王滋爍，黃鑫

(錦州醫(yī)科大學(xué)，遼寧 錦州 121000)

妊娠期高血壓疾病是最常見的妊娠期內(nèi)科并發(fā)癥，我國的發(fā)病率達(dá)5.22%～5.57%，可以導(dǎo)致胎盤早剝、DIC、胎兒生長受限、胎死宮內(nèi)等多種嚴(yán)重的并發(fā)癥，甚至孕產(chǎn)婦及新生兒圍產(chǎn)期死亡。該病的病因與發(fā)病機(jī)制至今仍未完全闡明[1]。HDCP 患者胎盤功能異常和胎盤血管重塑不足，這很可能是由于滋養(yǎng)層細(xì)胞浸潤能力下降導(dǎo)致，并且胎盤同時存在多發(fā)鈣化及梗死至胎盤功能嚴(yán)重受損。雌激素通過與雌激素受體結(jié)合發(fā)揮相應(yīng)效應(yīng)，在整個妊娠期起著重要的調(diào)節(jié)作用，并且在胎盤形成過程中起到?jīng)Q定性作用[2-3]。而死亡相關(guān)蛋白激酶2對于細(xì)胞自噬及氧化應(yīng)激起到重要作用[4]，而目前在HDCP的胎盤組織中的研究罕有報(bào)道。死亡相關(guān)蛋白激酶2(DAPK2)屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族的蛋白質(zhì)，在細(xì)胞生存、凋亡和自噬等過程中起著重要作用。DAPK2可能通過NF-kB磷酸化來抑制TRAIL受體進(jìn)而刺激的細(xì)胞凋亡，并影響血管內(nèi)皮細(xì)胞功能[5]，在胎盤的血管內(nèi)皮表達(dá)且與內(nèi)皮損傷相關(guān)。但目前在妊娠期高血壓疾病中的作用尚不明確。本文通過檢測雌激素受體、DAPK2在妊娠期高血壓的產(chǎn)婦胎盤中的表達(dá)情況，探討雌激素受體、DAPK2在妊娠期高血壓疾病在子癇前期及重度子癇前期中作用的可能機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)，于2018年6月至2018年12月在錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院產(chǎn)科行剖腹產(chǎn)分娩的孕婦中選取正常產(chǎn)婦29例，平均年齡(25.83±2.73)歲，平均孕周(39.1±1.53)w為對照組；患妊娠期高血壓疾病產(chǎn)婦43例，其子癇前期患者12例，平均年齡(27.78±3.02)歲，平均孕周(37.3±1.58)w，重度子癇前期患者31例，平均年齡(29.72±4.68)歲，平均孕周(34.8±2.78)w。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《婦產(chǎn)科學(xué)》第八版。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者均為單胎妊娠，未進(jìn)入產(chǎn)程；(2)病例均無妊娠并發(fā)癥(妊娠期高血壓疾病并發(fā)癥除外)及其它原發(fā)疾病，兩組患者年齡均在 23～35 歲之間。比較兩組一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并先天性心臟病、慢性高血壓疾病、慢性腎炎、糖尿病等妊娠合并癥；胎膜早破、臨產(chǎn)；胎死宮內(nèi)；(2)臨床資料不完善，拒絕參加臨床實(shí)驗(yàn)者；(3)慢性高血壓合并妊娠。

標(biāo)本采集：產(chǎn)婦娩出胎盤后30 min內(nèi)采集1.5 cm×1.5 cm×1.5 cm標(biāo)本組織，取一部分標(biāo)本迅速用甲醛溶液固定后過夜，準(zhǔn)備用于制作石蠟切片并進(jìn)行免疫組化染色檢測試驗(yàn)。

