楊遠廷 ， 鄒仕庚 ， 王 斌 ， 付志歡 ， 羅 帆 ， 吳紫倩 ， 黃麗婷 ， 舒緒剛

（1.仲愷農業(yè)工程學院動物科技學院，廣東廣州 510225；2.溫氏食品集團股份有限公司研究院農業(yè)農村部動物營養(yǎng)與健康養(yǎng)殖重點實驗室，廣東云浮 527300；2.仲愷農業(yè)工程學院化學化工學院，廣東廣州 510225）

微量元素是維持動物機體正常生理和促進畜禽生長發(fā)育的必需營養(yǎng)素， 主要以酶的組成成分或激活劑等形式參與體內一系列生理生化反應，進而影響營養(yǎng)物質吸收和代謝等生命活動（Bao，2009）。 目前在動物生產上使用的微量元素 （銅、鐵、錳、鋅）以無機鹽的形式（硫酸鹽、氧化物和氯化物）為主，其成本低且易獲得，但生物利用率相對較低，在實際畜牧生產中普遍添加過量，這不僅增加飼養(yǎng)成本， 而且容易造成資源浪費和環(huán)境污染（賈剛，2020；Richards，2010）。 因此，隨著環(huán)保壓力的增加， 使用高利用率的微量元素對畜牧生產意義重大，如有機微量元素。

氨基酸絡（鰲）作為一種有機微量元素，是由金屬離子與氨基酸經過絡合反應生成的具有環(huán)狀結構的化合物， 具有化學穩(wěn)定性強、 易于消化吸收、生物學效價高等特性，可顯著提高微量元素利用率（虞俊翔，2015）。 研究表明，氨基酸絡（鰲）微量元素代替無機微量元素可提高動物對微量元素的利用率，減少排泄物中的重金屬含量，同時對家禽生長性能、 產蛋性能和蛋品質均有改善作用（Umar，2020；Sirri，2016；Idowu，2011）。 但也有研究對氨基酸螯合微量元素的作用提出質疑（Wang，2019；Rao，2013）， 這可能與其產品質量（如氨基酸種類、絡（螯）合強度）有關（Ghasemi，2020）。而且目前氨基酸螯合微量元素在肉雞上的研究以單一元素為主，對于復合形式的報道較少，且試驗結論仍存在一定的爭議（徐明明，2017）。因此， 本試驗通過在飼糧中添加不同水平的甘氨酸螯合微量元素，探究其對肉雞生長性能、血清及肝臟抗氧化指標和組織中微量元素沉積的影響，旨在為有機復合微量元素在肉雞生產中的科學使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 無機微量元素為市售飼料級一水硫酸鋅（34.50%）、五水硫酸銅（25.00%）、一水硫酸錳（31.80%）和一水硫酸亞鐵（32.00%）；有機復合微量元素為甘氨酸金屬螯合物， 均為實驗室自制。 經檢測， 各金屬含量為： 鋅 21.14%、銅22.90%、錳23.96%、鐵17.42%，且游離甘氨酸≤1.5%。

1.2 試驗設計與飼糧組成 選取1 日齡黃羽肉仔雞2250 只，隨機分為5 組，每組6 個重復，每個重復75 只雞。 對照組為無機組，在基礎飼糧中添加飼料級無機微量元素8 mg/kg Cu，80 mg/kg Fe，60 mg/kg Zn，80 mg/kg Mn，試驗組微量元素添加量分別為無機組的100%、75%、50%、33%， 試驗期63 d?；A飼糧參照我國《雞飼養(yǎng)標準》（NY/T 33—2004）設計，主要分為三個飼養(yǎng)階段，1~21 日齡為小雞階段，22 ~ 42 日齡為中雞階段，43 ~ 63 日齡為大雞階段，其飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎）

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗在溫氏集團研究院科研基地肉雞試驗場進行。 飼養(yǎng)管理嚴格按照溫氏食品集團股份有限公司所制定的《肉雞飼養(yǎng)管理手冊》進行飼養(yǎng)。采用地面平養(yǎng)模式，每天24 h 光照，雞只自由采食和飲水， 飼養(yǎng)前期采用紅外燈進行保溫，中后期無保溫措施；定期對雞舍進行噴霧消毒和清理更換墊料， 并按照常規(guī)免疫程序進行相關免疫。 試驗過程中若發(fā)現(xiàn)死雞，立即稱重記錄。

