楊茂益，李 敏，劉尚麗，梁 翼

(四川省骨科醫(yī)院風(fēng)濕骨關(guān)節(jié)病科，四川 成都 610000)

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthrids，RA)系自身免疫性疾病的一種，主要以累及周?chē)P(guān)節(jié)為主。以對(duì)稱、持續(xù)性多關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)，致殘率高，嚴(yán)重威脅患者的身體健康[1]。相關(guān)研究表示，早期RA患者經(jīng)治療后預(yù)后較好，但該癥早期病情隱匿，故如何早期檢測(cè)RA對(duì)保障患者預(yù)后具有重要作用[2]。血清抗血管內(nèi)皮細(xì)胞抗體(Anti endothelial cell anti-bodies，AECA)是血管內(nèi)皮細(xì)胞受損的分子標(biāo)志物；其通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞功能或激活補(bǔ)體及抗體，使細(xì)胞介導(dǎo)發(fā)揮細(xì)胞毒作用于血管內(nèi)皮損傷，是觸發(fā)血管病變的重要因素[3]。而大量研究發(fā)現(xiàn)，多種自身免疫性疾病有大量免疫細(xì)胞參與，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在其發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用[4]。另研究顯示血小板參數(shù)在RA患者呈高濃度狀態(tài)，然而其表達(dá)與RA患者各項(xiàng)臨床指標(biāo)及預(yù)后的關(guān)系尚不明確。本研究就 AECA、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)在RA患者中的變化及與病情活動(dòng)、預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2016年6月至2018年6月在我院接受診治的120例RA患者為研究組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究組患者臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室相關(guān)檢查符合2010年歐洲風(fēng)濕病聯(lián)盟和美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)[5]；②研究對(duì)象資料真實(shí)完整；③RA患者均未接受相關(guān)治療；④患者及家屬對(duì)本研究知情同意并且簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①影響血小板數(shù)量疾病者；②嚴(yán)重精神疾患或癡呆等無(wú)法配合本研究者；③存在重要臟器或內(nèi)分泌、血液系統(tǒng)病變者；④存在精神疾病無(wú)法配合本研究或依從性差者。120例RA患者中男76例，女44例，年齡21～72歲[(53.21±6.37)歲]，病程(4.71±5.08)年；另根據(jù)患者類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的疾病情況分為活動(dòng)期及緩解期各60例。并選取同期進(jìn)行健康檢查的正常人群96例作為對(duì)照組，男61例，女35例，年齡20～71歲[(53.72±6.51)歲]，各組基線資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法對(duì)研究者資料進(jìn)行收集，比較AECA、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)在RA患者的變化及在病情活動(dòng)的變化情況；并對(duì)RA患者預(yù)后進(jìn)行記錄，分析影響RA患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素。

1.3 觀察指標(biāo)①樣本收集：取受檢者清晨空腹靜脈全血5 ml，采用未加抗凝劑的標(biāo)準(zhǔn)采樣管進(jìn)行采集，離心(3000 r/min，10 min)取血清后分別存放在聚丙烯EP管中，在-80 ℃冰柜中待檢。②AECA檢測(cè)：以免疫熒光法進(jìn)行，試劑盒選取德國(guó)歐蒙實(shí)驗(yàn)診斷公司，操作者需謹(jǐn)慎按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)開(kāi)展檢驗(yàn)。③調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測(cè)：予以美國(guó)Beckm an Coulter公司的流式細(xì)胞儀，測(cè)定CD4+CD25+highT細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分率。④血小板參數(shù)檢測(cè)：采用Beckman Coulter公司DxH800血細(xì)胞分析儀對(duì)研究對(duì)象的血小板相關(guān)參數(shù)進(jìn)行測(cè)定，包括：血小板計(jì)數(shù)、血小板比容、平均血小板體積、血小板分布寬度。⑤生化指標(biāo)檢測(cè)：應(yīng)用日立7600型生化儀，采用上海北加生物公司試劑，測(cè)定甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇水平。

