亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        中毒顆粒人工鏡檢定量方法的建立及臨床應(yīng)用

        2022-01-05 10:25:34張文萍張仲明羅燕婷楊燕梅余志勇曲久鑫
        檢驗(yàn)醫(yī)學(xué) 2021年12期
        關(guān)鍵詞:涂片中性粒細(xì)胞

        張文萍, 張仲明, 羅燕婷, 楊燕梅, 余志勇, 曲久鑫

        [深圳市第三人民醫(yī)院(南方科技大學(xué)附屬第二醫(yī)院)檢驗(yàn)科,廣東 深圳 518114]

        細(xì)菌性感染是臨床常見的感染性疾病之一,嚴(yán)重細(xì)菌性感染導(dǎo)致的膿毒癥是導(dǎo)致患者死亡的重要原因之一[1]。不同性質(zhì)的感染臨床治療方法不同,故臨床實(shí)驗(yàn)室快速鑒別病原菌意義重大[2]。目前,臨床對(duì)細(xì)菌性感染的確診主要根據(jù)微生物培養(yǎng)結(jié)果,但該法陽(yáng)性率和準(zhǔn)確性受標(biāo)本采集等因素影響較大,且耗時(shí)長(zhǎng),一般需3~4 d,無法滿足急診危重患者的救治需求[3]。因此,臨床實(shí)驗(yàn)室迫切需要尋找成本較低,能準(zhǔn)確診斷感染程度的指標(biāo)。

        有研究結(jié)果表明,中毒顆粒、空泡、杜勒小體等中性粒細(xì)胞形態(tài)改變對(duì)診斷急性細(xì)菌感染有較大價(jià)值[3-4],聯(lián)合中性粒細(xì)胞絕對(duì)值、桿狀核粒細(xì)胞比例可提高診斷細(xì)菌感染性疾病的敏感性[5]。雖然顯微鏡下中性粒細(xì)胞形態(tài)改變(中毒顆粒、空泡、杜勒小體)一直是判斷患者細(xì)菌感染程度的參考,但因無統(tǒng)一識(shí)別標(biāo)準(zhǔn),且檢測(cè)結(jié)果受檢測(cè)人員主觀因素和染色因素影響,難以標(biāo)準(zhǔn)化[6-8],大多數(shù)臨床實(shí)驗(yàn)室未常規(guī)開展,只有在鏡檢發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重中毒顆粒存在時(shí),才作為細(xì)菌感染的佐證告知臨床,而臨床醫(yī)生在進(jìn)行疾病診療時(shí)往往希望有更多證據(jù)提示患者感狀情況,尤其是能在疾病發(fā)展早期給出標(biāo)準(zhǔn)的量化提示。本研究擬建立定量檢測(cè)外周血中性粒細(xì)胞中毒顆粒的方法,以指導(dǎo)臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)患者外周血中的中毒顆粒進(jìn)行準(zhǔn)確的定量識(shí)別,明確染色因素對(duì)中毒顆粒鏡下識(shí)別結(jié)果的影響,以及中毒顆粒在鑒別細(xì)菌性感染中的價(jià)值。

        1 材料和方法

        1.1 研究對(duì)象

        隨機(jī)選取深圳市第三人民醫(yī)院感染科、呼吸內(nèi)科等診斷明確的62例細(xì)菌感染患者(感染組),其中男36例、女26例,年齡18~87歲;以同期50名體檢健康者作為正常對(duì)照組,其中男21名、女29名,年齡24~64歲。

        1.2 方法

        參考相關(guān)文獻(xiàn)[9-11],結(jié)合不同臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)中毒顆粒識(shí)別的方法,建立中毒顆粒鏡下人工定量方法。(1)中毒顆粒與疾病的關(guān)系。收集所有研究對(duì)象就診時(shí)的乙二胺四乙酸二鉀抗凝全血樣本,為消除制片和染色過程中操作誤差的干擾,統(tǒng)一使用SC-120全自動(dòng)推染片機(jī)(深圳邁瑞公司),在默認(rèn)染色[瑞氏-吉姆薩染液(珠海Baso公司)]條件下制備標(biāo)準(zhǔn)化外周血涂片(每例樣本制備2張血涂片),由2名有豐富閱片經(jīng)驗(yàn)的技師對(duì)血涂片進(jìn)行鏡檢,計(jì)數(shù)100個(gè)中性粒細(xì)胞,并根據(jù)制定的規(guī)則對(duì)每個(gè)中性粒細(xì)胞中毒顆粒程度進(jìn)行分級(jí),計(jì)算中毒顆粒定量參數(shù);(2)染色條件的影響。隨機(jī)挑選3例感染科患者樣本和2例體檢者樣本,每例樣本用推染片機(jī)制備10張不同染色條件的血涂片(表1),分為5組,每組2張,由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)人員對(duì)血涂片進(jìn)行鏡檢;按照制定的規(guī)則計(jì)算各組血涂片中毒顆粒定量結(jié)果;以正常染色條件(C組)下的結(jié)果作為參考值,其他染色條件(A、B、D、E組,表1)下的結(jié)果作為實(shí)驗(yàn)組結(jié)果,計(jì)算實(shí)驗(yàn)組中毒顆粒鏡檢結(jié)果與參考值的偏差,然后以樣本編號(hào)作為橫坐標(biāo),以不同染色條件下的結(jié)果的偏差作為縱坐標(biāo)繪制結(jié)果偏差圖。