1.4 測定指標與方法 于試驗期結束前1 天20：00斷料，但不斷水。 所有試驗雞稱重后，每個重復選取體重相近的2 只雞進行翼下靜脈采血5 mL，靜置待血清析出后，3500 r/min 離心10 min，將血清分裝至 200 μL 離心管中，-20 ℃冰箱凍存， 用于測定血清抗氧化相關指標。 采完血頸部充分放血后解剖，取肝臟、雞胸肉和脛骨分裝至自封袋，做好標記，-20 ℃冰箱凍存，用于組織中的微量元素含量測定。

1.4.1 生長性能 觀察每天肉雞的生長情況，并記錄死亡雞的數(shù)量。分別在21、42、63 日齡以重復為單位對空腹12 h 以上的肉雞進行稱重，并記錄每個重復的采食量，計算各個階段的平均日增重、平均日采食量、料重比和死淘率。

1.4.2 血清和肝臟抗氧化指標 將肉雞肝臟組織按質量比1：9 加入預冷的生理鹽水，冰水浴條件下進行勻漿破碎， 制成10% 組織勻漿，2000 r/min離心10 min，取其上清液-20 ℃冷凍備用。 采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒測定血清和肝臟中總抗氧化能力（T-AOC）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、銅鋅超氧化物歧化酶（CuZn-SOD）、錳超氧化物歧化酶（Mn-SOD）和丙二醛（MDA）含量。各項酶指標具體測定方法參照試劑盒的說明書。

1.4.3 組織中微量元素含量 組織中銅、鐵、錳和鋅的含量采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀 （型號：Thermo iCP 6000 SERIES）檢測，主要參考GB/T 5009.268—2016 、 何萬領 （2018） 和 Ghasemi（2020）等方法。樣品具體處理如下：將樣品放到培養(yǎng)皿，用生理鹽水沖洗血漬，除去附著在組織上的油脂并用濾紙吸干水分，60 ℃烘干至恒重。 準確稱取0.5 ~ 1.5 g（精確至0.001 g） 樣品于坩堝中，做好標記，置于電熱板中碳化至無冒白煙，待冷卻后轉移于550 ℃的馬弗爐中灰化5 ~ 8 h，若灰化不徹底，則冷卻后取出加入少許硝酸，在電熱板上小心加熱蒸干， 冷卻后移入馬弗爐中繼續(xù)灰化成白色灰燼。 冷卻取出，加入10 mL 濃硝酸進行加熱消解30 min， 過濾， 用去離子水定容至25 mL容量瓶中。

1.5 統(tǒng)計分析 數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0 軟件中單因素方差分析（one-way ANOVA）程序進行處理，并采用Duncan 氏法進行組間多重比較。P < 0.01 表示差異極顯著， P < 0.05 表示差異顯著，0.05≤ P< 0.10 表示有顯著趨勢。 數(shù)據(jù)結果均用“平均值±標準差”表示。

2 結果

2.1 不同水平有機復合微量元素對肉雞生長性能的影響 由表2 可知，從各飼養(yǎng)時期上看，各處理間肉雞平均日采食量、平均日增重、料重比和死亡率差異不顯著（P > 0.05）；從1 ~ 9 周齡整體上看， 各組間飼糧處理對肉雞平均日采食量和平均日增重也無顯著影響（P > 0.05），但料重比（P =0.065）和死淘率（P =0.074）存在一定程度的差異，其中50%有機組中料重比顯著低于無機組和100%有機組 （P < 0.05），33%有機組中死亡率顯著高于75%有機組（P < 0.05），其他各組之間差異不顯著（P > 0.05）。

