王 鵬， 泰淑紅， 孟祥穎， 牛 超， 李松磊， 袁恩武

（河南省婦幼保健院 鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450052）

維生素E（vitamin E，Vit E）是人體內(nèi)主要脂溶性維生素之一，是最重要的脂溶性抗氧化劑，參與了多種基因表達(dá)的調(diào)控[1]，其攝入量異?？蓪?dǎo)致疾病的發(fā)生[2]。孕期女性全身各系統(tǒng)會產(chǎn)生一系列生理變化，使母體能適應(yīng)胎兒生長發(fā)育的需要。目前，國內(nèi)對于孕期Vit E水平的研究主要集中在妊娠期的早期、中期、晚期[3-4]，缺少細(xì)分孕期血清Vit E水平連續(xù)變化的相關(guān)數(shù)據(jù)。另外，血清Vit E的參考區(qū)間為5～20 mg/L[2]，是正常非孕成人的標(biāo)準(zhǔn)，不符合妊娠期的代謝特點(diǎn)，不適合作為孕婦Vit E水平是否異常的判斷標(biāo)準(zhǔn)。孕婦的代謝情況與正常女性的差異較大，對營養(yǎng)的需求較高，營養(yǎng)補(bǔ)充不足會影響胎兒發(fā)育。孕婦Vit E水平降低會導(dǎo)致自由基過量積聚，引起血管內(nèi)皮損傷、胎盤老化，從而增加妊娠期高血壓疾病的風(fēng)險(xiǎn)和不良妊娠率；自由基過量積聚還會引起胎膜損傷，增加胎膜早破的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[5-6]。Vit E過量則可能會增強(qiáng)胎兒的血液凝集性、增加新生兒高膽紅素血癥及核黃疸的發(fā)生率[7]。因此，了解不同孕期女性血清Vit E水平的變化特征及其正常分布范圍有重要意義。本研究以4周為1個(gè)周期[8]，觀察不同孕期單胎女性血清Vit E水平的變化情況，并確定其分布范圍，為了解孕期女性Vit E代謝、研究其與各種妊娠期疾病的關(guān)系提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2015年9月—2020年2月在河南省婦幼保健院進(jìn)行孕前體檢的女性483名，納入標(biāo)準(zhǔn)：身體健康，年齡20～35 歲，正常飲食，無藥物服用史，本人知情同意。根據(jù)Vit E檢測結(jié)果剔除5個(gè)異常離群值，共入組478名（未孕組）。選取同期在河南省婦幼保健院進(jìn)行圍產(chǎn)保健的孕婦3 610例，納入標(biāo)準(zhǔn)：單胎妊娠，年齡20～35歲，無既往疾病史，無妊娠期疾病和并發(fā)癥，胎兒發(fā)育正常，正常飲食，無藥物服用史，本人知情同意。根據(jù)Vit E檢測結(jié)果剔除52個(gè)異常離群值，共入組3 558例，根據(jù)孕期分為孕6～8周（358例）、孕9～12周（400例）、孕13～16周（400例）、孕17～20周（400例）、孕21～24周（400例）、孕25～28周（400例）、孕29～32周（400例）、孕33～36周（400例）及孕37～40周（400例）9個(gè)組。

1.2 樣本采集

采用含有分離膠及促凝劑的真空采血管采集所有對象空腹靜脈血2 mL，1 728×g離心10 min，分離血清，4 ℃冷鏈運(yùn)輸，24 h內(nèi)送至北京和合醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所進(jìn)行檢測。溶血、脂血樣本需重新采集。樣本的采集、處理、保存、運(yùn)送嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程執(zhí)行。

1.3 方法

采用高效液相色譜法測定血清Vit E水平，基本步驟：將血清樣本經(jīng)除蛋白及雜質(zhì)處理后，加入正己烷萃取有效成分，取上清液，吹干，復(fù)溶后上樣檢測，以視黃醇乙酸酯和α-生育酚乙酸酯為內(nèi)標(biāo)。檢測儀器為LC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司）。嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行檢測。每個(gè)檢測批次室內(nèi)質(zhì)控均在控。實(shí)驗(yàn)室每年參加國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評，成績均合格。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。離群值的判斷采用箱式圖法。采用K-S檢驗(yàn)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，組間比較采用秩和檢驗(yàn)。采用Spearman相關(guān)分析評估血清Vit E水平與孕期的相關(guān)性。采用百分位數(shù)法[P50（P2.5～P97.5）]確定不同孕期Vit E的分布范圍。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 未孕組不同年齡女性血清Vit E水平的分布

K-S檢驗(yàn)結(jié)果顯示，未孕組部分年齡段女性血清Vit E水平不符合正態(tài)分布（P＜0.05）。未孕組不同年齡段女性血清Vit E水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖1。

圖1 未孕組不同年齡段女性血清Vit E水平分布

2.2 不同孕期女性血清Vit E水平分析

2.2.1 未孕組及不同孕期各組孕婦血清Vit E水平分析 除未孕組、孕6～8周組和孕9～12周組之間以及孕29～32周組、孕33～36周組和孕37～40周組之間血清Vit E水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）外，其他孕期各組血清Vit E水平隨孕期的延長逐漸升高，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05、P＜0.01）。見圖2。

