蘇看看，陳歡歡，張炳峰，張潔心(南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)學(xué)部，南京210029)

老年群體由于重要器官功能下降常發(fā)生腎功能濾過率降低、呼吸道萎縮通氣降低以及組織內(nèi)缺氧等疾病變化。盡管其血液pH仍維持在正常范圍，但實(shí)際緩沖能力低，極易酸堿失衡。若合并常見的老年基礎(chǔ)病，如慢性阻塞性肺病、腎功能不全等，嚴(yán)重者將出現(xiàn)混合型酸堿平衡紊亂[1-2]，病程長，預(yù)后不佳。因此，及時(shí)準(zhǔn)確獲得血液中碳酸氫根(HCO3-)濃度對(duì)于老年人呼吸性酸堿平衡、代謝性酸堿平衡動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)和鑒別診斷尤為重要。血液中HCO3-和二氧化碳(CO2)相互動(dòng)態(tài)轉(zhuǎn)化，血清CO2濃度可輔助診斷血液酸堿平衡。

近年來，臨床實(shí)驗(yàn)室開展的血清CO2濃度檢測(cè)以磷酸烯醇式丙酮酸羥化酶法(phosphoenolpyruvate carboxylase method，PEPC法)和循環(huán)酶法(cycle enzyme method，CEM法)應(yīng)用最為廣泛。除了已有兩種方法特征和試劑盒性能參數(shù)的研究以外[3-4]，還應(yīng)注意，血清中有少量(約5%)以物理形式溶解的CO2氣體。檢測(cè)前標(biāo)本處于開蓋狀態(tài)，CO2氣體將自發(fā)溢出至大氣，檢測(cè)結(jié)果將隨著時(shí)間延長而逐漸降低[5-6]?？s短標(biāo)本與空氣接觸的時(shí)間(即加快標(biāo)本檢測(cè)前處理速度)是檢驗(yàn)前質(zhì)量管理的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。本研究在采用全自動(dòng)生化流水線的大標(biāo)本量實(shí)驗(yàn)室中模擬標(biāo)本在流水線上的開蓋待檢狀態(tài)，用CEM法和PEPC法在不同時(shí)間點(diǎn)分別檢測(cè)血清CO2濃度，比較并探討檢驗(yàn)前環(huán)境因素對(duì)2種酶法檢測(cè)血清CO2的潛在影響。

1 材料和方法

1.1標(biāo)本收集及處理 收集一周內(nèi)需檢測(cè)血清CO2濃度標(biāo)本，共計(jì)58份。隨機(jī)收集其中1 d 10例患者(7例門診、3例住院)靜脈血各2 mL，1 760×g離心10 min分離血清。標(biāo)本均無溶血、脂血或黃疸。每份標(biāo)本開蓋后室溫靜置，按初始0 h、放置1 h、放置3 h和放置6 h 4個(gè)時(shí)間點(diǎn)。

1.2儀器和試劑 Power Express全自動(dòng)生化流水線，包括3臺(tái)AU5800型全自動(dòng)生化分析儀(Beckman Coulter公司)，指定其中1臺(tái)檢測(cè)血清CO2濃度。

PEPC法試劑(四川邁克公司)，CEM法試劑(波音特公司)，PEPC法中供氫體試劑為還原輔酶Ⅰ(NADH)，CEM法為乙?；?NADH，其余試劑成分同。反應(yīng)體系按照試劑盒說明書設(shè)置，樣本檢測(cè)時(shí)間依次為每份10 min、3 min。

1.3方法 通過流水線配套Cennexus軟件,獲得1周內(nèi)需檢測(cè)血清CO2濃度標(biāo)本開蓋后的在線分段時(shí)長。用Excel軟件分別統(tǒng)計(jì)標(biāo)本在線上的等待時(shí)長(T1)、儀器待檢時(shí)長(T2)和開蓋等待檢測(cè)總時(shí)長(T3)。

收集1 d中所有需檢測(cè)血清CO2濃度的標(biāo)本，經(jīng)前處理標(biāo)準(zhǔn)化離心操作并開蓋室溫靜置，在不同時(shí)間點(diǎn)(0 h，1 h，3 h，6 h)分別用2種試劑檢測(cè)每份標(biāo)本血清CO2濃度，以初始0 h血清CO2濃度作為每份標(biāo)本的真實(shí)值，將其余3個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果分別與各自真實(shí)值計(jì)算偏倚。

2 結(jié)果

1周內(nèi)需檢測(cè)血清CO2濃度的58份標(biāo)本，T1為(50±18)min，T2為(61±33)min，T3為(110±38)min，即每份標(biāo)本開蓋待檢時(shí)長約為2 h。

