聶 興

(錦州市中心醫(yī)院 內(nèi)分泌科,遼寧 錦州121000)

2型糖尿病(Type 2 diabetes，T2DM)是較常見(jiàn)的糖尿病類(lèi)型，患者多伴隨機(jī)體糖脂代謝紊亂，且隨著疾病的不斷進(jìn)展，繼發(fā)糖尿病足、糖尿病視網(wǎng)膜病變、大血管病變等并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)增加[1]。研究顯示，T2DM伴大血管病變的發(fā)生主要為大中血管動(dòng)脈粥樣硬化、內(nèi)膜纖維增生、動(dòng)脈中層鈣化等所致的管腔狹窄，其病變類(lèi)型包括心血管病變、腦血管病變、四肢及頸部大血管病變等，嚴(yán)重影響著患者生命健康[2]。目前隨著對(duì)T2DM伴大血管病變的不斷深入研究發(fā)現(xiàn)，其發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，是在糖脂代謝紊亂的基礎(chǔ)上與多種相關(guān)因素共同作用相關(guān)，其中對(duì)細(xì)胞因子改變的研究最多[3]。三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)家族蛋白4(Adenosine triphosphate binds to the transport family protein 4，ABCC4)屬ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族成員之一，其在臨床上被認(rèn)為與惡性腫瘤相關(guān)，但關(guān)于其與T2DM伴大血管病變的關(guān)系研究較少，僅有Marumo等[4]在2015年的1項(xiàng)研究中認(rèn)為可能與T2DM相關(guān)?；谏鲜霰尘埃诒疚难芯恐刑接慉BCC4在T2DM伴大血管病變患者外周血中的表達(dá)及意義，為臨床上T2DM伴大血管病變的研究提供參考。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2020年3月-2021年3月錦州市中心醫(yī)院收治的T2DM患者216例，按照是否合并大血管病變分為單純T2DM組135例、T2DM伴大血管病變組81例，另外同期選取行健康體檢的80例健康志愿者作為健康對(duì)照組。單純T2DM組男68例，女67例，年齡45-67歲，平均年齡(53.20±5.46)歲，BMI 23.46-25.75 kg/m2，平均BMI(24.15±1.00)kg/m2；T2DM伴大血管病變組男41例，女40例，年齡43-66歲，平均年齡(52.19±5.33)歲，BMI 23.01-25.50 kg/m2，平均BMI(24.00±1.09)kg/m2；健康對(duì)照組男38例，女42例，年齡45-68歲，平均年齡(53.86±5.19)歲，BMI 23.24-25.99 kg/m2，平均BMI(24.68±1.13)kg/m2；3組在一般資料中均衡可比(P>0.05)。所有研究對(duì)象及家屬均知情同意本次研究，且經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：T2DM患者均符合《中國(guó)2型糖尿病防治指南(2020年版)》[5]中關(guān)于T2DM的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且T2DM伴大血管病變組經(jīng)臨床、心電圖以及影像學(xué)檢查確診合并大血管病變，包括心血管病變、腦血管病變、四肢及頸部大血管病變等。健康對(duì)照組無(wú)糖尿病史，無(wú)血管病變史，身體健康。均自愿參與本次研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：1型糖尿病者；合并糖尿病酮癥酸中毒、糖尿病高滲性昏迷等糖尿病急性并發(fā)癥者；急慢性感染性疾病者；近期有手術(shù)外傷史者；合并惡性腫瘤者；溝通障礙者；精神障礙者。

1.2 方法

1.2.1空腹血糖、血脂、CHE、Lp(a)水平檢測(cè) 采集3組研究對(duì)象入組次日清晨空腹靜脈血3 ml，使用7100 全自動(dòng)生化分析儀(日立公司)測(cè)定空腹血糖、血脂總膽固醇(Cholesterol total，TC)、甘油三酯(Glycerin trilaurate，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(Low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(High density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、膽堿酯酶(Cholinesterase，CHE)、脂蛋白a(Lipoprotein a，Lp(a))水平。

1.2.23磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)家族蛋白4(Adenosine triphosphate binds to the transport family protein 4，ABCC4)表達(dá)量測(cè)定 采集3組研究對(duì)象入組次日清晨空腹靜脈血3 ml，將采集到的標(biāo)本10 000×g離心處理10 min，對(duì)上清液進(jìn)行提取后，BCA進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)，在2×SDS凝膠緩沖液中加入50 μg蛋白，在100℃環(huán)境中加熱5 min有助于蛋白發(fā)生變性。凝膠電泳完、轉(zhuǎn)膜，取膜，4℃環(huán)境下在5%脫脂牛奶中固定、封閉處理時(shí)間為1 h，將一抗使用0.05%-0.1% TBST給予稀釋(ABCC4一抗為1∶1 000)，4℃孵育過(guò)夜保存，之后使用0.05%-0.1% TBST洗膜3次，每次為5 min，二抗被0.05%-0.1% TBST稀釋(1∶10 000)，搖動(dòng)孵育時(shí)間為 1 h，再次采用TBST連續(xù)洗膜3次，處理時(shí)間為5 min。DAB顯色，定量分析蛋白表達(dá)情況，以GAPDH為內(nèi)參。

1.2.3葡萄糖-6-磷酸酶催化亞基(Glucose-6-phosphatase catalyzes the subunits，G6PC)、二?；视王；D(zhuǎn)移酶2(Diacylglycerolyltransferase 2，DGAT2)表達(dá)量測(cè)定 G6PC、DGAT2表達(dá)量測(cè)定方法同1.2.2。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 3組研究對(duì)象空腹血糖、血脂、CHE、Lp(a)水平對(duì)比