2.2.2 血清Vit E水平與孕期相關(guān)性分析 K-S檢驗(yàn)結(jié)果顯示，不同孕期各組部分女性血清Vit E水平不符合正態(tài)分布（P＜0.01）。Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清Vit E水平與孕期呈正相關(guān)（r=0.66，P＜0.01）。

2.3 不同孕期血清Vit E水平分布范圍的確定

合并血清Vit E水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的孕期組，采用百分位數(shù)法確定不同孕期女性血清Vit E水平的分布范圍，見表1。孕21周后各孕期Vit E水平分布范圍上限均高于正常非孕成人參考區(qū)間上限（20 mg/L）。

表1 不同孕期孕婦血清Vit E水平的分布范圍 mg/L

3 討論

Vit E又稱生育酚，在抗氧化、抗衰老、抗癌變、抗自由基、提高機(jī)體免疫功能等過程中發(fā)揮重要作用[9]。有研究結(jié)果顯示，妊娠期Vit E水平與妊娠糖尿病、妊娠期高血壓疾病及子癇前期有關(guān)[10-11]。由于目前尚缺乏關(guān)于各孕期血清Vit E水平連續(xù)變化的研究數(shù)據(jù)，因此本研究以4周為1個(gè)周期，探討不同孕期單胎孕婦血清Vit E水平連續(xù)變化的情況。

目前，檢測項(xiàng)目參考區(qū)間的建立一般采用美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會推薦的直接法[12]，即根據(jù)特定標(biāo)準(zhǔn)募集參考人群，規(guī)范采樣、檢測，采用統(tǒng)計(jì)分析方法建立參考區(qū)間。但直接法需消耗大量人力、物力，持續(xù)時(shí)間長，過程繁瑣，可操作性較差，尤其對于特殊人群，如兒童、老年人、孕產(chǎn)婦，建立參考區(qū)間的難度非常大。近年來，有較多學(xué)者探討了間接法建立參考區(qū)間的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，他們認(rèn)為，從現(xiàn)有的檢測數(shù)據(jù)中獲得參考區(qū)間是一種較為有效的方法[13-14]。間接法建立參考區(qū)間具有數(shù)據(jù)量大，結(jié)果較為準(zhǔn)確，數(shù)據(jù)來源的人群可以是孕婦、兒童等直接法難以操作的特殊群體，易于操作，可在數(shù)日之內(nèi)得到結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)；但存在不能對人群進(jìn)行問卷調(diào)查和體格檢查，不能完全排除“異質(zhì)”個(gè)體的缺點(diǎn)。

本研究在間接法的基礎(chǔ)上，通過詳細(xì)篩選患者資料，排除疾病、異常飲食和藥物補(bǔ)充對結(jié)果的干擾，制定了“單胎妊娠，年齡20～35歲，無既往疾病史，無妊娠期疾病和并發(fā)癥，胎兒發(fā)育正常，正常飲食，無藥物服用史”的入選標(biāo)準(zhǔn)?？紤]到部分孕婦可能存在添加配方奶粉或輔食的情況，本研究認(rèn)為該類食品的配置原則是營養(yǎng)的全面和均衡，是孕婦日常飲食的一部分，且孕婦也應(yīng)在孕期加強(qiáng)營養(yǎng)，注意各種營養(yǎng)均衡攝取，因此納入標(biāo)準(zhǔn)中未單獨(dú)區(qū)分?？诜it E在臨床上主要用于心、腦血管疾病及習(xí)慣性流產(chǎn)、不孕癥的輔助治療，在納入標(biāo)準(zhǔn)中已經(jīng)制定了“無既往疾病史，無妊娠期疾病和并發(fā)癥”和“無藥物服用史”的標(biāo)準(zhǔn)，因此未單獨(dú)強(qiáng)調(diào)。本研究同時(shí)采用大樣本量“稀釋”可能存在的“異質(zhì)”個(gè)體，確保結(jié)果的可靠性。

本研究結(jié)果顯示，20～35歲各年齡段健康女性血清Vit E水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示在20～35歲女性中，年齡的增長不會影響血清Vit E水平。而在孕婦中，血清Vit E水平隨孕期的延長而升高，二者呈正相關(guān)（r=0.66，P＜0.01）。以往研究結(jié)果也提示孕晚期Vit E水平最高，孕早期最低[3-4]。該現(xiàn)象可能與孕婦體內(nèi)脂類代謝的變化有關(guān)。有研究結(jié)果顯示，三酰甘油可增加Vit E的吸收，血清Vit E水平與總脂肪含量高度相關(guān)[2]。孕婦的血脂水平從孕9～13周開始升高，且隨孕期的延長而逐步升高，在孕31～36周達(dá)到高峰并維持至分娩[15]，妊娠晚期三酰甘油水平可達(dá)非妊娠狀態(tài)的3倍[16]。本研究采用百分位數(shù)法確定了不同孕期孕婦血清Vit E水平的分布范圍，結(jié)果顯示，孕21周后各孕期Vit E水平分布范圍上限均高于正常非孕成人參考區(qū)間的上限（20 mg/L）[2]。

綜上所述，單胎孕婦血清Vit E水平在孕13～28周時(shí)隨孕周的增長而逐步升高，孕21周后血清Vit E水平分布范圍的上限高于成人參考區(qū)間上限。由于受抽樣誤差、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法等因素影響，該分布范圍能否作為參考區(qū)間使用尚需進(jìn)一步研究。