        表1 染色時(shí)間與染色比例選擇及血涂片染色數(shù)量

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        采用GraphPad Prism 8.4.3軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈非正態(tài)分布的計(jì)量資料采用中位數(shù)(M)[四分位數(shù)(P25~P75)]表示,組間比較采用Mann-Whitney檢驗(yàn)。采用受試者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲線評(píng)估中毒指數(shù)和中毒積分診斷細(xì)菌感染性疾病的效能。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 中毒顆粒鏡檢定量方法

        中毒顆粒鏡檢定量方法以中毒指數(shù)和/或中毒積分表示。(1)油鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)中性粒細(xì)胞,計(jì)算中毒指數(shù),計(jì)算公式為:中毒指數(shù)=含中毒顆粒的中性粒細(xì)胞/[所有計(jì)數(shù)的中性粒細(xì)胞數(shù)(通常為100或200個(gè))]×100%。(2)計(jì)數(shù)100個(gè)中性粒細(xì)胞,并按分級(jí)方法(表2、圖1)對(duì)每個(gè)中性粒細(xì)胞中毒顆粒情況進(jìn)行計(jì)分,計(jì)算中毒積分(100個(gè)中性粒細(xì)胞的積分總和),計(jì)算公式為:中毒積分=∑(Ni×Si)/∑Ni×100,式中i表示含中毒顆粒的中性粒細(xì)胞的等級(jí)(分別為0、1、2、3、4級(jí)),N表示每個(gè)等級(jí)中性粒細(xì)胞的數(shù)量,S表示每個(gè)等級(jí)所對(duì)應(yīng)的中毒積分(分別為0、1、2、3、4分)。

        表2 單個(gè)中性粒細(xì)胞中毒顆粒分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

        圖1 各級(jí)含中毒顆粒中性粒細(xì)胞顯微鏡下形態(tài)

        2.2 不同染色條件下中性粒細(xì)胞中毒顆粒著色情況及定量結(jié)果比較

        不同染色條件下中性粒細(xì)胞中毒顆粒著色情況見圖2,中毒指數(shù)和中毒積分與參考值結(jié)果的絕對(duì)偏差見圖3。其中樣本3和5為對(duì)照組,樣本1、2、4為感染組;A組樣本中毒顆粒定量結(jié)果顯著低于C組(參考值),提示中毒顆粒未完全著色,導(dǎo)致人工鏡下識(shí)別假陰性;B組中毒顆粒定量結(jié)果偏差不一,提示該染色條件下中毒顆粒著色不一,導(dǎo)致人工識(shí)別存在較大主觀誤差;D、E組樣本中毒顆粒定量結(jié)果顯著高于C組(參考值),提示中毒顆粒著色過深,導(dǎo)致人工鏡下識(shí)別假陽(yáng)性。

        圖2 不同染色條件下中性粒細(xì)胞中毒顆粒著色情況

        圖3 不同染色條件下中毒指數(shù)和中毒積分定量結(jié)果偏差圖

        2.3 細(xì)菌感染組與正常對(duì)照組中毒指數(shù)、中毒積分比較

        細(xì)菌感染組中毒指數(shù)為48.7(22.2~84.5)%中毒積分為58.0(12.0~131.1)分,均顯著高于正常對(duì)照組[2.0(1.0~5.0)%、2(1~5)分](Z值分別為-8.64、-3.46,P<0.000 1。

