張莉，鄧姜云，韓林育

1.陜西省第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710000；2.西安醫(yī)學(xué)院附屬寶雞醫(yī)院病理科，陜西 寶雞 721006

卵巢癌是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一，早期沒有明顯病癥，當(dāng)患者出現(xiàn)很明顯癥狀時大多已是晚期，因此卵巢癌5 年內(nèi)死亡率居高不下[1]。鱗狀細(xì)胞癌抗原(SCCA)是一種具有高度特異的診斷宮頸鱗狀細(xì)胞癌的指標(biāo)，在臨床上使用較為廣泛[2]。目前少有研究SCCA 蛋白表達(dá)可以作為卵巢癌的相關(guān)篩查及診治指標(biāo)。腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因-1(MTA1)作為一種與惡性腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因，已經(jīng)被大量研究證實在惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)[3]。本研究通過檢測卵巢癌患者腫瘤組織中SCCA 與MTA-1 蛋白表達(dá)水平，分析兩者與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系，以期為卵巢癌病理進(jìn)展、轉(zhuǎn)移情況的診斷提供參考指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年1月至2018年12月陜西省第二人民醫(yī)院收治且符合以下納入和排除標(biāo)準(zhǔn)的120 例卵巢癌患者作為卵巢癌組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理學(xué)檢查確診為卵巢癌；②確診前未接受過手術(shù)、化療及放療；③患者臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他類型惡性腫瘤；②合并有嚴(yán)重免疫性疾病者。本研究獲得醫(yī)院倫委會批準(zhǔn)。卵巢癌組患者平均(46.78±7.35)歲；漿液性乳頭狀囊腺癌67例，黏液性囊腺癌33例，子宮內(nèi)膜樣癌20例；病理分級中G1期38例，G2期47例，G3期35例；臨床分級中Ⅰ期17例，Ⅱ期45例，Ⅲ期44 例，Ⅳ期14 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移43 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移77 例；肌層浸潤程度＜1/2 肌層67 例，≥1/2 肌層53 例。另選取同期在我院經(jīng)子宮肌瘤切除病理檢查確診為正常卵巢組織的患者56 例作為對照組。對照組患者平均(47.12±6.89)歲。兩組患者年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 檢測儀器與試劑 免疫組化試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司；SCCA 單克隆抗體和MTA1多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，SCCA和MTA1為濃縮液，使用時需分別按1∶125和1∶150比例稀釋。

1.3 檢測方法 采用免疫組化法檢測卵巢組織中SCCA 與MTA-1 蛋白表達(dá)水平。先取卵巢癌組及對照組卵巢組織樣本用40μg/L 的甲醛進(jìn)行固定，按相關(guān)流程制成4μm厚的切片→脫蠟、水化→磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3 次，5 min/次→滴入3%H2O2，于室溫下靜置15 min→蒸餾水清洗切片3次，5 min/次→PBS中浸泡5 min，取出后進(jìn)行高壓抗原修復(fù)→用蒸餾水清洗3 次，5 min/次→PBS 沖洗3 次，3～4 min/次→滴加50μL 一抗于切片上，在37℃恒溫水浴鍋中水浴30 min→PBS 洗3 次，5 min/次→滴加50μL 生物素標(biāo)記二抗于切片上→PBS 洗3 次，5 min/次→利用DAB對切片進(jìn)行染色操作→洗凈DAB 后對切片用蘇木素進(jìn)行復(fù)染操作→完成后需要用2%鹽酸溶液進(jìn)行分化→對切片用不同濃度酒精進(jìn)行梯度脫水及干燥→干燥之后利用二甲苯對切片做透明處理→處理完成后用中性樹膠對切片進(jìn)行封固→將切片放置到光鏡下觀察染色情況。

1.4 SCCA和MTA1陽性表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)[4-5]根據(jù)細(xì)胞陽性率和染色強度進(jìn)行評分：在高倍鏡(400×)下，挑選5 個隨機且清晰的視野，根據(jù)視野中所能觀察到的陽性細(xì)胞所占比例計分，≤10%計0分，10%～50%計1 分，50%～75%計2 分，＞75%計3 分；根據(jù)視野中細(xì)胞染色程度進(jìn)行評分：無色計0 分，淡黃色計1 分，棕黃色計2 分，褐色計3 分。根據(jù)兩者乘積結(jié)果判斷結(jié)果，≥4分為陽性，＜4為陰性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的SCCA 和MTA1 陽性表達(dá)水平比較 卵巢癌組患者的SCCA和MTA1的陽性表達(dá)率明顯高于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者的SCCA和MTA1陽性表達(dá)水平比較[例(%)]

2.2 不同臨床病理特征卵巢癌組織中的SCCA陽性表達(dá)水平比較 臨床分期Ⅲ/Ⅳ期、腫瘤分級G3、淋巴轉(zhuǎn)移N1/N2及肌層浸潤程度≥1/2患者卵巢癌組織中SCCA陽性表達(dá)水平高于臨床分期Ⅰ/Ⅱ期、腫瘤分級G1/G2、淋巴轉(zhuǎn)移N0及肌層浸潤程度＜1/2患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 不同臨床病理特征卵巢癌組織中的SCCA 陽性表達(dá)水平比較[例(%)]