隨機(jī)收集其中1 d 10例患者血清標(biāo)本，CEM法初始血清CO2濃度檢測(cè)值為(18.6±2.7) mmol/L，PEPC法為(19.1±1.5) mmol/L，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。保持開蓋且室溫靜置，在不同時(shí)間點(diǎn)(1、3、6 h)分別使用2種方法依次檢測(cè)。由表1所示，標(biāo)本開蓋1 h與初始0 h血清CO2濃度相比，2種方法的測(cè)量偏倚均在±10%以內(nèi)，CEM法為-2.63%～3.28%，PEPC法為-7.73%～9.39%。當(dāng)開蓋時(shí)長達(dá)3 h時(shí)，CEM法測(cè)量偏倚為-5.71%～1.09%，而PEPC法偏倚持續(xù)增加，達(dá)-11.70%～17.86%。

日常工作中若流水線發(fā)生故障(如分析模塊燈泡故障、注射器滲水等)可造成標(biāo)本超長開蓋待檢時(shí)長。此時(shí)，PEPC法測(cè)量偏倚在單份標(biāo)本中可超過30%(表1門診6)，在近半數(shù)標(biāo)本(40%)中超過20%，相比之下CEM法測(cè)量偏倚僅在兩份標(biāo)本中超過10%(表1門診1和門診3)。因此，盡管2種方法所得血清CO2濃度隨著標(biāo)本開蓋時(shí)長增加呈現(xiàn)相似的下降趨勢(shì)(CEM法，F(xiàn)=51.71，P<0.01；PEPC法，F(xiàn)=7.304，P<0.05)，但CEM法能有效克服開蓋后環(huán)境因素累積影響所引起的血清CO2濃度下降問題(見圖1)。

表1 指定時(shí)間點(diǎn)2種方法檢測(cè)血清CO2濃度偏倚(%)

注：*,P<0.01；**,P<0.000 1。圖1 使用CEM法和PEPC法在指定時(shí)間點(diǎn)分別檢測(cè)血清CO2濃度

3 討論

已知檢測(cè)CO2的方法有電極法、CEM法和PEPC法[7]。由于電極膜有壽命限制，且其穩(wěn)定性和滲透性會(huì)隨著時(shí)間推移而下降，極易導(dǎo)致結(jié)果偏低，因此電極法已被淘汰。CEM法和PEPC法均為酶法，具有特異性強(qiáng)，反應(yīng)速度快，樣本需要量少的明顯優(yōu)勢(shì)，適用于全自動(dòng)生化分析儀高效批量檢測(cè)，目前已在臨床實(shí)驗(yàn)室普遍推廣應(yīng)用[8-9]。

本實(shí)驗(yàn)室每天在線標(biāo)本量超過2 500份，通過大數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)可知1周內(nèi)有血清CO2濃度檢測(cè)項(xiàng)目的標(biāo)本在檢測(cè)前平均有2 h處于開蓋狀態(tài)。標(biāo)本室溫放置時(shí)間(1、3 h)較短時(shí)，CEM法檢測(cè)血清CO2濃度結(jié)果偏倚僅-5.71%～3.28%。當(dāng)流水線發(fā)生一些日常能及時(shí)處理的故障，如條碼掃描器不識(shí)別、儀器抓手故障和連接模塊卡試管架等[10-12]，標(biāo)本開蓋等待檢測(cè)總時(shí)長增加，CEM法仍表現(xiàn)出較好的穩(wěn)定性，符合本室ISO15189文件中規(guī)定的血清CO2項(xiàng)目質(zhì)量要求(允許偏倚<15%)。另外，使用CEM法檢測(cè)單份血清CO2濃度時(shí)間僅為3 min，比使用PEPC法縮短7 min，在實(shí)際應(yīng)用中我們發(fā)現(xiàn)CEM法確實(shí)可進(jìn)一步提高標(biāo)本檢測(cè)效率。因此，面對(duì)標(biāo)本量日益增大且標(biāo)本開蓋待檢時(shí)長增加的情況，CEM法是更加穩(wěn)定可靠的檢測(cè)方法，也更加適用于配備全自動(dòng)生化分析流水線的實(shí)驗(yàn)室。

本研究以檢驗(yàn)前環(huán)境為切入點(diǎn)，通過模擬標(biāo)本在流水線上的待檢狀態(tài)深入比較和分析不同酶法定量檢測(cè)血清CO2的差異，為其他實(shí)驗(yàn)室選擇更貼合實(shí)際工作情況的檢測(cè)方法學(xué)提供了有價(jià)值的參考信息。本研究還提出，其他易受實(shí)驗(yàn)室環(huán)境影響的項(xiàng)目也應(yīng)做類似的方法學(xué)比較，在檢測(cè)前質(zhì)量控制手段不斷優(yōu)化、質(zhì)量管理制度持續(xù)完善的前提下(如流水線智慧化管理、檢測(cè)項(xiàng)目優(yōu)先權(quán)設(shè)置、檢驗(yàn)閉環(huán)大數(shù)據(jù)監(jiān)控)[13-14]，為臨床提供更加準(zhǔn)確可靠的項(xiàng)目結(jié)果。