王仁德，吳升德，谷群遠(yuǎn)，湯 勇，劉 鋒

（鹽城市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，江蘇鹽城 224056）

蜂蜜是我國傳統(tǒng)的保健食品，也是我國重要的出口創(chuàng)匯農(nóng)產(chǎn)品。蜜蜂在傳播花粉、采集花蜜和花粉的過程中，不可避免的會接觸到空氣、水、農(nóng)作物上殘存的農(nóng)藥，而且蜂農(nóng)為了防治蜜蜂的病蟲害，生產(chǎn)中經(jīng)常使用殺螨劑，造成農(nóng)藥在蜂產(chǎn)品中的殘留。人們長期食用含有農(nóng)藥殘留的蜂蜜，不利于身體健康。目前，我國現(xiàn)有國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)涉及蜂蜜中農(nóng)藥殘留限量指標(biāo)的僅有10 項，已不符合市場需求，且不利于蜂蜜產(chǎn)品的質(zhì)量控制[1]。蜂蜜基質(zhì)復(fù)雜，主要成分是葡萄糖、果糖、蔗糖和水分，除此之外，還含有蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素和多酚類物質(zhì)等，這使得蜂蜜中農(nóng)藥殘留提取凈化的前處理方法，以及檢測分析方法的選擇尤為重要。近年來蜂蜜中農(nóng)藥殘留檢測的前處理方法中，應(yīng)用比較多的主要有液液萃取法、固相萃取法和QuEChERS 法等。常用的檢測方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜法和高效液相色譜-質(zhì)譜法等[2-5]。本文研究采用QuEChERS 法進(jìn)行蜂蜜樣品的前處理，采用超高效液相色譜-質(zhì)譜建立快速測定蜂蜜中10 種農(nóng)藥殘留的方法，為我國蜂蜜產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的常規(guī)監(jiān)管和風(fēng)險評估提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器和試劑

SCIEX Triple Quad 5 500+LC-MS/MS-QTRAP Ready 三重四極桿質(zhì)譜/線性離子阱質(zhì)譜，配有增強(qiáng)子離子掃描（EPI）模式，（SCIEX 公司，美國）；HMG-WY 型多管渦旋振蕩儀（山東美正生物科技有限公司）；Thermo Scientific Heraeus Biofuge Stratos高速冷凍離心機(jī)（美國熱電公司）。

乙腈和甲醇為色譜純（Fisher Scientific），甲酸和甲酸銨為HPLC 級（Tedia）；QuEChERS 提取鹽包（4 g硫酸鎂、1 g乙酸鈉）、凈化劑（400 mg/mL硫酸鎂、100 mg/mL PSA、100 mg/mL C18）（美國安捷倫公司）；10 種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（多菌靈、啶蟲脒、氯蟲苯甲酰胺、殺撲磷、倍硫磷、乙螨唑、溴氰菊酯、噠螨靈、氯菊酯、聯(lián)苯菊酯）（純度均大于98%，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司，中國）；實驗用水為超純水，由美國Millipore 公司純水儀制備。

蜂蜜購于鹽城市各大超市，20 ℃保存。

1.2 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品10 mg（精確至0.1 mg）于10 mL 容量瓶中，以甲醇定容，配制成1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液用甲醇稀釋定容，制成10 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)中間液，-18 ℃儲存。用50%甲醇將標(biāo)準(zhǔn)中間液配制成各濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，于4 ℃儲存。

1.3 樣品處理

精確稱取5 g 樣品于50 mL 離心管中，加入5 mL 的純水搖勻，渦旋振蕩3 min 后，靜置5 min，加入10 mL 乙腈，渦旋振蕩提取2 min，加入鹽包，立即渦旋振蕩2 min 后，5 000 r/min 離心5 min，移取2 mL上清液至裝有0.5 g凈化劑的10 mL離心管中，立即渦旋振蕩2 min 后，5 000 r/min 離心5 min，取上清液過0.22 μm 濾膜，待上機(jī)測定。

1.4 儀器分析條件

1.4.1 色譜條件

采用Accucore aQ C18色譜柱（2.6 μm，2.1 mm×150 mm）；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量1 μL；流動相A 為含0.1%甲酸的水溶液，流動相B 為甲醇，梯度洗脫條件見表1。

表1 梯度淋洗條件

1.4.2 質(zhì)譜條件

質(zhì)譜設(shè)置加熱電噴霧離子源溫度為550 ℃；毛細(xì)管電壓為5.5 kV；MRM 掃描模式，正離子采集，其他質(zhì)譜參數(shù)如表2 所示。

表2 檢測10 種農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理方法的選擇

QuEChERS 法簡便快捷，價格低廉，適用面廣，其采用的凈化劑主要是PSA 粉末、C18粉末和石墨化碳黑粉末3 種，可有效降低蜂蜜中各種復(fù)雜基質(zhì)的干擾。本試驗比較了3 種提取鹽包和2 種凈化劑包對蜂蜜樣品的影響。當(dāng)采用鹽包（4 g 硫酸鎂、1 g乙酸鈉）、凈化劑（400 mg/mL 硫酸鎂、100 mg/mL PSA、100 mg/mL C18）處理蜂蜜樣品時，10 種農(nóng)藥都能達(dá)到相對較好的回收率。

2.2 色譜質(zhì)譜條件的選擇與優(yōu)化

本試驗采用C18色譜柱進(jìn)行分析，比較了常用的乙腈-水和甲醇-水體系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在甲醇-水體系中具有更好的響應(yīng)，因此選用甲醇-水體系作為流動相。在流動相中加入0.1%甲酸溶液，有利于化合物的離子化，可以提高待測農(nóng)藥的響應(yīng)值。在優(yōu)化條件下測定的10 種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖如圖1 所示。

圖1 10 種農(nóng)藥（10 μg/L）標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖

2.3 線性范圍和定量限

配制10 種農(nóng)藥的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。結(jié)果表明，10 種農(nóng)藥在一定的濃度范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r＞0.99。在空白樣品中添加低濃度的10 種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按已建立的方法測定，以最接近3 倍信噪比的加標(biāo)水平進(jìn)行計算，3 倍信噪比對應(yīng)的加標(biāo)水平為檢出限，10 倍信噪比對應(yīng)的加標(biāo)水平為定量限，具體結(jié)果見表3。

表3 10 種農(nóng)藥的線性范圍及定量限

2.4 準(zhǔn)確度和精密度

向空白蜂蜜樣品中添加農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，使加標(biāo)水平分別為2.5 μg/kg、5.0 μg/kg 和10.0 μg/kg，每個濃度水平6 份平行樣品，其回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果見表4。10 種農(nóng)藥的平均加標(biāo)回收率在73.6%～110.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.1%～7.5%。結(jié)果表明本方法的精密度和準(zhǔn)確度良好。

表4 加標(biāo)回收試驗結(jié)果

2.5 實際樣品測定

對本市市售蜂蜜進(jìn)行隨機(jī)采樣，采用本文建立的方法對15 份蜂蜜樣品進(jìn)行檢測，均未檢測到上述10種農(nóng)藥殘留。

3 結(jié)論

本研究采用QuEChERS 法結(jié)合超高效液相色譜-質(zhì)譜法測定蜂蜜樣品中10 種農(nóng)藥殘留。該方法操作簡便、準(zhǔn)確度及精密度好，適用于蜂蜜中農(nóng)藥多殘留的快速定性篩查和定量檢測。