寇相歡，郭改利，吳蕓

漢中市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 漢中 723000

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是妊娠期特有的疾病類型，主要發(fā)生于妊娠20周以后，具有蛋白尿、高血壓及水腫等主要臨床表現(xiàn)，部分嚴重患者還存在抽搐、昏迷等，可對母嬰結(jié)局產(chǎn)生嚴重影響[1]。截至目前，妊娠期糖尿病的發(fā)病機制還有待進一步明確，但多認為與血管內(nèi)皮損傷、遺傳及免疫因素有關(guān)，探索其相關(guān)機制以預(yù)防和改善妊娠期高血壓、改善母嬰結(jié)局已成為現(xiàn)階段婦科領(lǐng)域的重要課題。

miRNA 是非編碼RNA，廣泛存在于真核生物中，在與靶基因mRNA 序列特異性結(jié)合后可抑制靶基因的降解和翻譯RNA，進而介導(dǎo)相關(guān)細胞的增殖、凋亡及分化過程。相關(guān)研究已證實miR-197、149 等與妊娠期糖尿病的發(fā)生、發(fā)展具有密切相關(guān)性，但關(guān)于miR-98的研究資料較少[2-3]。本研究探討了miR-98在妊娠期糖尿病患者中的表達及其臨床意義，旨在為臨床妊娠期糖尿病的治療和預(yù)后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020 年1 月至2021 年1 月在漢中市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科產(chǎn)檢并分娩的GDM 患者108 例(GDM 組)納入研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)GDM 診斷符合2010 年國際糖尿病與妊娠研究組制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；(2)單胎初產(chǎn)婦；(3)孕周＞36 周；(4)患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并有惡性腫瘤、急慢性嚴重肝、腎功能障礙等其他疾病；(2)多胎妊娠；(3)合并有其他妊娠期并發(fā)癥者。同時選取在我院婦產(chǎn)科產(chǎn)檢的健康孕產(chǎn)婦100 例作為對照組，兩組孕產(chǎn)婦的臨床一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性，見表1。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

表1 兩組孕產(chǎn)婦的一般資料比較()

表1 兩組孕產(chǎn)婦的一般資料比較()

1.2 觀察指標(biāo)與檢查方法 GDM組產(chǎn)婦分娩新生兒后，留取產(chǎn)婦5 mL 臍血，并且抽取空腹肘靜脈血5 mL，4℃條件下3 000 r/min離心10 min，取血清1 mL進行檢測。對照組產(chǎn)婦臍血及靜脈取血方法同妊娠期糖尿病產(chǎn)婦。(1)miR-98 檢測：Trizol 法提取RNA，按照One Step RT-qPCR Kit檢測miR-98表達水平，U6基因為內(nèi)參。miR-98 正向引物：上游5'-AGGGCCTGGTGTGAACTACT-3'，下 游5'-TTCTTTGCTGCTCGCTGA-3'；Mx3005p 儀器計算Real-time PCR，采用Real-time PCR 相對定量法，以2-△△Ct表示miRNA-98水平[5]。(2)實驗室指標(biāo)檢測：葡萄糖氧化酶法檢測空腹葡萄糖(FPG)，放射免疫法檢測空腹胰島素(FINS)，胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)=(FPG×FINS)/22.5，全自動生化分析儀(美國BD 公司生產(chǎn)，型號AH-800)檢測臍血甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0 軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料經(jīng)Bartlett 方差齊性檢驗與Kolmogorov-Smirnov正態(tài)性檢驗，均確認具備方差齊性且近似服從正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，組間比較采用t檢驗；相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析；采用多元線性回歸分析影響血液miR-98表達的因素。檢驗水準(zhǔn)為α=0.05。以P＜0.05差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GDM 組和對照組孕產(chǎn)婦的血液指標(biāo)比較 GDM 組孕產(chǎn)婦的血液miR-98、HDL-C 明顯低于對照組，而FPG、FINS、HOMA-IR、TG 和LDL-C 明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 GDM組和對照組孕產(chǎn)婦的血液指標(biāo)比較()