2.3 不同臨床病理特征卵巢癌組織的MTA1 陽性表達(dá)水平比較 臨床分期Ⅲ/Ⅳ期、淋巴轉(zhuǎn)移N1/N2及肌層浸潤程度≥1/2 患者卵巢癌組織中MTA1 陽性表達(dá)水平高于臨床分期Ⅰ/Ⅱ期、淋巴轉(zhuǎn)移N0及肌層浸潤程度＜1/2患者，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 不同臨床病理特征卵巢癌組織中MTA1陽性表達(dá)水平比較[例(%)]

2.4 卵巢癌組織中SCCA 與MTA1 蛋白表達(dá)的相關(guān)性 120 例卵巢癌患者中有44 例患者瘤組織中SCCA 和MTA1呈現(xiàn)共同陽性表達(dá)，經(jīng)Spearman 相關(guān)系數(shù)分析發(fā)現(xiàn)，兩者呈正相關(guān)(r=0.409，P＜0.05)，見表4。

表4 卵巢癌組織中SCCA與MTA1蛋白表達(dá)的關(guān)系

3 討論

目前臨床上將血清SCCA 水平檢測用于宮頸、頭頸部、食管、肺和氣管、泌尿生殖道和肛管部位等鱗癌的預(yù)后、病情檢測、療效評估等[6-8]。相關(guān)研究指出，SCCA 水平與患者的腫瘤分級、瘤體的大小、肌層侵襲程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，同時SCCA 水平高的患者放化療后的生存率顯著降低，其復(fù)發(fā)率顯著提高[9]。王微微等[10]研究了SCCA 在各類婦科腫瘤中的表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者SCCA 表達(dá)水平和陽性率顯著高于其它婦科惡性腫瘤和良性腫瘤患者。本研究經(jīng)免疫組學(xué)檢驗發(fā)現(xiàn)，SCCA 蛋白在卵巢癌組織中陽性表達(dá)例數(shù)較正常卵巢組織升高，臨床分期越高的患者陽性表達(dá)率越高，存在淋巴轉(zhuǎn)移情況患者中顯著高于無淋巴轉(zhuǎn)移情況患者，肌層浸潤程度深的患者顯著高于淺的患者。表明卵巢癌患者組織病變時會誘導(dǎo)SCCA 蛋白的表達(dá)，并且SCCA 會參與到卵巢癌腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及浸潤過程中。這主要是因為SCCA 主要存在于鱗狀細(xì)胞的胞質(zhì)中，患者腫瘤處細(xì)胞破裂使SCCA 釋放到血清中，進(jìn)而可導(dǎo)致血清中的SCCA 水平升高，另外，此外像宮頸息肉、宮頸贅生物等都可能導(dǎo)致SCCA的升高[11-12]。

既往研究表明，MTA1 上調(diào)表達(dá)的瘤組織更容易發(fā)生浸潤和淋巴轉(zhuǎn)移，在宮頸癌中，MTA1較正常組織會呈現(xiàn)高表達(dá)，并且沉默MTA1 基因會表現(xiàn)出宮頸癌細(xì)胞的惡性發(fā)展[13]。田曉芳等[14]和郭玲等[15]研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌組織中MTA1 蛋白陽性表達(dá)率與正常子宮內(nèi)膜和非典型子宮內(nèi)膜增生等相比顯著升高，達(dá)到78.57%，且MTA1蛋白陽性表達(dá)會隨著子宮內(nèi)膜癌的侵襲和轉(zhuǎn)移程度而顯著升高，因此把MTA1 表達(dá)情況作為子宮內(nèi)膜癌臨床分期和有無淋巴轉(zhuǎn)移的參考指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，MTA1 蛋白在卵巢癌組織中陽性表達(dá)較正常卵巢組織顯著升高，臨床分期越高的患者陽性表達(dá)率越高，存在淋巴轉(zhuǎn)移情況患者中顯著高于無淋巴轉(zhuǎn)移情況患者，肌層浸潤程度深的患者顯著高于淺的患者。其原因在于，MTA1 是一種癌轉(zhuǎn)移基因，當(dāng)卵巢癌腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及浸潤過程時，會誘導(dǎo)MTA1蛋白的合成，對其下游靶蛋白行使其功能，因此臨床分期越靠后，發(fā)生明顯淋巴轉(zhuǎn)移和浸潤層度加深，其陽性表達(dá)率越高[16]。因此在臨床上將MTA1作為一種卵巢癌早期診斷腫瘤標(biāo)志物具有可行性，但是對于MTA1 的具體分子生物學(xué)功能及其作用機制仍需要進(jìn)一步的研究。通過對SCCA和MTA1在卵巢癌患者中的表達(dá)關(guān)系發(fā)現(xiàn)，兩者呈正相關(guān)，這說明SCCA和MTA1蛋白表達(dá)升高與患者腫瘤發(fā)展過程有顯著相關(guān)性，兩者可能在卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程中有著協(xié)同作用。

綜上所述，SCCA 和MTA1 蛋白表達(dá)在卵巢癌患者中都顯著上調(diào)，且陽性表達(dá)率隨著卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移程度呈上升趨勢，兩者在卵巢癌的發(fā)展中均有一定作用，但SCCA 與MTA1 參與調(diào)控卵巢癌的具體機制還需要繼續(xù)研究。