馬莎 楊建

摘 ?要：目的 ?探究漢族人群脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（Lp-PLA2）基因A379V位點(diǎn)多態(tài)性與心肌梗死的相關(guān)性。方法 ?研究時(shí)間為2019年1月～2020年12月，以期間濟(jì)寧市兗州區(qū)人民醫(yī)院收治的200例心肌梗死患者和200名健康體檢者為對(duì)象開(kāi)展研究。心肌梗死患者設(shè)為觀察組，健康體檢者設(shè)為對(duì)照組，采集兩組受試者的血液標(biāo)本，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)進(jìn)行Lp-PLA2基因A379V位點(diǎn)上的單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)，并采用logistics回歸模型分析Lp-PLA2基因突變與心肌梗死的相關(guān)性。結(jié)果 ?觀察組的總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、Lp-PLA2水平與對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;A379V位點(diǎn)上檢測(cè)到CC、CT、TT三種基因型，觀察組A379V位點(diǎn)上的TT、CT基因分布頻率明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;logistics回歸分析結(jié)果顯示，Lp-PLA2基因A379V位點(diǎn)的基因多態(tài)性與急性心肌梗死的發(fā)生密切相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 ?Lp-PLA2基因多態(tài)性與心肌梗死的發(fā)生密切相關(guān)，Lp-PLA2基因A379V位點(diǎn)突變可能是導(dǎo)致心肌梗死發(fā)生的重要原因。

關(guān)鍵詞：心肌梗死;脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2;基因多態(tài)性;基因突變

中圖分類號(hào)：R542.2+2 ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ?文章編號(hào)：1009-8011（2021）-16-0158-02

心肌梗死（MI）是冠心病分型中致死率最高的一種，也是目前威脅群眾生命安全的主要疾病。MI的發(fā)生與多種因素有關(guān)，如環(huán)境因素、飲食因素、心理因素、遺傳因素等，臨床目前認(rèn)為，動(dòng)脈粥樣硬化是導(dǎo)致MI的主要病理基礎(chǔ)，但MI的遺傳因素影響一直是臨床研究的重點(diǎn)課題[1]。發(fā)現(xiàn)MI的遺傳特點(diǎn)，能夠幫助臨床快速完成高危人群的篩查和預(yù)防，減少M(fèi)I的發(fā)生。相關(guān)研究證明[2]，單核苷酸多態(tài)性（SNPs）可能是導(dǎo)致機(jī)體易感性差異的主要原因，同時(shí)也可能影響機(jī)體動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程和炎癥反應(yīng)等，這都是導(dǎo)致MI發(fā)生的重要因素。脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（Lp-PLA2）屬于磷脂酶超家族，與血小板的激發(fā)和活性密切相關(guān)，目前已有研究證實(shí)Lp-PLA2主要受基因因素調(diào)控，部分基因位點(diǎn)的突變會(huì)影響Lp-PLA2活性，從而影響MI的發(fā)生率[3]。但Lp-PLA2的基因多態(tài)性受到地域、種族等因素的影響，因此在Lp-PLA2多態(tài)性與MI的相關(guān)性上仍存有爭(zhēng)議。本文就漢族人群Lp-PLA2基因多態(tài)性與MI的相關(guān)性進(jìn)行了研究分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 ?資料與方法

1.1 ?一般資料

研究時(shí)間為2019年1月～2020年12月，以濟(jì)寧市兗州區(qū)人民醫(yī)院收治的200例心肌梗死患者和200例健康體檢者為對(duì)象開(kāi)展研究，心肌梗死患者設(shè)為觀察組，健康體檢者設(shè)為對(duì)照組。觀察組包括男性112例，女性88例;年齡45～81歲，平均年齡（62.40±9.70）歲。對(duì)照組包括男性109例，女性91例;年齡38～82歲，平均年齡（61.80±10.40）歲。兩組基本資料對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本次研究已通過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。

1.2 ?納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)冠脈造影確診為MI;②符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)提出的MI診斷標(biāo)準(zhǔn)[4-5];③漢族;④本地居住時(shí)間超過(guò)20年。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并主動(dòng)脈夾層、擴(kuò)張型心肌病等心臟疾病者;②合并嚴(yán)重臟器功能不全、惡性腫瘤、自身免疫疾病或嚴(yán)重感染者;③與同組間其他受檢者有血緣關(guān)系;④合并精神疾病者。

1.3 ?方法

1.3.1 ?血清采集

觀察組在入院后24 h內(nèi)采集血液樣本，對(duì)照組則在預(yù)約體檢當(dāng)天采集樣本，均取空腹靜脈血7 mL，其中5 mL分離血清，保存于-80 ℃下備用，做總膽固醇（TC）、甘油三酯膽固醇（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）及Lp-PLA2檢測(cè)，其余2 mL樣本進(jìn)行DNA提取。

1.3.2 ?DNA提取

取0.3 mL血液樣本置于1.5 mL EP管，加0.7 mL的TBP緩沖液，混勻后在3000 rpm條件下離心5 min，棄上清，加入0.5 mL的TBP緩沖液及10 μL蛋白酶K，55℃下孵育1 h，振蕩混勻后離心，取上清，與0.3 mL無(wú)水乙醇混勻，將混合液置入收集管，離心后棄液體，取DNSC柱加入0.5 mL的AW1緩沖液，離心后棄液體并重復(fù)以上步驟1次，取DNSC柱并加入0.2 mL的AE緩沖液，離心后棄液體并重復(fù)以上步驟1次，提取獲得的DNA做凝膠電泳，進(jìn)行濃度測(cè)定。

