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        基于HPLC法的生姜酚類成分分析及含量檢測

        2021-12-22 06:58:34萬長江魏光強(qiáng)萬長春
        中國調(diào)味品 2021年12期
        關(guān)鍵詞:量瓶生姜重量

        萬長江,魏光強(qiáng),萬長春

        (1.大理農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院,云南 大理 671003;2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué),昆明 650201;3.大理技師學(xué)院,云南 大理 671003)

        生姜是一種多年生宿根草本植物,具有較高的食用和藥用價(jià)值,同時(shí)也是傳統(tǒng)香料的原材料[1-2]。生姜味辛、微熱,當(dāng)作為藥用材料食用時(shí),具有驅(qū)寒止血的功效,常用于治療中氣虛寒、腹痛,同時(shí)具有化痰止咳、助消化、利分泌、解毒的功效[3]。生姜中含有豐富的功能性物質(zhì),主要包含6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚等酚類物質(zhì)[4-6]。酚類物質(zhì)成分種類及含量是生姜品質(zhì)的關(guān)鍵衡量指標(biāo)。

        本文采用高效液相色譜法(HPLC)對不同種類的生姜中酚類物質(zhì)成分和含量進(jìn)行檢測分析,為生姜品質(zhì)的鑒別提供了理論基礎(chǔ)。

        1 試驗(yàn)條件及樣品制備

        試驗(yàn)過程所用儀器主要包含電子分析天平、高效液相色譜儀以及其他輔助儀器,其中電子分析天平的精度要求達(dá)到十萬分之一[7]。

        所用對照品試劑為批號(hào)為23513-146的6-姜酚,批號(hào)為23513-088的8-姜酚,批號(hào)為23513-157的10-姜酚以及批號(hào)為12121803的6-姜烯酚,要求選用含量均大于98%的對照品試劑[8]。分別取1 mL的6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚對照品試劑放置于10 mL量瓶中,利用甲醇溶解定容至量瓶刻度,搖勻后分別取2 mL的4種對照品溶液放置于同一個(gè)20 mL量瓶中,利用甲醇溶解定容至量瓶刻度,制備成6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的混合對照品試劑溶液[9]。

        生姜選取市場所售來自不同產(chǎn)地的多個(gè)品種,經(jīng)篩選后確定14種測定樣品。將待測定樣品切成2 mm小塊,分別精準(zhǔn)稱取1 g樣品,放置于容量為100 mL的燒瓶中,加入甲醇50 mL后稱取重量,加熱30 min放冷后再次稱取重量,利用甲醇將加熱后的溶液重量補(bǔ)充至加熱前重量,搖勻后進(jìn)行過濾,濾液即為待測定樣品溶液[10]。

        測定過程中選定HPLC色譜柱為250 mm×4.6 mm×5 μm,梯度洗脫過程中流速為1 mL/min,柱溫保持在35 ℃,樣品流入速度為1 mL/min,檢測波長為282 nm。在0 min時(shí),保持55%的流動(dòng)相A,45%的流動(dòng)相B;在10 min時(shí),與0 min保持相同的洗脫參數(shù);在15 min時(shí),保持52%的流動(dòng)相A,48%的流動(dòng)相B;在17 min時(shí),保持40%的流動(dòng)相A,60%的流動(dòng)相B;在38 min時(shí),保持40%的流動(dòng)相A,60%的流動(dòng)相B。

        2 試驗(yàn)分析方法

        量取5 mL待測定樣品溶液,放置于10 mL量瓶中,利用甲醇溶解定容至量瓶刻度,作為1號(hào)線性溶液;量取5 mL待測定樣品溶液,放置于20 mL量瓶中,利用甲醇溶解定容至量瓶刻度,作為2號(hào)線性溶液;量取1 mL待測定樣品溶液,放置于10 mL量瓶中,利用甲醇溶解定容至量瓶刻度,作為3號(hào)線性溶液;量取1 mL待測定樣品溶液,放置于100 mL量瓶中,利用甲醇溶解定容至量瓶刻度,作為4號(hào)線性溶液;將待測定樣品溶液作為5號(hào)線性溶液[11-12]。量取1號(hào)線性溶液5 mL、2號(hào)線性溶液1 mL、3號(hào)線性溶液2 mL、4號(hào)線性溶液4 mL、5號(hào)線性溶液6 mL,按照色譜條件進(jìn)行測定。測定結(jié)果表明,生姜中6-姜酚含量為1.005~100.5 mg/mL,8-姜酚含量為1.001~100.1 mg/mL,10-姜酚含量為0.996~99.6 mg/mL,6-姜烯酚含量為1.28~128 mg/mL。設(shè)定色譜峰面積值為Y,溶液濃度為X,建立濃度與色譜峰面積之間的線性回歸方程:

        量取4號(hào)線性溶液5 mL,按照色譜條件進(jìn)行測定,連續(xù)測定6次,記錄6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的色譜峰面積RSD,色譜峰面積RSD測定數(shù)據(jù)見表1。

        表1 精密度試驗(yàn)檢測數(shù)據(jù)(色譜峰面積RSD)Table 1 The detection data of precision test (chromatographic peak area RSD) %

        由表1可知,6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的色譜峰面積RSD均值分別為0.26%、0.14%、0.45%、0.41%,表明選用的高效液相色譜儀具有良好的精密度,測定方法滿足相關(guān)檢測需求。