        2.4 中毒指數(shù)與中毒積分診斷細(xì)菌感染的效能

        ROC曲線分析結(jié)果顯示,中毒指數(shù)和中毒積分診斷細(xì)菌感染的曲線下面積(95%可信區(qū)間)分別為0.921(0.862~0.980)和0.900(0.838~0.963),最佳臨界值分別為6%、6分,敏感性分別為88.7%和83.9%,特異性分別為86.0%和86.0%。見圖4。

        圖4 中毒指數(shù)與中毒積分診斷細(xì)菌感染性疾病的ROC曲線

        2.5 中毒指數(shù)與中毒積分的關(guān)系

        相關(guān)性分析結(jié)果顯示,中毒指數(shù)和中毒積分呈正相關(guān)(r2=0.89),在正常對(duì)照者或輕度感染患者中,2個(gè)指標(biāo)結(jié)果一致性較好,但中毒顆粒分級(jí)較高時(shí),中毒積分較中毒指數(shù)有更寬的檢測(cè)范圍。見圖5。

        圖5 中毒指數(shù)與中毒積分的相關(guān)性

        3 討論

        中毒顆粒是中性粒細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中比正常中性顆粒粗大、大小不等、呈黑色或紫黑色的顆粒[9],實(shí)際上是特殊中性粒細(xì)胞嗜苯胺藍(lán)顆粒,其在早幼粒細(xì)胞階段形成,并在中性粒細(xì)胞中成熟,含有效抗菌成分[10-11]。當(dāng)發(fā)生嚴(yán)重細(xì)菌感染時(shí),粒細(xì)胞集落刺激因子被激活,大量未成熟粒細(xì)胞被釋放入外周血,嗜苯胺藍(lán)顆粒中的酸性黏液物質(zhì)不斷增多,最終形成中性粒細(xì)胞中毒顆粒,中毒顆粒在pH值為5.5~7.3時(shí)能有效增強(qiáng)滅菌活性[10-11]。當(dāng)患者被細(xì)菌感染時(shí),中毒顆粒是中性粒細(xì)胞形態(tài)改變的特征之一,通過觀察中性粒細(xì)胞中毒顆粒程度,對(duì)細(xì)菌感染有較好的提示作用[10-11]。

        人工鏡檢是目前中毒顆粒唯一的檢測(cè)方法,能直觀地捕捉到細(xì)胞被攻擊的情況和人體抵抗的狀態(tài)。但在樣本量巨大、檢驗(yàn)項(xiàng)目眾多的臨床實(shí)驗(yàn)室,采用傳統(tǒng)的人工鏡檢方法檢測(cè)中毒顆粒存在一定困難,對(duì)檢測(cè)人員要求較高,且中毒顆粒易與嗜堿性顆?;煜?,中毒顆粒量化無統(tǒng)一識(shí)別標(biāo)準(zhǔn),不同檢測(cè)人員主觀判斷不一致,因此限制了該項(xiàng)目的廣泛應(yīng)用[5]。

        有學(xué)者建議以中毒指數(shù)對(duì)中毒顆粒進(jìn)行定量,但該方法只有中毒顆粒中性粒細(xì)胞比例,未對(duì)單個(gè)中性粒細(xì)胞中毒顆粒程度進(jìn)行準(zhǔn)確分級(jí)[12-13]。有研究發(fā)現(xiàn),在中毒指數(shù)>80%的區(qū)域內(nèi),中毒指數(shù)上升趨勢(shì)明顯下降,不能很好地反映中毒顆粒數(shù)量與大小,而中毒積分相對(duì)于中毒指數(shù)在整個(gè)區(qū)域內(nèi)均有良好的上升趨勢(shì),有更寬的檢測(cè)范圍,在中毒顆粒較多的情況下,可更準(zhǔn)確地反映中毒顆粒數(shù)量。本研究建立的分級(jí)和積分計(jì)算方法根據(jù)中毒顆粒大小、數(shù)量和密度進(jìn)行分級(jí),并給出對(duì)應(yīng)參考圖示,可更好地幫助檢測(cè)人員進(jìn)行中毒顆粒分級(jí)和積分計(jì)算,與臨床實(shí)驗(yàn)室開展中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色定量方法類似,實(shí)驗(yàn)室工作人員更易接受。