表2 不同水平有機復合微量元素對肉雞生長性能的影響

2.2 不同水平有機復合微量元素對肉雞抗氧化功能的影響

2.2.1 不同水平有機復合微量元素對肉雞血清抗氧化相關酶的影響 由表3 可知，與無機組相比，33%有機組血清T-AOC 顯著降低 27.08% （P ＜0.05）； 無機組與有機組相比， 血清中 T-SOD 和CuZn-SOD 差異不顯著性（P > 0.05），但 33%有機組中T-SOD 較75%和100%有機組分別降低了11.67%和 17.22% （P ＜ 0.05），50%有機組較 75%和100%有機組分別降低了11.07%和16.66% （P ＜0.05）； 與無機組相比，33%和 50%有機組血清Mn-SOD 分別降低了 25.87%和 33.24%（P ＜0.05）；與無機組相比，50%有機組血清MDA 顯著提高 61.95% （P ＜ 0.05）。

表3 不同水平有機復合微量元素對肉雞血清抗氧化相關酶的影響

2.2.2 不同水平有機復合微量元素對肉雞肝臟抗氧化相關酶的影響 由表4 可知，與無機組相比，100%有機組肝臟T-AOC 顯著提高了33.33% （P ＜0.05）； 與無機組相比，33%有機組肝臟 T-SOD 和Mn-SOD 分別降低了 11.74%和 28.72%（P ＜0.05）；各組間肝臟CuZn-SOD 無顯著性差異（P >0.05）；無機組與有機組相比，肝臟中MDA 差異不顯著（P > 0.05），但33%有機組較100%有機組顯著提高了 51.72% （P ＜ 0.05）。

表4 不同水平有機復合微量元素對肉雞肝臟抗氧化相關酶的影響

2.3 不同水平有機復合微量元素對肉雞組織中微量元素沉積的影響

2.3.1 不同水平有機復合微量元素對肉雞肝臟中微量元素沉積的影響 由表5 可知， 各組間肝臟中Fe 的含量差異不顯著（P > 0.05）；與無機組相比，100%有機組肝臟中 Cu 的含量顯著提高10.36%（P < 0.01）， 而 33%有機組顯著降 低23.92%（P < 0.05）； 與無機組相比，33%有機組肝臟中Mn 和Zn 的含量顯著降低31.40%和18.90%（P < 0.05）。

表5 不同水平有機復合微量元素對肝臟中微量元素的影響（干重基礎） mg/kg

2.3.2 不同水平有機復合微量元素對肉雞雞胸肉中微量元素沉積的影響 由表6 可知， 各組間雞胸肉中 Cu 和 Fe 的含量差異不顯著 （P > 0.05）；與無機組相比，75%和100%有機組雞胸肉中Mn的含量分別提高37.50%和45.00%（P < 0.01）；與無機組相比，33%和50%有機組雞胸肉中Zn 的含量分別降低21.56%和18.65%（P < 0.01）。

表6 不同水平有機復合微量元素對雞胸肉微量元素沉積的影響（干重基礎） mg/kg

2.3.3 不同水平有機復合微量元素對肉雞脛骨中微量元素沉積的影響 由表7 可知， 與無機組相比，33%有機組肉雞脛骨中Cu、Mn 和 Zn 的含量分別降低了30.07%、32.23%和 9.49%（P < 0.01）；無機組與有機組相比，脛骨中Fe 的含量差異不顯著（P > 0.05），但100%有機組較33%有機組提高了 16.77%（P < 0.05）。

表7 不同水平有機復合微量元素對脛骨微量元素沉積的影響（干重基礎） mg/kg

3 討論

3.1 不同水平有機復合微量元素對肉雞生長性能的影響 研究顯示， 有機微量元素在改善肉雞生長方面優(yōu)于無機微量元素（Singh，2015）。 胥彩玉等（2015）研究報道，飼糧中用低水平有機微量元素（50%）替代有機微量元素可顯著提高肉仔雞飼料轉化率， 而過高或全部替代則無明顯效果；M’Sadeq 等（2018）和 El-Husseiny（2012）試驗也表明， 與100%無機微量元素組相比，50%的有機微量元素組肉雞的生長性能顯著提高。 本研究結果也發(fā)現(xiàn)，與無機微量元素相比，低添加量（50%）的有機微量元素有降低肉雞料重比的趨勢。 當然也有研究報道， 飼糧中有機微量元素的添加形式對肉雞的生長性能影響并不大（Ghasemi，2020；Zhu，2019；Marco，2017），這與本研究結果不一致，可能與有機微量元素的種類、雞只品種、飼糧組成和試驗時間等因素有關（Yenice，2015）。