        取同一品種的待測定樣品6份,分別切成2 mm小塊,每一份精準(zhǔn)稱取1 g樣品,分別放置于容量為100 mL的燒瓶中,加入甲醇50 mL后稱取重量,加熱30 min放冷后再次稱取重量,利用甲醇將加熱后的溶液重量補(bǔ)充至加熱前重量,搖勻后進(jìn)行過濾,分別量取濾液5 mL,按照色譜條件進(jìn)行測定,記錄6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的色譜峰面積RSD,并計(jì)算色譜峰面積RSD方差值與均方差值[13]。色譜峰面積RSD測定數(shù)據(jù)見表2。

        表2 重復(fù)性試驗(yàn)檢測數(shù)據(jù)(色譜峰面積RSD)Table 2 The detection data of repeatability test (chromatographic peak area RSD) %

        由表2可知,同一種類的生姜6種測試樣品中6-姜酚的色譜峰面積RSD方差趨于0,均方差趨于0;8-姜酚的色譜峰面積RSD方差趨于0,均方差趨于0;10-姜酚的色譜峰面積RSD方差趨于0,均方差為0.0121%,同樣趨于0;6-姜烯酚的色譜峰面積RSD方差趨于0,均方差為0.0138%,同樣趨于0。表明本文選用的高效液相色譜儀在進(jìn)行測定過程中具有較好的數(shù)據(jù)重復(fù)性。

        隨機(jī)取6份生姜待測定樣品,分別切成2 mm的小塊,每一份精準(zhǔn)稱取0.5 g樣品,分別放置于容量為100 mL的燒瓶中,分別加入0.5 g的6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚對照品試劑,加入甲醇50 mL后稱取重量,加熱30 min放冷后再次稱取重量,利用甲醇將加熱后的溶液重量補(bǔ)充至加熱前重量,搖勻后進(jìn)行過濾,分別量取濾液5 mL,按照色譜條件進(jìn)行測定,記錄6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的色譜峰面積RSD,并分別計(jì)算6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的平均回收率[14-15]。6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的回收率測定數(shù)據(jù)見表3~表6。

        表3 6-姜酚加樣回收率試驗(yàn)檢測數(shù)據(jù)(色譜峰面積RSD)Table 3 The detection data of 6-gingerol sampling recovery rate test (chromatographic peak area RSD)

        表4 8-姜酚加樣回收率試驗(yàn)檢測數(shù)據(jù)(色譜峰面積RSD)Table 4 The detection data of 8-gingerol sampling recovery rate test (chromatographic peak area RSD)

        表5 10-姜酚加樣回收率試驗(yàn)檢測數(shù)據(jù)(色譜峰面積RSD)Table 5 The detection data of 10-gingerol sampling recovery rate test (chromatographic peak area RSD)

        表6 6-姜烯酚加樣回收率試驗(yàn)檢測數(shù)據(jù)(色譜峰面積RSD)Table 6 The detection data of 6-shogaol sampling recovery rate test (chromatographic peak area RSD)

        由表3~表6可知,6-姜酚的平均回收率為99.85%,8-姜酚的平均回收率為98.40%,10-姜酚的平均回收率為99.219%,6-姜烯酚的平均回收率為98.22%,因此本文選擇的測定試驗(yàn)方法滿足加樣回收測定需求。

        量取5 mL待測定樣品溶液,置于容量為100 mL的燒瓶中,加入甲醇50 mL后稱取重量,加熱30 min放冷后再次稱取重量,利用甲醇將加熱后的溶液重量補(bǔ)充至加熱前重量,搖勻后進(jìn)行過濾,量取5 mL 濾液7份,分別在0,1,2,4,8,12,24 h按照色譜條件進(jìn)行測定,并計(jì)算色譜峰面積RSD方差值與均方差值[16-17]。色譜峰面積RSD測定數(shù)據(jù)見表7。

        表7 穩(wěn)定性試驗(yàn)檢測數(shù)據(jù)(色譜峰面積RSD)Table 7 The detection data of stability test (chromatographic peak area RSD) %

        由表7可知,測試樣品中6-姜酚在24 h內(nèi)的色譜峰面積RSD方差趨于0,均方差為0.01%,趨于0;8-姜酚在24 h內(nèi)的色譜峰面積RSD方差趨于0,均方差為0.018%,趨于0;10-姜酚在24 h內(nèi)的色譜峰面積RSD方差趨于0,均方差為0.017%,趨于0;6-姜烯酚在24 h內(nèi)的色譜峰面積RSD方差趨于0,均方差為0.024%,趨于0。數(shù)據(jù)表明,待測定樣品溶液放置24 h時(shí)仍具有良好的穩(wěn)定性。

        3 樣品測定與分析

        本文在進(jìn)行生姜樣品中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚含量測定時(shí),進(jìn)樣流速設(shè)定為1 mL/min,使用校正因子對待測定樣品檢測數(shù)據(jù)和對照樣品數(shù)據(jù)進(jìn)行定量計(jì)算,同時(shí)采用回歸方程計(jì)算待檢測樣品中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚含量,測定結(jié)果見表8。

        表8 生姜樣品分類含量測定試驗(yàn)結(jié)果Table 8 The test results of classification and content determination of ginger samples %

        由表8可知,不同種類的生姜樣品中,酚類物質(zhì)含量存在不同程度的差異,主要與生姜的品種、種植地氣候條件以及生長時(shí)間有關(guān)。

        4 結(jié)論

        高效液相色譜法(HPLC)能夠準(zhǔn)確進(jìn)行生姜樣品中酚類物質(zhì)種類及含量的測定,測定過程穩(wěn)定可靠,且具有較好的數(shù)據(jù)重復(fù)性,為生姜品質(zhì)的快速鑒別提供了參考依據(jù)。

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