張白杜 李文利 鮑麗娟 張林圓 顧曉瓊， 皮 蕾

1 廣州市婦女兒童醫(yī)療中心臨床檢驗部(廣州 510000) 2 廣州市婦女兒童醫(yī)療中心臨床生物資源庫(廣州 510000)

β-地中海貧血(β-thalassemia，β-地貧)，是β-珠蛋白基因突變導(dǎo)致β-珠蛋白生成障礙性的溶血性貧血，是一組常染色體遺傳性疾病，我國南方地區(qū)如廣西、海南、貴州及廣東等地區(qū)多見[1]，患兒表現(xiàn)為不同嚴重程度的慢性進行性溶血，呈小細胞低色素性貧血[2]。

絕大部分β-地貧患者表型的嚴重程度主要取決于其β珠蛋白基因型。正常β-珠蛋白基因型為βN/βN。靜止型β-地貧基因型為β++/βN，紅細胞參數(shù)為基本正?；蚺R界，通常僅能通過分子診斷識別。輕型β-地貧基因型為β+/βN或β0/βN，表現(xiàn)為小細胞低色素和血紅蛋白(hemoglobin，Hb)A2值升高，靜止型和輕型β-地貧個體均無臨床癥狀，無需治療。中間型β-地貧基因型為β+/β+或β+/β0，表型變異比較大，患者存在輕中度貧血，無需終生依賴輸血，但在某些臨床狀況下如感染、手術(shù)或妊娠等需要偶爾或間斷輸注紅細胞，又稱非輸血依賴型地貧(non-transfusion-dependent thalassemia，NTDT)。而重型β-地貧，基因型為β+/β0或β0/β0，表現(xiàn)為嚴重貧血(Hb持續(xù)<70 g/L)，需終生定期輸血并配合規(guī)范的除鐵治療才能存活，因此也稱為輸血依賴型地貧(transfusion-dependent thalassemia，TDT)[3-4]。

β-地貧常規(guī)血細胞分析，主要表現(xiàn)為紅細胞參數(shù)的變化，如紅細胞數(shù)量(red blood cell，RBC)減少，Hb降低，平均紅細胞體積(mean corpuscular volume，MCV)降低等，直方圖表現(xiàn)為波峰左移，峰底變寬(MCV減少，紅細胞分布寬度增大)。在臨床實際工作中時我們發(fā)現(xiàn)，β-地貧患兒血常規(guī)檢查表現(xiàn)不僅有紅細胞參數(shù)的改變，部分患兒的血小板(platelet，PLT)參數(shù)也出現(xiàn)異常，直方圖出現(xiàn)URI(upper region interference)報警[5]，分布峰的右側(cè)上揚，呈拖尾狀，并且常伴有PLT參數(shù)顯示不全的現(xiàn)象。PLT相關(guān)參數(shù)反映PLT的數(shù)量、大小及分布狀態(tài)，主要包括PLT計數(shù)、PLT壓積(plateletcrit，PCT)、PLT平均容積(mean platelet volume，MPV)、PLT分布寬度(platelet distribution width，PDW)和大PLT比率(platelet large cell ratio，P-LCR)，這些參數(shù)在一定程度上反映PLT活性變化或新生PLT數(shù)量比例、以及骨髓的代償增生情況。為調(diào)查β-地貧患兒PLT參數(shù)顯示不全的情況和原因，本研究對301例確診β-地貧患兒在Sysmex-2100進行血細胞分析，根據(jù)基因分型將病例分為重型β-地貧組和非重型β-地貧組，對患兒PLT參數(shù)顯示情況進行比較分析。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集2017年4月—2020年4月我院確診β-地貧患兒301例，其中男180例，女121例，年齡25天至18歲，所有病例均為骨髓移植前病例，按基因分型分為重型組和非重型組：重型組基因型為β+/β0或β0/β0，共計204例，其中男126例，女78例；其他基因型的病例分為非重型組，共計97例，其中男55例，女42例。

1.2 資料

血液分析儀采用Sysmex-2100全自動血液分析儀，檢測試劑為其配套試劑和質(zhì)控品(日本希斯美康株式會社)；顯微鏡(日本OLYMPUS-CX21)，瑞氏-吉姆薩染色液(貝索生物技術(shù)公司)，EDTA-K2真空抗凝采血管(廣州陽普醫(yī)療科技股份有限公司)。

1.3 方法

采用Sysmex-2100對301例β-地貧患兒進行血細胞分析，血涂片制作依照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》(第三版)，經(jīng)瑞氏-吉姆薩染色后，由主管技師及以上檢驗人員進行人工鏡檢，所有操作按照實驗室標準化操作規(guī)程進行(在采血后2 h內(nèi)完成檢測)。

1.4 統(tǒng)計分析

2 結(jié) 果

301例β-地貧患兒中，重型組204例，其中男126例，女78例；非重型組97例，其中男55例，女42例；兩組患兒年齡及男女比例差異無統(tǒng)計學意義。血常規(guī)結(jié)果顯示，PLT參數(shù)顯示不全者102例，占比33.89%；重型β-地貧組PLT參數(shù)顯示不全者75例，非重型β-地貧組PLT參數(shù)顯示不全者27例，兩組患兒PLT參數(shù)顯示不全比例差異無統(tǒng)計學意義，見表1。

表1 重型β-地貧和非重型β-地貧PLT參數(shù)顯示不全比例對比情況

PLT參數(shù)顯示不全的102例中，PLT直方圖異常93例，占91.18%。瑞氏-吉姆薩染色PLT參數(shù)顯示不全的血涂片，鏡檢主要表現(xiàn)為小紅細胞低色素、紅細胞大小不一，可見橢圓形、靶形紅細胞等異型紅細胞以及紅細胞碎片的97例，占95.10%。對比PLT參數(shù)顯示不全病例和PLT參數(shù)全顯示病例的MCV值，PLT參數(shù)全顯示病例的MCV高于PLT參數(shù)顯示不全病例，差異有統(tǒng)計學意義，結(jié)果見表2。

