng)下混合溶液25 μL，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，各陰離子理論板數(shù)均＞2 000，分離度均≥1.5，相互間分離良好，詳見(jiàn)圖1。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相同保留時(shí)間處有相應(yīng)峰出現(xiàn)，且空白溶劑對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖2。

線性關(guān)系考察：取2.2 項(xiàng)下對(duì)照品溶液75，100，200 μL 及0.5，1.0，1.5 mL，分別置20 mL 容量瓶中，用水定容，搖勻，即得質(zhì)量濃度分別為5.58，7.44，14.89，37.22，74.44，111.66mg／L 的系列對(duì)照品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以依地酸二鈉質(zhì)量濃度（X，mg／L）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y ＝0.049 6 X-0.005 0（r ＝0.999 9，n ＝6）。結(jié)果 表 明，依 地 酸 二 鈉 質(zhì) 量 濃 度 在5.58～111.66 mg／L 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

1.依地酸二鈉A.空白溶劑 B.對(duì)照品溶液 C.供試品溶液圖2 專(zhuān)屬性試驗(yàn)離子色譜圖1.disodium edetateA.Blank solvent B.Reference solution C.Test solutionFig.2 Ion chromatograms of the specificity test

定量限考察：取依地酸二鈉對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為5.58 mg／L），用水逐級(jí)稀釋?zhuān)?.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以信噪比（S／ N）為10 ∶1 時(shí)計(jì)算定量限。結(jié)果定量限為23.25 ng。

精密度試驗(yàn)：取2.2 項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6 次，記錄峰面積。結(jié)果依地酸二鈉峰面積的RSD 為0.84%（n ＝6 ），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2.2 項(xiàng)下對(duì)照品溶液，分別于室溫下放置0，2，4，8，12，24，48 h 時(shí)按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果依地酸二鈉峰面積的RSD 為1.31%（n ＝7），表明對(duì)照品溶液在室溫下放置48 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為190817）適量，共6 份，依法制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果依地酸二鈉的平均含量為0.968 7 mg／mL，RSD 為1.40%（n ＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取已知含量的樣品（批號(hào)為190817）2.5 mL，置100 mL 容量瓶中，共9 份，分別精密加入對(duì)照品溶液1.0，1.5，2.0 mL，各3 份，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n ＝9）Tab.1 Results of the recovery test（n ＝9）

2.4 樣品含量測(cè)定

取4 批樣品各適量，分別按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，每批樣品測(cè)定2 份，記錄峰面積，并計(jì)算樣品含量。結(jié)果批號(hào)為190503，190817，J190709，19D30BA 樣品中依地酸二鈉含量分別為0.876 0，0.968 7，0.257 1，0.120 9 mg／mL。

3 討論

妥布霉素地塞米松滴眼液常見(jiàn)輔料包括依地酸二鈉、氯化鈉、硫酸鈉、苯扎溴銨，考慮到上述輔料中Cl-，Br-，SO42-等離子可能干擾依地酸二鈉含量測(cè)定，故本研究中對(duì)上述離子進(jìn)行考察。結(jié)果表明，妥布霉素地塞米松滴眼液中其他離子對(duì)依地酸二鈉含量測(cè)定均無(wú)干擾。

依地酸二鈉在離子色譜柱中保留能力弱，選用Dionex IonPacTMAS11-HC 分析柱和氫氧化鉀淋洗液，可使依地酸二鈉較快出峰，為了更好地分離依地酸二鈉與常規(guī)陰離子，本研究中在1.0～1.5 mL／min 范圍內(nèi)改變淋洗液流速，考察流速對(duì)依地酸二鈉含量測(cè)定的影響。結(jié)果，流速變化對(duì)依地酸二鈉與其他離子的分離度影響不明顯；再將淋洗液氫氧化鉀質(zhì)量濃度從20 mmol／L調(diào)至30 mmol／L，使各陰離子間的分離度得到了改善。依地酸二鈉在工藝處方中常用作穩(wěn)定劑［11-13］，可提高藥物的穩(wěn)定性，但不同廠家的用量差異較大，依地酸二鈉的安全用量有待進(jìn)一步研究。