周惠梅 王 暖 賈喜利

河南省獲嘉縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科 453800

胎膜早破是一種臨床前胎膜發(fā)生破裂的產(chǎn)科常見(jiàn)并發(fā)癥，發(fā)生率已超過(guò)20%，與生殖系統(tǒng)感染、營(yíng)養(yǎng)不良、胎膜受力失衡、羊膜腔壓力過(guò)大等因素有關(guān)[1-2]。妊娠達(dá)到37周后出現(xiàn)胎膜早破稱為足月胎膜早破，未達(dá)到37周稱為足月前胎膜早破，其中足月胎膜早破發(fā)生的概率遠(yuǎn)高于未足月胎膜早破[3]。但孕婦出現(xiàn)胎膜早破后胎膜屏障消失，進(jìn)而導(dǎo)致早產(chǎn)、圍產(chǎn)期感染、新生兒窒息、絨毛膜羊膜炎等并發(fā)癥出現(xiàn)的概率上升，已嚴(yán)重危害母嬰健康，故尋求與胎膜早破發(fā)生相關(guān)的特異性分子標(biāo)志物是臨床研究的重點(diǎn)。人類白細(xì)胞抗原G(HLA-G)在母胎界面的表達(dá)對(duì)母胎免疫耐受和維持正常妊娠有重要作用，被證實(shí)參與孕婦免疫調(diào)節(jié)，發(fā)揮免疫抑制的功能，當(dāng)其水平異常時(shí)預(yù)示妊娠期可能出現(xiàn)高血壓、習(xí)慣性流產(chǎn)等不良后果[4]；氧化型α1-抗胰蛋白酶(ox-AAT)是絲氨酸蛋白酶抑制劑氧化后生成的無(wú)活性生成物，對(duì)孕婦胎盤組織具有保護(hù)功能，且在炎癥反應(yīng)中扮演重要角色并參與胎膜早破的發(fā)生[5]；基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)是一種明膠酶類，對(duì)于保持孕婦胎膜的完整性具有重要意義[6]。目前關(guān)于HLA-G、ox-AAT、MMP-9在胎膜早破發(fā)生機(jī)制的作用尚未明確，且HLA-G、ox-AAT表達(dá)及與MMP-9相關(guān)性研究尚無(wú)，故本研究通過(guò)對(duì)148例孕婦的臨床資料進(jìn)行分析比較，旨在分析幾項(xiàng)因子的表達(dá)及相互作用并為胎膜早破的發(fā)生機(jī)制提供客觀依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將本院2020年1月—2021年1月收治的148例胎膜早破孕婦作為研究對(duì)象，回顧性分析其臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《婦產(chǎn)科學(xué)》中關(guān)于胎膜早破的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)臨床資料完整；(3)均為初產(chǎn)婦、單胎、頭位的自然分娩孕婦；(4)無(wú)吸煙等不良習(xí)慣；(5)無(wú)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并臨床感染癥狀；(2)合并其他妊娠并發(fā)癥；(3)合并內(nèi)科、外科疾病。148例胎膜早破孕婦依據(jù)分娩孕周分為A組(足月胎膜早破)、B組(未足月胎膜早破)，另選取60例同期來(lái)院進(jìn)行健康檢測(cè)的孕婦作為對(duì)照組。A組86例，孕婦年齡21～35歲，平均年齡(27.59±3.21)歲，平均孕周(39.65±2.30)周；B組62例，孕婦年齡22～33歲，平均年齡(27.16±3.19)歲，平均孕周(30.16±3.27)周；對(duì)照組60例，孕婦年齡23～34歲，平均年齡(27.44±3.30)歲，平均孕周(39.51±2.91)周。三組間一般資料比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集：抽取所有產(chǎn)婦清晨空腹外周血3ml，3 000r/min離心10min后分離血清，將樣本放置在-70℃環(huán)境內(nèi)保存待測(cè)；在孕婦胎盤分娩前抽取新生兒臍血3ml，離心儲(chǔ)存步驟同上。胎盤娩出之后，在距離胎膜破口>5cm處取數(shù)塊大小3cm×3cm的胎膜組織，采用0.9%氯化鈉溶液清洗干凈，干燥之后使用大頭針固定作卷狀，而后采取10%甲醛固定、常規(guī)石蠟包埋，待測(cè)。

1.2.2 指標(biāo)檢測(cè)：采用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)母血、臍血中HLA-G、ox-AAT、MMP-9水平，試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D公司。采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)胎膜組織中HLA-G、ox-AAT、MMP-9水平，鼠抗人HLA-G單克隆抗體購(gòu)自武漢小木蟲(chóng)生物技術(shù)有限公司，山羊抗人ox-AAT多克隆抗體、小鼠抗人MMP-9單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司。

2 結(jié)果

2.1 三組孕婦母血中HLA-G、ox-AAT與MMP-9水平比較 A、B組孕婦母血中HLA-G水平顯著低于對(duì)照組，且B組顯著低于A組；A、B組孕婦母血中ox-AAT與MMP-9水平均顯著高于對(duì)照組，且B組顯著高于A組；組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 三組孕婦母血中HLA-G、ox-AAT與MMP-9水平比較結(jié)果

2.2 三組孕婦臍血中HLA-G、ox-AAT與MMP-9水平比較 對(duì)照組孕婦臍血中HLA-G水平顯著高于A、B組，且A組顯著高于B組；對(duì)照組孕婦臍血中ox-AAT、MMP-9水平顯著低于A、B組，且A組顯著低于B組；組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 三組孕婦臍血中HLA-G、ox-AAT與MMP-9水平比較結(jié)果