1.4 隨訪本研究隨訪從患者治療開(kāi)始，直至患者本研究的隨訪結(jié)束，為期2年，截止于2020年6月。患者的隨訪時(shí)間2～24個(gè)月[(15.71±5.93)個(gè)月]。隨訪方式主要采用電話隨訪、微信隨訪及患者來(lái)院復(fù)查為主。其中根據(jù)RA患者預(yù)后評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[6]：分為近期控制、顯效、有效、無(wú)效。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以n(%)表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述，比較采用t檢驗(yàn)和F檢驗(yàn)；采用多元Logistic回歸分析影響類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組與對(duì)照組AECA、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)比較研究組AECA、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板各參數(shù)水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 研究組與對(duì)照組AECA、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)比較

2.2 活動(dòng)期與緩解期RA患者與對(duì)照組AECA、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)比較活動(dòng)期與緩解期患者AECA、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板各參數(shù)水平明顯高于對(duì)照組，且活動(dòng)期AECA、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板各參數(shù)水平高于緩解期患者(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 活動(dòng)期與緩解期患者與對(duì)照組AECA、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)比較

2.3 RA患者預(yù)后情況120例患者經(jīng)兩年隨訪后顯示，近期控制41例(34.16%)，顯效25例(20.83%)，有效16例(13.33%)，預(yù)后良好率為82例(68.33%)，38例患者治療無(wú)效，預(yù)后不良率為31.66%。

2.4 RA不同預(yù)后患者相關(guān)資料比較預(yù)后良好和預(yù)后不良患者的年齡、BMI、性別、合并糖尿病、合并高血壓、吸煙、寒冷潮濕環(huán)境暴露、甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇等占比比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；AECA、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)、血小板比容、平均血小板體積、類(lèi)風(fēng)濕因子、血小板分布寬度等占比比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 RA不同預(yù)后患者相關(guān)資料比較

2.5 RA患者預(yù)后不良的影響因素分析患者AECA陽(yáng)性數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、血小板比容、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、血小板分布寬度、平均血小板體積異常為RA患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 RA患者預(yù)后不良的影響因素分析

3 討論

RA早期癥狀不明顯且進(jìn)展迅速，單純的依靠臨床表現(xiàn)和進(jìn)展情況對(duì)患者預(yù)后進(jìn)行評(píng)估缺乏準(zhǔn)確性和特異性。因此尋求與RA生長(zhǎng)及發(fā)展有關(guān)的分子標(biāo)志物，對(duì)于RA的初步篩查、診斷、治療和預(yù)后判斷尤為重要[7]。

3.1 AECA在RA患者中表達(dá)水平及其與患者病情預(yù)后的關(guān)系研究證明，AECA可與血管內(nèi)皮細(xì)胞中多種蛋白結(jié)合，影響細(xì)胞功能，影響風(fēng)濕性疾病的發(fā)病[8]。血管內(nèi)皮損傷時(shí)基底膜抗原暴露，抗體間結(jié)合可形成免疫復(fù)合物，AECA是引發(fā)血管病原必要因素[9]。Yuanyuan等[10]對(duì)相關(guān)性血管炎ACEA靶抗原進(jìn)行分離發(fā)現(xiàn)，血管炎中AECA抗原分子量高，異質(zhì)性大。Inamura等[11]對(duì)RA患者進(jìn)行研究顯示，RA患者中AECA陽(yáng)性率顯著高于骨關(guān)節(jié)炎及健康人群，且RA活動(dòng)期患者AECA陽(yáng)性率高。本研究對(duì)RA患者與正常人群AECA及活動(dòng)期和緩解期患者進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)與上述研究一致，提示AECA與RA患者的疾病進(jìn)展具有密切關(guān)系。同時(shí)，對(duì)患者進(jìn)行隨訪預(yù)后調(diào)查情況顯示，AECA陽(yáng)性數(shù)是影響RA患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素，表明AECA可能作用于RA的進(jìn)展與患者的不良預(yù)后相關(guān)，提示其可作為RA患者一個(gè)潛在的預(yù)后分子生物學(xué)標(biāo)志物。