如表1所示，與健康對(duì)照組相比，單純T2DM組、T2DM伴大血管病變組血糖、血脂均較高；與健康對(duì)照組相比，單純T2DM組、T2DM伴大血管病變組CHE降低，Lp(a)升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與單純T2DM組相比，T2DM伴大血管病變組CHE降低，Lp(a)升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 3組研究對(duì)象空腹血糖、血脂、CHE、Lp(a)水平對(duì)比

2.2 3組研究對(duì)象ABCC4表達(dá)對(duì)比

如表2所示，健康對(duì)照組、單純T2DM組ABCC4表達(dá)量對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與健康對(duì)照組、單純T2DM組相比，T2DM伴大血管病變組ABCC4表達(dá)量升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 3組研究對(duì)象ABCC4表達(dá)量對(duì)比

2.3 ABCC4與CHE、Lp(a)相關(guān)性分析

ABCC4與CHE負(fù)相關(guān)(r=-0.324,P=0.003)；ABCC4與(Lp(a))正相關(guān)(r=0.319,P=0.004)。

2.4 3組研究對(duì)象G6PC、DGAT2表達(dá)量對(duì)比

如表3所示，健康對(duì)照組、單純T2DM組G6PC、DGAT2表達(dá)量對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與健康對(duì)照組、單純T2DM組相比，T2DM伴大血管病變組G6PC表達(dá)量降低，DGAT2表達(dá)量升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表3 3組研究對(duì)象G6PC、DGAT2表達(dá)量對(duì)比

2.5 ABCC4與G6PC、DGAT2的相關(guān)性分析

ABCC4與G6PC負(fù)相關(guān)(r=-0.349,P=0.001)；ABCC4與DGAT2正相關(guān)(r=0.324,P=0.003)。

3 討論

當(dāng)T2DM并發(fā)大血管病變后可使動(dòng)脈產(chǎn)生粥樣硬化，進(jìn)而導(dǎo)致多數(shù)患者殘疾或者死亡[6-7]。目前關(guān)于T2DM伴大血管病變的主要發(fā)病機(jī)制尚不完全明確。

ABCCs屬于一類(lèi)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，生理?xiàng)l件下，在各種組織器官中表達(dá)，研究認(rèn)為，其除了具有藥物外排作用外，還對(duì)惡性細(xì)胞的細(xì)胞毒性具有防護(hù)作用，且每個(gè)成員均有自身獨(dú)特的生理功能和底物特異性[8-9]。ABCC4屬于ABCCs家族成員，是轉(zhuǎn)錄編碼此家族中分子量最小的蛋白，研究顯示[10-12]，ABCC4可識(shí)別和轉(zhuǎn)運(yùn)與谷胱甘肽偶合的底物，目前已經(jīng)證實(shí)其與惡性腫瘤細(xì)胞耐藥相關(guān)。谷文莎等[13]認(rèn)為其同家族成員MRP8/14與2型糖尿病患者甲狀腺功能相關(guān)，在本文中推測(cè)ABCC4可能與T2DM伴大血管病變有關(guān)，結(jié)果顯示，與健康人相比，其在T2DM中表達(dá)未見(jiàn)升高和降低，但在T2DM伴大血管病變中表達(dá)升高，此結(jié)果提示ABCC4可能參與T2DM患者繼發(fā)大血管病變過(guò)程。

本研究進(jìn)一步分析其可能參與T2DM伴大血管病變的機(jī)制，發(fā)現(xiàn)ABCC4與CHE、G6PC負(fù)相關(guān)，與(Lp(a))、DGAT2正相關(guān)。其中CHE屬于催化?；憠A水解酶，在人體中以同工酶的形式存在，其在T2DM中降低，這與T2DM患者糖脂代謝紊亂相關(guān)[14-15]。Lp(a)在臨床上被認(rèn)為是可獨(dú)立引起動(dòng)脈粥樣硬化的原因，近年來(lái)有研究表明，其在T2DM患者中表達(dá)升高，尤其是在T2DM有并發(fā)癥患者中表達(dá)更高[16]。G6PC屬于6-磷酸葡萄糖酶催化亞基，其在機(jī)體內(nèi)可經(jīng)催化6-磷酸葡萄糖水解為磷酸、葡萄糖，維持機(jī)體內(nèi)血糖水平，是調(diào)節(jié)機(jī)體糖代謝平衡的關(guān)鍵酶[17]。另外DGAT2被稱(chēng)為二脂酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶，其在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、脂滴中存在，可促進(jìn)?；o酶與甘油二酯結(jié)合，完成甘油三脂的合成，其與T2DM患者機(jī)體糖脂代謝紊亂相關(guān)[18]?；谝陨贤茰y(cè)，ABCC4在T2DM伴大血管病變發(fā)揮作用途徑可能與調(diào)控糖脂代謝的關(guān)鍵酶相關(guān)。

本研究首次分析ABCC4與T2DM伴大血管病變的關(guān)系，推測(cè)其作用機(jī)制，認(rèn)為兩者相關(guān)，但檢索國(guó)內(nèi)外研究并未有研究分析ABCC4與T2DM伴大血管病變的關(guān)系，且本次所納入的樣本量較少，在數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)時(shí)可能存在一定的偏倚，因此上述結(jié)果還需后續(xù)研究大樣本、多中心的分析，并驗(yàn)證本研究所推測(cè)的作用機(jī)制，以期望為臨床上此病的診治提供新方向。

綜上所述，ABCC4在T2DM伴大血管病變患者外周血中表達(dá)升高，且與CHE、G6PC負(fù)相關(guān)，與(Lp(a))、DGAT2正相關(guān)，推測(cè)其在T2DM伴大血管病變發(fā)揮作用途徑可能與調(diào)控糖脂代謝的關(guān)鍵酶相關(guān)。