表2 GDM組和對照組孕產(chǎn)婦的血液指標(biāo)比較()

2.2 GDM組和對照組孕產(chǎn)婦的臍血miR-98及新生兒出生體質(zhì)量比較 GDM組孕產(chǎn)婦的臍血miR-98相對表達量明顯低于對照組，而新生兒出生體質(zhì)量明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 GDM 組和對照組孕產(chǎn)婦的臍血miR-98 及新生兒出生體質(zhì)量比較()

表3 GDM 組和對照組孕產(chǎn)婦的臍血miR-98 及新生兒出生體質(zhì)量比較()

2.3 血清miR-98相對表達量與血清指標(biāo)的相關(guān)性 經(jīng)Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血液miR-98相對表達量與HDL-C 呈正相關(guān)(P＜0.05)，而與FPG、FINS、HOMA-IR、TG和LDL-C呈負相關(guān)(P＜0.05)，見表4。

表4 血清miR-98相對表達量與血清指標(biāo)的相關(guān)性

2.4 影響血液miR-98 表達的因素 將HDL-C、FPG、FINS、HOMA-IR、TG 和LDL-C 作為自變量，miR-98作為因變量進行多元線性回歸分析，結(jié)果顯示FINS、TG是影響miR-98表達的因素(P＜0.05)，見表5。

2.5 產(chǎn)婦臍血miR-98與新生兒出生體質(zhì)量的相關(guān)性 經(jīng)Pearson相關(guān)分析，GDM組產(chǎn)婦臍血miR-98相對表達量與新生兒出生體質(zhì)量呈負相關(guān)(r=-0.527，P＜0.05)，見圖1。

圖1 產(chǎn)婦臍血miR-98與新生兒出生體質(zhì)量的相關(guān)性分析圖

3 討論

妊娠期糖尿病發(fā)病率為孕婦總數(shù)的5%左右，是孕產(chǎn)婦和胎兒死亡的重要原因[6]。最新的臨床研究提示部分妊娠糖尿病患者若能夠有效控制血壓，可以改善妊娠結(jié)局，不必終止妊娠，但現(xiàn)階段關(guān)于妊娠期糖尿病的相關(guān)機制尚未完全明晰，母嬰結(jié)局與血糖控制的關(guān)系尚存在分歧[7-9]。

miRNA 長19～22 nt，屬于非編碼RNA，可通過與靶基因3'端的完全或不完全互補結(jié)合而抑制目的基因的翻譯及表達，并參與個體發(fā)育、細胞分化、增殖、代謝、凋亡、遷移和轉(zhuǎn)移等細胞生物學(xué)過程[10-11]。大量研究發(fā)現(xiàn)miRNA在不同的疾病中呈均現(xiàn)不同的表達譜，并有文獻提示著miRNA 與妊娠期糖尿病具有密切關(guān)系，但具體機制還有待進一步明確[12-14]。本研究發(fā)現(xiàn)GDM 組孕產(chǎn)婦的血液miR-98、HDL-C 明顯低于對照組，而FPG、FINS、HOMA-IR、TG 和LDL-C 明顯高于對照組，該結(jié)果提示GDM 孕婦存在顯著的糖脂代謝異常和miR-98異常表達。相關(guān)機制研究提示miR-98可通過抑制妊娠糖尿病小鼠的脂肪特征蛋白基因從而調(diào)控磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B 通路減輕胰島素抵抗和肝糖異生，還可介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，致使血管內(nèi)皮功能障礙，誘發(fā)動脈粥樣硬化和糖尿病等[15]，為探討妊娠期糖尿病疾病發(fā)展奠定了理論基礎(chǔ)，這也與本研究結(jié)果具有一致性。