1.3.3 ?PCR-RFLP

查找NCBI中關(guān)于Lp-PLA2的Primer 5.0設(shè)計(jì)引物信息，A379V目的基因片段的PCR引物序列為：上游5-CAGACCAACAAGACCAGTACCTT-3，下游5-GACAGCTTTGTCCTGAGATTCAT-3，擴(kuò)增長(zhǎng)度300 bp。

1.4 ?觀察指標(biāo)

對(duì)比兩組TC、TG、HDL-C、LDL-C及Lp-PLA2指標(biāo)，對(duì)比兩組Lp-PLA2在A379V位點(diǎn)上的T基因分布頻率差異性。

1.5 ?統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間計(jì)量資料以（x±s）表示，對(duì)比用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，對(duì)比用χ2檢驗(yàn)，以MI為因變量進(jìn)行多因素logistics回歸分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 ?結(jié)果

2.1 ?血脂及Lp-PLA2水平對(duì)比

觀察組的TC、TG、LDL-C、HDL-C、Lp-PLA2水平與對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 ?基因型和等位基因頻率分布

A379V位點(diǎn)上檢測(cè)到CC、CT、TT三種基因型，觀察組A379V位點(diǎn)上的TT、CT基因分布頻率明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 ?logistics回歸分析

結(jié)果顯示，Lp-PLA2基因A379V位點(diǎn)的基因多態(tài)性（TT、CT）與急性心肌梗死的發(fā)生密切相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

3 ?討論

心血管疾?。–VD）是全球范圍內(nèi)的主要死亡原因之一，在CVD中，冠心病占所有心血管疾病死亡的一半，是發(fā)達(dá)國(guó)家最常見(jiàn)的死亡原因[6]。

目前臨床認(rèn)為，動(dòng)脈粥樣硬化是導(dǎo)致MI的主要病理基礎(chǔ)，但遺傳因素也在MI的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用。Lp-PLA2屬于磷脂酶超家族成員，通過(guò)與脂蛋白結(jié)合形成非酯化脂肪酸，能夠誘發(fā)慢性炎癥，而炎癥反應(yīng)也是導(dǎo)致MI發(fā)生的主要原因之一。Lp-PLA2對(duì)內(nèi)皮功能、炎癥、氧化應(yīng)激、纖溶和斑塊穩(wěn)定性都有不利影響，導(dǎo)致血栓形成和CVD發(fā)生。Lp-PLA2基因遺傳變異可增加脂蛋白水平，同時(shí)也會(huì)增加冠心病發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)。A379V是Lp-PLA2上的一個(gè)重要基因位點(diǎn)，相關(guān)研究認(rèn)為該位點(diǎn)突變能夠影響Lp-PLA2的活性，但由于地域、民族等因素的影響，Lp-PLA2與漢族人群MI的發(fā)生率是否相關(guān)尚未有定論。從本次研究數(shù)據(jù)來(lái)看，觀察組患者Lp-PLA2的A379V位點(diǎn)的CC型基因頻率降低，而CT、TT型基因頻率增加，與對(duì)照組的等位基因也有明顯差異（P<0.05），而且兩組受檢者的血脂水平、Lp-PLA2水平也有顯著差異（P<0.05），這說(shuō)明Lp-PLA2的A379V位點(diǎn)基因突變可能會(huì)影響機(jī)體的血脂水平，該部分基因分型具有作為高脂血癥人群MI發(fā)生的預(yù)測(cè)指標(biāo)。從多因素logistics回歸分析結(jié)果來(lái)看，機(jī)體的Lp-PLA2水平和基因型是導(dǎo)致MI發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，進(jìn)一步提示Lp-PLA2的A379V位點(diǎn)的基因突變與MI密切相關(guān)。

綜上所述，Lp-PLA2基因多態(tài)性與心肌梗死的發(fā)生密切相關(guān)，Lp-PLA2基因A379V位點(diǎn)突變可能是導(dǎo)致心肌梗死發(fā)生的重要原因。目前蛋白調(diào)控參與心血管疾病發(fā)展，同時(shí)基因調(diào)控蛋白發(fā)生，我們以期希望從基因水平上，研究蛋白表達(dá)，來(lái)進(jìn)一步研究心血管疾病的發(fā)病機(jī)制，為心血管疾病的診治提供策略參考。

參考文獻(xiàn)

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[2]Masatoshi F，Tatsuya Y，F(xiàn)azlul KM，etal.SIRT7 has a critical role in bone formation by regulating lysine acylation of SP7/Osterix[J].Nat Commun，2018，9（1）：2833.

[3]Vazquez BN，Blengini CS，Hernandez Y，etal.SIRT7 promotes chromosome synapsis during prophase I of female meiosis[J].Chromosoma，2019，128（3）：2833.

[4]中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)，中華心血管病雜志編輯委員會(huì).急性ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南（2019）[J].中華心血管病雜志，2019，47（10）：766-783.

[5]中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)，中華心血管病雜志編輯委員會(huì).非ST段抬高型急性冠狀動(dòng)脈綜合征診斷和治療指南（2016）[J].中華心血管病雜志，2017，45（5）：359-376.

[6]Persic V， Raljevic D， Markova-Car E， etal. Vitamin D-binding protein （rs4588） T/T genotype is associated with anteroseptal myocardial infarction in coronary artery disease patients.Ann Transl Med.2019，7（16）：374.