楊 冉，韓金利，侯建彬，耿明飛

(河南省安陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院，河南 安陽(yáng) 455000)

非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)約為肺癌總數(shù)量的80%[1]，而長(zhǎng)鏈非編碼RNAs(long noncoding RNAs，LncRNAs)是轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度>200 nt的ncRNA，為新發(fā)現(xiàn)的一類調(diào)控型ncRNA[2]，近期研究[3]發(fā)現(xiàn)中國(guó)肺癌患者LncRNA多態(tài)性與鉑類化療毒性之間有密切關(guān)聯(lián)，因而LncRNAs也成為NSCLC中的研究熱點(diǎn)話題。母系表達(dá)基因3(maternally expressed gene 3，MEG3)屬于LncRNAs，有抑癌作用，是首個(gè)發(fā)現(xiàn)具備抑癌功能的LncRNA，可抑制腫瘤血管生成，阻滯細(xì)胞周期[4]，LncRNA RAB11B-AS1屬于反義LncRNA，能經(jīng)各種不同的機(jī)制對(duì)基因表達(dá)發(fā)揮調(diào)控作用，而LncRNA H19則位于人染色體11p5.5，在胚胎時(shí)期高表達(dá)而在出生后下降，可于表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控細(xì)胞分化、增殖、凋亡，介導(dǎo)惡性腫瘤進(jìn)展[5]，然而目前關(guān)于這三項(xiàng)LncRNA與NSCLC的關(guān)系報(bào)道較少。本文分析NSCLC患者手術(shù)前后LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平變化及其與預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料納入2017年4月至2018年5月我院收治的NSCLC患者90例(惡性組)，納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理組織學(xué)確診；②對(duì)本次研究方案知情同意；③均為初診，術(shù)前未行治療，術(shù)后完成規(guī)律隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：①同時(shí)患有其他類型的惡性腫瘤；②資料不全/既往接受過(guò)抗腫瘤治療者；③入組前5個(gè)月內(nèi)接受過(guò)手術(shù)治療。其中男53例，女37例，年齡36～71歲[(54.14±5.57)歲]；腫瘤直徑<3 cm 32例、≥3 cm 58例；病理類型：腺癌50例，鱗癌31例，其他9例；分化程度：低、中、高分別為53、20、17例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移53例；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移21例；TNM分期：Ⅰ期13例、Ⅱ期36例、Ⅲ期33例、Ⅳ期8例。另選擇同期肺良性腫瘤者54例(良性組)、健康體檢人群30例(對(duì)照組)。良性組男32例、女22例，年齡36～73歲[(54.15±5.42)歲]；腫瘤類型：肺炎性假瘤24例，結(jié)核瘤16例，錯(cuò)構(gòu)瘤8例，硬化性血管瘤4例，其他2例。對(duì)照組男18例、女12例，年齡39～70歲[(54.09±5.51)歲]。三組基線資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。本研究獲得我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(AYSZLYY20170207)。

1.2 方法

1.2.1血清LncRNAs水平測(cè)定 取入組對(duì)象3 ml晨空腹靜脈血，離心分離血清。應(yīng)用Total RNA Kit(上海索寶生物科技有限公司)提取出總RNA，后予以瓊脂糖凝膠電泳。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京諾博萊德科技有限公司)合成cDNA，加正反引物各0.8 μl。實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)下，經(jīng)qRT-PCR測(cè)定各LncRNAs水平。

1.2.2資料收集與隨訪 收集所有NSCLC患者基線資料。均接受手術(shù)治療，在術(shù)后3天繼續(xù)采用上述方法測(cè)定血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平。同時(shí)接受隨訪，截止時(shí)間為2021年5月，統(tǒng)計(jì)總生存時(shí)間(OS)。

1.3 觀察指標(biāo)①比較三組血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平；②分析患者手術(shù)前后血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平變化；③以LncRNA平均值為分界線，分成高表達(dá)組、低表達(dá)組，對(duì)比其預(yù)后情況，分析血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平與預(yù)后的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 23.0軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較采用單因素方差分析及LSD-t檢驗(yàn)、配對(duì)樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采取χ2檢驗(yàn)；繪制Kaplan-Meier曲線分析NSCLC患者術(shù)后3年內(nèi)生存情況；采用Cox多因素回歸法分析影響NSCLC預(yù)后的危險(xiǎn)因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平比較惡性組中，LncRNA MEG3高表達(dá)35例、低表達(dá)55例，LncRNA RAB11B-AS1高表達(dá)49例、低表達(dá)41例，LncRNA H19高表達(dá)46例、低表達(dá)44例。惡性組血清LncRNA MEG3水平低于良性組及對(duì)照組，LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平均高于良性組及對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 三組血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平比較

2.2 手術(shù)前后血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平變化NSCLC患者手術(shù)后血清LncRNA MEG3水平高于手術(shù)前，血清LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平均低于手術(shù)前(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 手術(shù)前后血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平變化