2.3 三組孕婦胎膜組織中HLA-G、ox-AAT與MMP-9水平比較 A、B組孕婦胎膜組織中HLA-G水平顯著低于對(duì)照組且B組顯著低于A組，A、B組孕婦ox-AAT與MMP-9水平均顯著高于對(duì)照組且B組顯著高于A組，組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 三組孕婦胎膜組織中HLA-G、ox-AAT與MMP-9水平比較

2.4 胎膜組織中HLA-G、ox-AAT表達(dá)與MMP-9水平相關(guān)性分析 Person相關(guān)性分析結(jié)果顯示，HLA-G與MMP-9水平呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.117，P<0.05)；ox-AAT與MMP-9水平呈顯著正相關(guān)(r=0.727，P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 胎膜組織中HLA-G、ox-AAT表達(dá)與MMP-9水平相關(guān)性分析結(jié)果

3 討論

胎膜主要由羊膜及絨毛膜構(gòu)成，保證胎膜的完整性是羊膜腔內(nèi)羊水量充足的基礎(chǔ)，且能夠防止細(xì)菌、病原微生物等入侵，若胎膜出現(xiàn)破裂易引發(fā)一系列危害母嬰健康的癥狀出現(xiàn)。目前，臨床多認(rèn)為胎膜早破是因膠原蛋白構(gòu)成成分的過(guò)分降解而引發(fā)的[7]，但未找到有效的預(yù)防和治療方案。隨著生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)步與發(fā)展，尋求胎膜早破的特異性生物標(biāo)志物是現(xiàn)今研究的重點(diǎn)，本文通過(guò)分析胎膜早破孕婦胎膜組織中HLA-G、ox-AAT與MMP-9指標(biāo)的表達(dá)，為其尋求可靠的臨床指標(biāo)，為母體及胎兒安全保駕護(hù)航。

本研究結(jié)果顯示，胎膜早破孕婦母血、臍血、胎膜組織中HLA-G水平顯著下降且低于正常孕婦，ox-AAT與MMP-9表達(dá)顯著上升且高于正常孕婦，其中足月胎膜早破孕婦HLA-G水平高于足月前胎膜早破孕婦，ox-AAT與MMP-9水平低于足月前胎膜早破孕婦，究其原因在于：(1)HLA-G是用于維持孕婦妊娠正常的免疫耐受分子，對(duì)細(xì)胞具有滋養(yǎng)和保護(hù)作用，其在胎膜早破孕婦中呈現(xiàn)低水平可能與抑制作用有關(guān)，表現(xiàn)為對(duì)母體NK細(xì)胞、T細(xì)胞對(duì)胎兒的免疫功能提高，進(jìn)而導(dǎo)致胎膜出現(xiàn)破損，引發(fā)胎膜早破；(2)ox-AAT是AAT的氧化表現(xiàn)方式，當(dāng)孕婦的機(jī)體出現(xiàn)炎癥反應(yīng)時(shí)，ox-AAT水平顯著上升，導(dǎo)致AAT的表達(dá)下降，對(duì)機(jī)體炎性反應(yīng)加劇，促使水解并導(dǎo)致胎膜早破的發(fā)生，且該水平與正常孕婦相比表達(dá)量顯著要高，可能預(yù)示著羊膜腔炎癥反應(yīng)程度劇烈；(3)MMP-9在孕婦胎膜組織中能夠起到降解Ⅳ膠原及彈性蛋白的作用，在孕婦早期的血清中很難檢測(cè)出MMP-9水平，但隨著妊娠時(shí)間的臨近，表達(dá)量上升，當(dāng)該水平出現(xiàn)異常時(shí)代表對(duì)胎膜細(xì)胞外基質(zhì)的降解作用增加，此時(shí)胎膜韌性下降，從而出現(xiàn)胎膜早破。除此之外，本研究結(jié)果指出，ox-AAT與MMP-9水平呈現(xiàn)顯著正相關(guān)(P<0.05)，這可能是因?yàn)椋簅x-AAT在正常孕婦的胎膜組織中表達(dá)無(wú)異常，但在胎膜早破孕婦中表達(dá)量上升，提示與孕婦機(jī)體處于炎癥反應(yīng)相關(guān)，炎癥反應(yīng)使中性粒細(xì)胞活性上升，釋放大量炎性因子，引起AAT氧化，進(jìn)而加速胎膜細(xì)胞外基質(zhì)降解。MMP-9對(duì)AAT具有滅活及剪切作用，故可能存在抑制關(guān)聯(lián)，因此兩者呈現(xiàn)顯著正相關(guān)。HLA-G與MMP-9水平在本研究中顯示負(fù)相關(guān)，可能是由于當(dāng)HLA-G水平降低時(shí)，會(huì)引發(fā)NK細(xì)胞的表達(dá)量上升，降低抑制作用，由于NK細(xì)胞能夠通過(guò)轉(zhuǎn)錄調(diào)控等作用引起MMP-9水平的顯著上升，故兩者間呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)[8]。但本研究結(jié)果可能是由于存在一定的局限性，例如樣本數(shù)量有限等原因?qū)е?，在今后的研究中將?huì)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本容量，使研究結(jié)果更具有說(shuō)服力。

綜上所述，孕婦母血、臍血及胎膜組織中的HLA-G表達(dá)下降、ox-AAT、MMP-9表達(dá)上升預(yù)示著孕婦胎膜早破和早產(chǎn)的發(fā)生，孕婦胎膜組織中ox-AAT水平與MMP-9指標(biāo)呈現(xiàn)顯著正相關(guān)，HLA-G水平與MMP-9指標(biāo)呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān)，提示檢測(cè)以上指標(biāo)能夠預(yù)測(cè)孕婦是否出現(xiàn)胎膜早破或早產(chǎn)，為其妊娠情況提供科學(xué)依據(jù)。