吳良發(fā)，許妍，鄭盈瑩，姜軍華

江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價重點實驗室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029

大七厘丸、大七厘片、大七厘膠囊、大七厘散屬于同方制劑，均由自然銅、硼砂、大黃等十一味藥材全部以生藥粉投料制成，各品種現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)對重金屬控制項目各不相同，大七厘散無總重金屬檢查項，大七厘丸無總重金屬但有酸可溶性重金屬檢查項，而大七厘膠囊和大七厘片有總重金屬檢查項且限量要求不一樣（大七厘膠囊規(guī)定含總重金屬量不得過百萬分之三十，大七厘片規(guī)定含總重金屬量不得過百萬分之十、含砷量不得過百萬分之二）。由于含有礦物藥，大七厘膠囊和大七厘片制定的重金屬限量過于嚴(yán)格，總重金屬和砷含量常出現(xiàn)不合格情況。重金屬控制指標(biāo)和限量不合理以及標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一造成品種之間不公平競爭，因此，有必要建立大七厘制劑中重金屬含量測定的通用方法。

自然銅和硼砂是常用礦物藥，在發(fā)揮藥效的同時伴生的重金屬元素易在體內(nèi)積蓄，對人體有一定的危險，影響人體正常的生理功能［1］。目前，文獻(xiàn)報道多集中在重金屬總量方面的研究［2-5］，而有關(guān)可溶性重金屬方面的研究較少，尚未見大七厘制劑中可溶性重金屬的研究。本文建立ICP-MS 法測定大七厘制劑中可溶性重金屬的含量，為含礦物中成藥中重金屬限量標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

電感耦合等離子質(zhì)譜儀ICP-MS（型號：Agilent 7700），微波消解儀（型號：MARS-Xpress），超聲波清洗器（型號：KQ-500E），萬分之一電子天平（型號：ML204），低速臺式離心機（型號：TDL-40C）。

銅、砷、鉛、鎘混合元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（5283-4682，10 μg/mL）、汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（10-37HGY2，10 μg/mL）以及鋰、鈧、鍺、銦、鉍混合內(nèi)標(biāo)儲備液（5188-6525，100 μg/mL）均購自美國安捷倫公司；人發(fā)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW09101）購自國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；硝酸為優(yōu)級純試劑，胰酶為生化試劑，試驗用水為超純水。所用玻璃儀器均以20%硝酸溶液浸泡24 h，再用去離子水沖洗干凈。

4 家企業(yè)的22 批樣品，包括11 批大七厘丸（江西仁豐藥業(yè)有限公司，規(guī)格：每丸重0.2 g）；2 批大七厘片（江西桔王藥業(yè)有限公司，規(guī)格：每片重0.35 g）；3 批大七厘散（廈門中藥廠有限公司，規(guī)格：每袋裝1.5 g）；6 批大七厘膠囊（江西昂泰制藥有限公司，規(guī)格：每粒重0.3 g）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 混合對照品溶液制備精密吸取銅、砷、鉛、鎘混合元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用5%硝酸溶液制成1 μg/mL 的混合溶液；精密吸取汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用5%硝酸溶液制成0.1 μg/mL 的溶液。

2.1.2 供試品溶液制備取本品適量，研細(xì)（過四號篩），精密稱取0.2 g，精密加入人工腸液［按中國藥典2020 年版四部通則8004 磷酸鹽緩沖液（含胰酶）（pH6.8）制備］25 mL，置37 ℃水浴中超聲處理（功率：500 W，頻率：40 kHz）2 h，搖勻，離心5 min（速度：4 000 r/min），取上清液，即得。取相同體積的人工腸液，同法制備樣品空白溶液。

2.1.3 內(nèi)標(biāo)溶液制備精密吸取鋰、鈧、鍺、銦、鉍混合內(nèi)標(biāo)儲備液適量，用5%硝酸溶液制成1 μg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2 儀器工作參數(shù)

在氦模式下進(jìn)行測定，使用調(diào)諧液調(diào)整儀器分辨率、靈敏度、氧化物、雙電荷等各項指標(biāo)，使達(dá)到測定要求［6］。優(yōu)化參數(shù)見表1。

表1 儀器工作參數(shù)

2.3 測定方法［7］

測定時選取的同位素為63Cu、75As、114Cd、202Hg 和208Pb，其 中63Cu、75As 以72Ge 作為內(nèi)標(biāo)，114Cd 以115In 作為內(nèi)標(biāo)，202Hg、208Pb 以209Bi 作為內(nèi)標(biāo)。儀器的內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣管在儀器分析工作過程中始終插入內(nèi)標(biāo)溶液中，依次將儀器的樣品管插入各個濃度的對照溶液中進(jìn)行測定(濃度依次遞增)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將儀器的樣品管插入供試品溶液中，測定，取3 次讀數(shù)的平均值，扣除相應(yīng)的樣品空白后，從標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得相應(yīng)的濃度。