表2 PLT參數(shù)顯示不全病例與PLT參數(shù)全顯示病例MCV差異情況

3 討 論

β-地中海貧血是由于血紅蛋白β基因缺陷所導(dǎo)致的β鏈合成障礙性疾病。臨床多表現(xiàn)為慢性進行性面色蒼白，部分具有典型珠蛋白貧血面容，嚴重者肝脾腫大等，當患兒出現(xiàn)脾功亢進時，可表現(xiàn)為紅系和白系細胞不同程度地減少。地貧患兒對PLT影響不一，α-地貧一般無明顯影響，重度β-地貧可能出現(xiàn)PLT升高[6]。

某些疾病中，患者的PLT參數(shù)如MPV、PDW、PCT及P-LCR可能發(fā)生明顯變化，這些變化與患者自身的因素及藥物作用有關(guān)，與疾病的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的判斷都密切相關(guān)[7-8]。Sysmex-2100血細胞分析儀的PLT檢測是采用激光法和電阻抗法雙通道技術(shù)，激光法運用PLT-O/RET通道，電阻抗法運用RBC/PLT通道。電阻抗法為日常操作中常規(guī)使用，即在RBC/PLT通道內(nèi)通過顆粒大小來鑒別RBC和PLT，在25～250 fl的范圍內(nèi)計數(shù)紅細胞，在2～30 fl的范圍內(nèi)計數(shù)PLT，由于PLT與紅細胞共用同一RBC/PLT通道，因此，當有小紅細胞或紅細胞碎片存在時，就會被誤判為PLT，從而產(chǎn)生PLT增高的假象。而大PLT可能被誤判為紅細胞，從而造成PLT假性降低，兩種情況均使PLT直方圖發(fā)生異常改變。因此，PLT的測量信號易受影響，紅細胞碎片、小紅細胞等因素導(dǎo)致假性升高，而PLT凝集、大PLT等因素則引起PLT假性降低。

PLT參數(shù)顯示不全原因多種多樣，除標本因素、操作因素、病理因素、生理狀態(tài)、臨床用藥影響等之外，紅細胞的變化如小細胞、低色素、紅細胞大小不一及紅細胞碎片等也是影響PLT參數(shù)顯示的重要因素。β-地貧患兒由于珠蛋白合成障礙，導(dǎo)致紅細胞膜僵硬，紅細胞容易變形，并且在循環(huán)中容易遭受各種機械損傷從而形成紅細胞碎片[9]。因此血涂片鏡檢時以小細胞低色素性及大小不一的紅細胞為主要表現(xiàn)，常見紅細胞碎片，偶見橢圓形及靶形等異型紅細胞，上述細胞及碎片，均可被血細胞分析儀誤判為PLT系，導(dǎo)致PLT計數(shù)假性升高，超出血細胞分析儀設(shè)定的參數(shù)范圍時則出現(xiàn)PLT參數(shù)顯示不全的情況[10]。在此次研究中，102例PLT參數(shù)顯示不全標本MCV低于PLT參數(shù)全顯示的標本，差異有統(tǒng)計學意義，血涂片瑞氏-吉姆薩染色鏡檢也驗證了有小紅細胞、紅細胞碎片、PLT聚集97例，占95.10%，證明了這一觀點。因此，對儀器檢測PLT參數(shù)顯示不全的標本，均應(yīng)進行血涂片瑞氏-吉姆薩染色，顯微鏡復(fù)檢積極查找原因。由于Sysmex-2100血細胞分析儀PLT-O通道采用了DNA/RNA核酸熒光染色，在檢測含有小紅細胞、細胞碎片、或大PLT的標本時，有較強的抗干擾能力[11]，因此，對于PLT參數(shù)顯示不全的標本，應(yīng)使用網(wǎng)織紅細胞通道或PLT激光流式法(PLT-O)檢測PLT。

β-地貧患兒PLT參數(shù)顯示不全中，PLT直方圖異常共93例，占91.18%，表明絕大多數(shù)PLT參數(shù)顯示不全的結(jié)果會表現(xiàn)為PLT直方圖異常。從異常的PLT直方圖形態(tài)可初步判斷其原因：小紅細胞干擾引起的PLT直方圖異常主要表現(xiàn)為直方圖右側(cè)翹尾，整條曲線基本是平滑的；而PLT凝集、細胞碎片或紅細胞變形時的異常PLT直方圖則表現(xiàn)為右側(cè)上翹，并且整條曲線不規(guī)則，尤其是右側(cè)曲線，可能出現(xiàn)鋸齒狀表現(xiàn)。因此，臨床工作中可通過PLT直方圖正常與否以及形態(tài)可大致判斷PLT參數(shù)的可信度，以及影響PLT參數(shù)顯示的原因。同時說明該儀器的報警信息可信度較高[12-14]，應(yīng)密切關(guān)注儀器的報警信息。

PLT檢測是研究止血與凝血功能的主要指標之一，其檢測結(jié)果的可靠性至關(guān)重要。β-地貧患兒PLT參數(shù)顯示不全發(fā)生比例較高，可能影響臨床判斷。對于PLT參數(shù)顯示不全的β-地貧患兒標本，實驗室應(yīng)參考PLT直方圖形態(tài)，使用網(wǎng)織紅細胞或PLT-O通道檢測，并進行血涂片瑞氏-吉姆薩染色，顯微鏡復(fù)檢，以提供準確而有臨床價值的信息資料，使臨床醫(yī)生對患者做出正確的診斷和有效的治療。