2.3 血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平與預(yù)后的關(guān)系LncRNA MEG3高表達(dá)組OS(32.60個(gè)月)較LncRNA MEG3低表達(dá)組(28.03個(gè)月)明顯延長(zhǎng)(Log Ran=6.536，P=0.010)，LncRNA RAB11B-AS1高表達(dá)組OS(28.20個(gè)月)較LncRNA RAB11B-AS1低表達(dá)組(32.66個(gè)月)縮短(Log Rank=5.789，P=0.016)，LncRNA H19高表達(dá)組OS(28.05個(gè)月)較LncRNA H19低表達(dá)組(33.00個(gè)月)縮短(Log Rank =6.416，P=0.011)。見(jiàn)圖1～圖3。

圖1 LncRNA MEG3水平與預(yù)后的關(guān)系

圖2 LncRNA RAB11B-AS1水平與預(yù)后的關(guān)系

圖3 LncRNA H19水平與預(yù)后的關(guān)系

2.4 NSCLC患者預(yù)后的影響因素分析COX回歸分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤大小(≥3 cm)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期(Ⅲ～Ⅳ期)、LncRNA MEG3低表達(dá)、LncRNA RAB11B-AS1高表達(dá)、LncRNA H19高表達(dá)均是NSCLC預(yù)后獨(dú)立性危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表3、表4。

表3 影響NSCLC患者預(yù)后的單因素分析

表4 影響NSCLC患者預(yù)后的多因素分析

3 討論

LncRNAs可通過(guò)多途徑調(diào)控細(xì)胞增殖、分化，在惡性腫瘤中起著重要作用[6，7]，近年來(lái)LncRNAs也被作為NSCLC的潛在靶點(diǎn)[8]。LncRNA MEG3有抑癌作用，研究[9]發(fā)現(xiàn)，LncRNA MEG3表達(dá)下調(diào)后會(huì)激活WNT/β-catenin信號(hào)通路兒增強(qiáng)肺癌細(xì)胞順鉑耐藥性，LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19也是目前參與NSCLC病變的LncRNAs，均可調(diào)控多種基因表達(dá)，從而參與腫瘤微血管、侵襲與轉(zhuǎn)移[10]。Li等[11]發(fā)現(xiàn)，MEG3的甲基化及低表達(dá)可預(yù)測(cè)乳腺癌患者預(yù)后不良，但目前關(guān)于LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19與NSCLC的預(yù)后關(guān)系研究甚少。

本次發(fā)現(xiàn)惡性組血清LncRNA MEG3呈低表達(dá)，而LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19呈較高表達(dá)水平，同時(shí)NSCLC患者的術(shù)后血清LncRNA MEG3高于手術(shù)前，而血清LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19低于手術(shù)前，表明NSCLC患者在手術(shù)前后血清LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19可得到明顯改善。LncRNA MEG3位于染色體14q32上，全長(zhǎng)1.6 kb，為一種不包含閱讀框的LncRNA，以RNA形式發(fā)揮功能，在正常情況下人類垂體組織中LncRNA MEG3高表達(dá)，但垂體出現(xiàn)腫瘤后會(huì)降低或缺失，其表達(dá)濃度降低與腫瘤浸潤(rùn)有關(guān)，Lv等[12]發(fā)現(xiàn)LncRNA MEG3可對(duì)miR-21-5p/PTEN軸進(jìn)行調(diào)控而抑制NSCLC的遷移、侵襲；LncRNA RAB11B-AS1則也參與腫瘤增殖、遷移及侵襲，早期Li等[13]的研究表明，上調(diào) LncRNA RAB11B-AS1可促進(jìn)肺癌腫瘤轉(zhuǎn)移，并預(yù)測(cè)其不良預(yù)后；LncRNA H19為最早被發(fā)現(xiàn)的LncRNAs，Zhang等[14]發(fā)現(xiàn)，LncRNA H19可靶向調(diào)控miR-484以促進(jìn)肺癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。

Zhang等[15]來(lái)自GEO 數(shù)據(jù)庫(kù)證據(jù)發(fā)現(xiàn)，LncRNA-MEG3在NSCLC患者中表達(dá)水平抑制或缺失，其OS或無(wú)進(jìn)展生存期和LncRNA-MEG3低表達(dá)有密切關(guān)系(尤其是≤60歲者)；Li等[16]發(fā)現(xiàn)，LncRNA RAB11B-AS1上調(diào)可促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移并預(yù)測(cè)肺癌不良預(yù)后；Zhou等[17]發(fā)現(xiàn)，LncRNA H19與NSCLC生物學(xué)特征、預(yù)后有密切聯(lián)系。本次研究發(fā)現(xiàn)，不同LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19表達(dá)水平的患者預(yù)后差異均有顯著性，多因素分析也表明LncRNA MEG3低表達(dá)、LncRNA RAB11B-AS1高表達(dá)、LncRNA H19高表達(dá)均為NSCLC預(yù)后獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19參與NSCLC發(fā)生發(fā)展，可作為其預(yù)后的潛在分子標(biāo)志物，但關(guān)于此三類LncRNA在NSCLC預(yù)后中的具體作用機(jī)制及相關(guān)信號(hào)通路需進(jìn)一步開(kāi)展研究進(jìn)行探討。

綜上所述，NSCLC手術(shù)前后LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19發(fā)生明顯變化，且與患者的預(yù)后有密切關(guān)系，可作為預(yù)后分子標(biāo)志物。