進一步研究發(fā)現(xiàn)GDM 組孕產(chǎn)婦的臍血miR-98相對表達量明顯低于對照組，新生兒出生體質(zhì)量明顯高于對照組，這可能是因為miR-98 能通過相關(guān)通路影響胰島β細胞功能，降低胰島素轉(zhuǎn)錄因子水平，調(diào)節(jié)胰島素合成和分泌，進而影響糖脂代謝和新生兒體質(zhì)量；此外，骨骼肌是代謝和利用的主要組織之一，其能夠通過胰島素介導(dǎo)葡萄糖攝取，而骨骼肌葡萄糖攝取能力下降是骨骼肌胰島素抵抗的表現(xiàn)形式，進而影響新生兒體質(zhì)量[16]。

血液指標(biāo)相關(guān)性分析結(jié)果顯示孕產(chǎn)婦的血液miR-98 相對表達量與HDL-C 呈正相關(guān)，而與FPG、FINS、HOMA-IR、TG和LDL-C呈負相關(guān)；多元線性回歸分析結(jié)果顯示：FINS、TG 是miR-98 的影響因素。該結(jié)果提示GDM患者血液miR-98與糖脂代謝有關(guān)，miR-98 可能參與了妊娠期高血壓患者的糖脂代謝異常的進程，同時胰島素抵抗及血脂異常狀態(tài)可能影響了miR-98的表達。miR-98表達下降抑制p65蛋白巰基亞硝基化作用及內(nèi)皮型一氧化氮合酶而降低一氧化氮生物活性，也可能激活核因子κB表達介導(dǎo)血管內(nèi)皮損傷，影響血管內(nèi)皮功能，誘發(fā)妊娠期高血壓[17]。此外，相關(guān)研究提示miRNAs 主要通過抑制靶基因的特殊位點降解靶mRNA和抑制靶mRNA的翻譯，進而對靶基因負性調(diào)控，發(fā)揮腫瘤轉(zhuǎn)移和生長的作用，還可介導(dǎo)血管炎癥反應(yīng)，引起血管內(nèi)皮功能障礙，進而引發(fā)糖脂代謝紊亂[18]。

孕產(chǎn)婦的臍血miR-98 與新生兒體質(zhì)量的相關(guān)性結(jié)果顯示GDM 組臍血miR-98 相對表達量與新生兒出生體質(zhì)量呈負相關(guān)。妊娠期糖尿病孕婦脂肪組織中miR-98 異常表達，可能與miR-98 降低胰島素敏感性的作用相關(guān)。妊娠期糖尿病孕婦血糖高水平使葡萄糖通過胎盤轉(zhuǎn)運進入胎兒體內(nèi)，刺激胎兒β胰島細胞肥大、增生，刺激胰島素分泌增加，抑制脂解作用并促進糖原、蛋白質(zhì)、脂肪合成和，繼而發(fā)生高胰島素血癥，使胎兒體質(zhì)量升高。但也有研究提示妊娠期糖尿病孕婦胎兒娩出后卻容易發(fā)生新生兒低血糖，這可能與妊娠期糖尿病孕婦臍血中miR-98 低表達密切相關(guān)，而miR-98 在外周血及臍血中具有不同的表達模式，可能與孕婦及新生兒不同的血糖改變相關(guān)，這也說明了miR-98 參與了妊娠期糖尿病的發(fā)生、發(fā)展過程[19-20]。

本研究針對GDM 患者血液及臍血miR-98 表達對機體影響的相關(guān)機制進行了分析，嘗試對糖脂代謝的介導(dǎo)途徑進行了探索，具有一定的創(chuàng)新性和臨床參考價值，但具體的相關(guān)信號通路還有待明確和研究。綜上所述，GDM 患者血液及產(chǎn)婦臍血miR-98 表達下調(diào)，血液miR-98 與糖脂代謝有關(guān)，同時產(chǎn)婦臍血miR-98與新生兒出生體質(zhì)量有關(guān)。