1.2 方法

免疫組織化學(xué)染色檢測結(jié)果判定:標(biāo)本組織連續(xù)切片，切片厚度5 μm，進(jìn)行免疫組織化學(xué)法檢測胎盤組織中雌激素受體、DAPK2的表達(dá)情況。結(jié)果判定：雌激素受體陽性表達(dá)的細(xì)胞呈棕黃色，主要定位于胎盤組織細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。DAPK2陽性表達(dá)的細(xì)胞呈棕黃色，主要定位于胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。將處理好的標(biāo)本組織放在光鏡下，用高倍鏡觀察，隨機(jī)選取5個高倍鏡視野(400×)，記錄該視野內(nèi)陽細(xì)胞的個數(shù)并根據(jù)視野內(nèi)陽性細(xì)胞所占的百分比進(jìn)行分級處理。分級標(biāo)準(zhǔn)如下：0級，(-)陰性，該視野陽性細(xì)胞數(shù)目為0，細(xì)胞內(nèi)無棕色顆粒出現(xiàn)；1級，(+)弱陽性，該視野內(nèi)陽性細(xì)胞所占的百分比為1%～25%，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)陽性染色反應(yīng)；2級，(++)中度陽性，該視野內(nèi)陽性細(xì)胞所占百分比為26%～50%，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)陽性染色反應(yīng)；3級，(+++)強(qiáng)陽性，該視野內(nèi)陽性細(xì)胞所占百分比>50%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 ER、DAPK2在妊娠期高血壓疾病孕婦的胎盤組織中的表達(dá)及定位

本次實(shí)驗(yàn)收集正常足月剖宮產(chǎn)胎盤組織29例，妊娠妊娠期高血壓疾病胎盤組織43例。進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)，分別觀察ER、DAPK2在胎盤組織中的表達(dá)，分析其定位及表達(dá)程度。免疫組化結(jié)果顯示，雌激素受體在正常妊娠孕婦及患有妊娠期高血壓疾病的孕婦中均有表達(dá)，主要定位于滋養(yǎng)葉細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。雌激素受體主要表達(dá)于胞核內(nèi)，見圖1。

A：重度子癇前期胎盤組織中DAPK2低表達(dá)；B：正常妊娠胎盤組織中DAPK2高表達(dá)

妊娠期高血壓疾病組的表達(dá)明顯低于正常對照組(P<0.05)。DAPK2在妊娠期高血壓疾病組、正常對照組中也均有表達(dá)，主要表達(dá)于滋養(yǎng)葉細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿。DAPK2在正常對照組中的表達(dá)明顯高于妊娠期高血壓疾病組(P<0.05)。且在相同組織中，DAPK2、ER表達(dá)下調(diào)一致，見表1。

表1 ER、DAPK2在妊娠期高血壓疾病孕婦的胎盤組織中的表達(dá)

2.2 ER、DAPK2在子癇前期重度的胎盤組織中的表達(dá)低于子癇前期

本次妊娠期高血壓疾病病例中，收集子癇前期患者胎盤組織12例、重度子癇前期患者胎盤組織31例，對其免疫組化結(jié)果分析后發(fā)現(xiàn)。隨疾病程度的加重，ER、DAPK2在胎盤組織中的表達(dá)明顯差異，且其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。ER、DAPK2在子癇前期重度的胎盤組織中的表達(dá)明顯低于子癇前期的胎盤組織。提示DAPK2可能在妊娠期高血壓疾病的加重過程中起到重要的作用。由于ER、DAPK2均出現(xiàn)疾病加重是表達(dá)降低，遂進(jìn)行了其表達(dá)的相關(guān)性分析。結(jié)果提示ER、DAPK2在子癇前期、子癇前期重度的胎盤組織中的表達(dá)程度正相關(guān)(R=0.56,P<0.05)。

表2 ER、DAPK2在子癇前期、子癇前期重度的胎盤組織中的表達(dá)

2.3 DAPK2的表達(dá)與新生兒出生體重、胎盤重量相關(guān)

本次研究同時統(tǒng)計(jì)了全組患者的新生兒體重、胎盤重量及產(chǎn)后血壓。在妊娠期高血壓疾病組中，將DAPK2表達(dá)情況分為兩組。其中高表達(dá)組為中度陽性及強(qiáng)陽性(共23例)，低表達(dá)組為弱陽性(共20例)。分別比較并分期兩組間新生兒體重、胎盤重量及產(chǎn)后血壓的差異。發(fā)現(xiàn)DAPK2高、低表達(dá)兩組間表達(dá)存在差異，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 DAPK2高表達(dá)與低表達(dá)組中新生兒出生體重、胎盤重量、產(chǎn)后血壓生的比較