2.4 線性范圍及檢出限

精密吸取銅、砷、鉛、鎘混合元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 μg/mL）0、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL，分別置50 mL 量瓶中，加5%硝酸溶液制成系列混合對照品溶液。精密吸取汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.4、0.8、1.2、1.5、2.0 mL，分別置100 mL 量瓶中，加5%硝酸溶液制成系列對照品溶液。橫坐標(biāo)（x）為對照品濃度，縱坐標(biāo)（y）為3 次讀數(shù)的平均測量值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并平行測定樣品空白溶液11 次，計算該方法對樣品中各元素的檢出限。結(jié)果見表2。

表2 5種重金屬元素線性范圍及檢出限

2.5 精密度試驗

取4 種混合元素溶液（40 ng/mL）和汞單元素溶液（1.2 ng/mL），分別進(jìn)樣測定6 次，結(jié)果測得銅、砷、鉛、鎘、汞濃度RSD 分別為0.8%、1.7%、1.1%、1.5%、1.8%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取銅、砷、鉛、鎘混合對照品溶液（40 ng/mL）和汞對照溶液（1.2 ng/mL），每間隔一定時間（0、6、12、18、24 h）測定濃度，結(jié)果銅、砷、鉛、鎘、汞濃度RSD 分別為0.9%、1.5%、1.0%、1.6%、1.4%，表明待測元素在24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 準(zhǔn)確度試驗

采用人發(fā)國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW09101）作為參考，考察方法的準(zhǔn)確度，結(jié)果見表3。結(jié)果表明測定值與參考值基本相符，該方法準(zhǔn)確可靠。

表3 準(zhǔn)確度試驗結(jié)果（μg/g）

2.8 樣品含量測定

采用上述方法對22 批大七厘制劑中5 種可溶性重金屬元素進(jìn)行含量測定，結(jié)果見表4。

表4 樣品中可溶性重金屬含量測定結(jié)果（μg/g）

目前國際上對含礦物類中成藥中重金屬的限量沒有明確的規(guī)定，因此，鉛參照香港中成藥注冊安全性要求（不得過179 μg/d），砷參照美國重金屬允許攝入量的要求（不得過130 μg/d），銅、鎘、汞參照中藥注射劑中重金屬及有害元素殘留量檢查指導(dǎo)原則（銅不得過150 μg/d，鎘不得過3 μg/d，汞不得過2 μg/d）以及口服制劑的重金屬限度為注射劑的三倍（銅不得過450 μg/d，鎘不得過9 μg/d，汞不得過6 μg/d）的要求，再根據(jù)大七厘制劑的用法用量計算各品種的推薦限量，結(jié)果見表5。按此標(biāo)準(zhǔn)判定，1 批大七厘片砷含量超過限量，其他樣品均未超過限量。

表5 大七厘制劑中可溶性重金屬推薦限量

3 討論

本文建立了ICP-MS 法測定在模擬人體環(huán)境下可溶解于人工腸液中的重金屬。經(jīng)分析探索研究后，最終模擬體內(nèi)的吸收過程，建立極限量法（最大量法）來測定可溶性重金屬，通過采用人工腸液、較為激烈的提取方法，來保證所提取的可溶性重金屬是在模擬人體環(huán)境下的極限值，避免因試驗參數(shù)無法完全復(fù)制而造成重現(xiàn)性差的問題；同時因人體能吸收的可溶性重金屬的量遠(yuǎn)小于極限值，可避免病理、生理、人種、年齡、性別等帶來的不確定性，達(dá)到安全化控制最大化。樣品的粒徑對測定結(jié)果有影響，研細(xì)過四號篩的粉末測定效果最好。

從樣品檢測結(jié)果來看，大七厘不同劑型和同劑型不同批次之間可溶性重金屬含量有差異，可能與投入生產(chǎn)的原料有關(guān)。1 批大七厘片砷含量超過限量，而未加自然銅的大七厘片中重金屬含量顯著降低，提示自然銅是造成重金屬偏高的主要原因。自然銅在入藥前需經(jīng)煅制,煅后重金屬含量顯著降低［8］。如企業(yè)使用煅制不充分或未煅制的自然銅投料，則可能造成含自然銅中成藥中重金屬含量偏高［9］。因此，控制好原料尤其是自然銅的質(zhì)量，可有效降低成品中重金屬的含量。

研究表明，可溶性重金屬含量遠(yuǎn)低于總重金屬含量［10-12］，說明經(jīng)人體胃腸液消化后大部分重金屬元素被排出了體外，只有被人體吸收的重金屬才具有毒性作用［13］。因此，不能單純以重金屬總量作為毒性限度指標(biāo)，建議將可溶性重金屬作為含礦物中成藥的質(zhì)控指標(biāo)之一，制訂合適的限量標(biāo)準(zhǔn)［14-15］。同時應(yīng)考察重金屬的生物溶出度及形態(tài)價態(tài)［16］，為科學(xué)全面評價重金屬的毒性提供數(shù)據(jù)支撐。