3.2 不同水平有機復合微量元素對肉雞抗氧化功能的影響 抗氧化能力是反映肉雞生長性能和健康的重要指標。 MDA 是脂質過氧化的主要產物，其積累可以反映動物機體脂質過氧化的程度，而SOD、GSH-Px 和過氧化氫酶等活性是其良好的清除劑， 因此這些指標常用于反映動物抗氧化狀態(tài)（Tan，2019；Akhavan，2019；Zhu，2014；Ismail，2010）。 金屬元素如 Zn、Cu 和 Mn 是 SOD 重要的輔助因子，適量的 Zn、Cu 和 Mn 有助于 SOD 功能的發(fā)揮（Ma，2011；Aksu，2010），而研究表明，有機微量元素更有利于改善動物機體的抗氧化功能（Swiatkiewicz，2014）。 Umar Yaqoob 等（2020）試驗發(fā)現(xiàn)， 與無機組相比，50%和75%有機組肝臟中T-AOC 活性顯著提高；而 Wang 等（2019a）研究發(fā)現(xiàn)，與無機對照組相比，37.5%有機組肉雞血清和肝臟中GSH-Px 和T-SOD 活性顯著下降，MDA含量增加，這與本研究的結果基本一致。本試驗研究結果顯示，與無機組相比，50%和75%有機組肉雞血清和肝臟中抗氧化的相關指標差異不大，而100%有機組肉雞肝臟中T-AOC 顯著提高，33%組血清和肝臟中Mn-SOD 活性顯著下降，MDA 含量也有所增加。 這說明有機微量元素能提高元素的利用率，增加動物機體對微量元素的吸收，進而促進抗氧化相關酶的活性； 但這種提高可能有一定的限度， 代替量過低則不利于動物維持正常的生理功能。

3.3 不同水平有機復合微量元素對肉雞組織中微量元素沉積的影響 組織微量元素沉積是有效評估外源礦物元素生物利用率的重要指標， 敏感部位如肝臟、 脛骨和雞胸肉（Mwangi，2019；M’Sadeq，2018；Kim，2015）。 Wang 等（2019b）研究結果表明，與50%和62.5%的有機微量元素組相比，低水平（37.5%）的有機微量元素組雞胸肉中Zn、Fe 和Cu 的含量顯著降低； 與無機微量元素組相比，低水平（37.5%）的有機微量元素組雞胸肉中Fe 和 Cu 的含量顯著降低。 而 Ghasemi 等（2020）研究表明，低水平的有機微量元素（25%）對肉雞脛骨中其他元素含量無顯著影響， 但Mn 的沉積量明顯降低，這與本試驗研究結果基本上一致。本試驗結果顯示，與無機組相比，添加33%有機組肉雞肝臟和脛骨中Cu、Mn、Zn 的含量和雞胸肉中Zn 含量顯著降低；50%有機組雞胸肉中Zn 含量顯著降低；75%有機組雞胸肉中Mn 含量極顯著提高；100%有機組雞胸肉中Mn 和肝臟中Cu 含量極顯著提高。 這說明有機微量元素代替無機微量元素對肉雞組織微量元素沉積是有一定影響的，其中Mn 的改變較明顯，可能是動物機體對飼糧中Mn 的改變比較敏感，相似的研究也表明，與其他微量元素相比， 肉雞脛骨中Mn 的含量受微量元素的來源及水平影響較大（M’Sadeq，2018；胥彩玉，2015）。

4 結論

飼糧中不同水平有機復合微量元素 （甘氨酸金屬螯合物） 替代商業(yè)水平無機復合微量元素對1 ~ 63 d 黃羽肉雞生長性能影響不大， 高替代量（75%和100%） 有助于改善機體抗氧化功能和組織中微量元素沉積。