DAPK2低表達(dá)組在新生兒體重、胎盤重量均低于高表達(dá)組。提示DAPK2的表達(dá)可能與妊娠期高血壓疾病中新生兒生長發(fā)育。DAPK2高表達(dá)組產(chǎn)后3個月復(fù)診時血壓高于低表達(dá)組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示圍產(chǎn)期結(jié)局不良相關(guān)。

3 討 論

妊娠期高血壓是產(chǎn)婦特有的較為常見的一種臨床并發(fā)癥，也是孕產(chǎn)婦及圍產(chǎn)期胎兒死亡的主要原因之一，該病嚴(yán)重威脅妊娠期母兒生命健康[6]。由于對該病的病因和發(fā)病機(jī)制仍未明確，目前現(xiàn)有的各種學(xué)說均未能完整的解釋該病的機(jī)理，所以針對該病仍缺乏有效的預(yù)防措施和治療方法。

雌激素是促進(jìn)女性生殖器官發(fā)育的重要性激素，通過與存在于靶器官細(xì)胞核上的雌激素受體特異性結(jié)合，啟動一系列合成蛋白的反應(yīng)來發(fā)揮其相應(yīng)的生理作用[7]。由此看來，雌激素要想發(fā)揮正常的生理功能不僅需要在血漿中保持正常的濃度，還需要靶器官和靶組織中存在數(shù)量足夠的并且具有正常功能的雌激素受體。大量研究表明胎盤氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡可能與子癇前期的病理生理特征有關(guān)[8-9]。DAPK2在凋亡相關(guān)疾病中發(fā)揮著重要的作用[10]，可能通過NF-kB磷酸化來抑制TRAIL受體進(jìn)而刺激的細(xì)胞凋亡，并影響血管內(nèi)皮細(xì)胞功能[5]3284，在胎盤的血管內(nèi)皮表達(dá)且與內(nèi)皮損傷相關(guān)。由此本文選擇DAPK2與ER聯(lián)合檢測嘗試探討其在妊娠期高血壓疾病胎盤病理改變中的作用。DAPK2是死亡蛋白激酶相關(guān)家族成員之一，在細(xì)胞生存、凋亡和自噬等過程中起著重要作用。本次研究發(fā)現(xiàn)在妊娠期高血壓患者與正常產(chǎn)婦的胎盤組織中ER、DAPK2均有表達(dá)，但ER主要表達(dá)于滋養(yǎng)葉細(xì)胞中，而DAPK2在滋養(yǎng)葉細(xì)胞中、內(nèi)皮細(xì)胞中均有表達(dá)。ER、DAPK2在胎盤組織中的表達(dá)有趨向一致性，在妊娠期高血壓疾病的胎盤組織中的表達(dá)明顯低于正常組織，且與疾病程度相關(guān)。并且ER、DAPK2的表達(dá)呈正相關(guān)性。本次研究同時證明，隨著DAPK2表達(dá)降低新生兒體重、胎盤重量也降低。這可能提示ER、DAPK2的低表達(dá)在妊娠期高血壓疾病的進(jìn)展過程中起到一定的作用，且與預(yù)后不良相關(guān)。大量研究表明，自噬是一個在分化和發(fā)育過程中維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)、循環(huán)的過程，研究證實(shí)自噬也在子癇前期的胎盤組織中觀察到[11]。DAPK2通過AMPK進(jìn)而在促進(jìn)細(xì)胞自噬的過程中起到重要作用[12]。雌激素受體分布在眾多系統(tǒng)組織中，但是對于女性孕期雌激素生理起關(guān)鍵作用的還是胎盤內(nèi)的雌激素受體數(shù)目。大量的研究結(jié)果表明，雌激素對于心腦血管的血壓調(diào)節(jié)具有保護(hù)作用[13]。本研究提示胎盤組織中雌激素受體表達(dá)的下降，提示妊娠期高血壓疾病的孕期血壓、心功能預(yù)后不良，可能與內(nèi)皮細(xì)胞損傷相關(guān)。本次研究結(jié)果顯示，雌激素受體、DAPK2表達(dá)水平的降低可能與妊娠期高血壓疾病的進(jìn)展相關(guān)。