3.2 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在RA患者中表達(dá)水平及其與患者病情預(yù)后的關(guān)系目前臨床上所知，RA主要為細(xì)胞紊亂引發(fā)自身免疫疾病[12]。而細(xì)胞免疫中最重要的免疫調(diào)控因子就是T細(xì)胞，該細(xì)胞的表達(dá)可有效反映機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)功能[13]。其中，CD4+占T淋巴細(xì)胞的2/3，且超過(guò)50%的細(xì)胞表面活性抗原呈高表達(dá)狀態(tài)；而CD25+是反映細(xì)胞活化的標(biāo)志[14]。相關(guān)研究對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡等免疫性疾病研究發(fā)現(xiàn)，活化的CD4+引發(fā)細(xì)胞因子產(chǎn)生級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)，激活多種細(xì)胞產(chǎn)生黏附因子，使局部炎癥細(xì)胞增生[15]。Hu等[16]通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)RA患者調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的水平升高與機(jī)體存在炎癥反應(yīng)或自我保護(hù)機(jī)制有關(guān)。本研究結(jié)果亦顯示調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在RA患者中顯著上升，且為影響RA患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素，提示調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在RA的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著免疫評(píng)估的作用。這與Wang[17]等研究結(jié)果相似，提示調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可作為評(píng)價(jià)RA患者預(yù)后的潛在分子標(biāo)志物之一。

3.3 血小板參數(shù)在RA患者中表達(dá)水平及其與患者病情預(yù)后的關(guān)系近年來(lái)臨床實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，70%活動(dòng)期RA患者存在血小板計(jì)數(shù)增高的情況；血小板參數(shù)與RA患者炎癥、免疫及疾病進(jìn)展密切相關(guān)[18]。Redfors等[19]研究顯示，血小板可定位于RA活動(dòng)期滑膜炎病灶中，靜止期關(guān)節(jié)則內(nèi)不出現(xiàn)，在RA患者關(guān)節(jié)滑膜及血液中可檢測(cè)到血小板特異性蛋白，考慮血小板在RA發(fā)病中發(fā)揮作用。進(jìn)一步分析相關(guān)機(jī)制在于：活化的血小板可表達(dá)P選擇素，P選擇素又可以與白細(xì)胞的P選擇素糖蛋白配體-1結(jié)合形成復(fù)合物，滑膜血管內(nèi)皮細(xì)胞可吞噬其復(fù)合物，并在趨化因子、補(bǔ)體及其他黏附分子的協(xié)同作用下，遷移滲出至滑膜組織間隙，引起滑膜的免疫反應(yīng)及炎性損傷，并加重患者病情[20]。本研究通過(guò)對(duì)RA患者活動(dòng)期及緩解期血小板參數(shù)水平比較發(fā)現(xiàn)，活動(dòng)期患者血小板各參數(shù)明顯高于緩解期，說(shuō)明血小板活化可加重RA患者疾病進(jìn)展，參與RA病理發(fā)生發(fā)展過(guò)程。同時(shí)本文結(jié)果顯示，血小板各項(xiàng)參數(shù)為影響RA患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素，說(shuō)明血小板參數(shù)與RA的發(fā)展關(guān)系密切，可將其作為預(yù)測(cè)RA患者病情活動(dòng)及預(yù)后的有效指標(biāo)。

綜上，AECA、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及血小板參數(shù)在RA患者中明顯升高，且與患者預(yù)后關(guān)系密切，可作為預(yù)測(cè)RA患者預(yù)后的分子標(biāo)志物和治療的潛在的靶點(diǎn)。此外，由于本研究納入樣本量較少，實(shí)驗(yàn)結(jié)果難免存在偏倚，后續(xù)將擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究，以獲得更為準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。