        本研究結(jié)果表明,中毒顆粒定量結(jié)果與血涂片染色質(zhì)量關(guān)系較大,在染色偏堿或染色時(shí)間過長(zhǎng)時(shí),正常中性粒細(xì)胞的顆粒會(huì)著色加深,導(dǎo)致中毒顆粒假陽(yáng)性;在染色偏酸或染色時(shí)間不足時(shí),中毒顆粒著色偏淺,可能無法被準(zhǔn)確地識(shí)別,導(dǎo)致假陰性結(jié)果。因此,建議臨床實(shí)驗(yàn)室使用固定染色條件下的推染片機(jī)統(tǒng)一制備標(biāo)準(zhǔn)的外周血涂片,然后再進(jìn)行中毒顆粒的人工鏡檢,以消除人工操作帶來的誤差。本研究使用的全自動(dòng)推染片機(jī),其默認(rèn)染液和緩沖液的比例是2∶18,染色時(shí)間為瑞氏-吉姆薩染液A液染色1 min,A和B混合液染色4 min,具有良好的染色效果。有學(xué)者發(fā)現(xiàn),全自動(dòng)推染片機(jī)在默認(rèn)染色條件下制備的標(biāo)準(zhǔn)血涂片優(yōu)于傳統(tǒng)手工涂片染色[13-15],故以正常染色情況(C組)下的結(jié)果作為參考值,本研究結(jié)果可供其他臨床實(shí)驗(yàn)室參考。

        相關(guān)研究結(jié)果已證實(shí)細(xì)菌感染性疾病與中毒顆粒有關(guān)[13-15]。本研究結(jié)果顯示,細(xì)菌感染組中毒指數(shù)和中毒積分分別為48.7(22.2~84.5)%和58.0(12.0~131.1)分,均顯著高于正常對(duì)照組[2.0(1.0~5.0)%和2(1~5)分,P<0.000 1];此外,中毒指數(shù)和中毒積分診斷細(xì)菌感染性疾病的曲線下面積分別為0.921和0.900,提示本研究所建立的中毒顆粒人工鏡檢定量方法能有效反映患者細(xì)菌感染的情況,完全可以作為指示患者細(xì)菌感染的良好指標(biāo)。由于人工鏡檢的工作量較大,本研究并未將病毒感染患者、膿毒癥患者納入統(tǒng)計(jì),后續(xù)的研究將納入此類病例樣本,分析中毒顆粒在細(xì)菌和病毒感染的鑒別診斷、細(xì)菌感染和膿毒癥的鑒別診斷中的價(jià)值。

        猜你喜歡
        涂片中性粒細(xì)胞
        痰涂片與痰培養(yǎng)在下呼吸道感染診斷中的比較
        直腸FH檢測(cè)剩余液涂片用于評(píng)估標(biāo)本取材質(zhì)量的探討
        經(jīng)方治療粒細(xì)胞集落刺激因子引起發(fā)熱案1則
        英文的中性TA
        低溫高速離心沉淀集菌涂片法查分枝桿菌與直接涂片法查分枝桿菌的比較研究
        高橋愛中性風(fēng)格小配飾讓自然相連
        FREAKISH WATCH極簡(jiǎn)中性腕表設(shè)計(jì)
        嗜酸性粒細(xì)胞增多綜合征的治療進(jìn)展
        誤診為嗜酸粒細(xì)胞增多癥1例分析
        一株中性內(nèi)切纖維素酶產(chǎn)生菌的分離及鑒定
        色偷偷av男人的天堂| 久久老熟女一区二区三区福利| 日韩精品亚洲一区二区| 国产亚洲精品久久777777| 国产99久久无码精品| 精品人妻久久av中文字幕| 后入丝袜美腿在线观看| 亚洲av无码专区在线播放中文| 一本久道久久综合久久| 日本精品久久中文字幕| 91精品国产92久久久| 丰满人妻被黑人猛烈进入| 精品囯产成人国产在线观看| 一区二区三区在线观看精品视频| 欧美最猛性xxxx| 青青草97国产精品免费观看| 久久久精品2019中文字幕之3| 免费看黄片视频在线观看| 天天做天天摸天天爽天天爱| 区久久aaa片69亚洲| 国产人妖xxxx做受视频| 人妻一区二区三区在线看| 女局长白白嫩嫩大屁股| 福利一区视频| 国产一区二区三区涩涩涩 | 天天干夜夜操| 特一级熟女毛片免费观看| 色播视频在线观看麻豆| 国产白嫩护士被弄高潮| 国内精品久久久久影院优| av天堂在线免费播放| 国产suv精品一区二区四| 亚洲欧洲精品成人久久曰影片 | 国产美女高潮流白浆免费观看| 一区二区三区人妻av| 性激烈的欧美三级视频| 久久与欧美视频| 精彩亚洲一区二区三区| 国产女主播精品大秀系列| 国产在线不卡免费播放| 亚洲av午夜福利精品一区不卡|