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        基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的川楝素調(diào)控MAPK通路誘導(dǎo)人胃癌MKN-28細(xì)胞凋亡

        2021-12-04 07:40:52李紫瑞邢瑩胡玥滕鈺浩王瑞平
        中醫(yī)藥信息 2021年11期
        關(guān)鍵詞:胃癌

        李紫瑞,邢瑩,胡玥,滕鈺浩,王瑞平

        (南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院,江蘇 南京 210029)

        胃癌(gastric cancer,GC)是一種發(fā)病率高,病死率高的惡性腫瘤[1-2]。中國是全球胃癌發(fā)病率、病死率最高的地區(qū),2015年國家疾控中心發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示:我國胃癌新發(fā)病例在各種惡性腫瘤中列第4 位(456.1/100 000),而在病死率方面,則高居第2 位(390.2/100 000)[3]。

        胃癌具有早診率低、發(fā)病率高、轉(zhuǎn)移率高、病死率高的特點(diǎn),多數(shù)患者需要接受化療、靶向治療為主的內(nèi)科治療,但治療有效率低是制約提高胃癌患者生存率的重要因素。20 世紀(jì)90年代以來胃癌的化療有效率停留在50%左右,未能有所突破,曲妥珠單抗、雷莫盧單抗和阿帕替尼等靶向藥物應(yīng)用于臨床僅僅給晚期患者帶來微弱的生存獲益,目前患者五年生存率仍低于20%。如何在“精準(zhǔn)醫(yī)療”指導(dǎo)下,提高胃癌療效是亟待解決的臨床問題。

        中醫(yī)藥作為胃癌綜合治療的重要組成部分,可參與胃癌患者的治療全過程,具有有效、低毒的優(yōu)勢(shì)。但其中的分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究,以期提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù),更好地推廣應(yīng)用。

        川楝子又名金鈴子,首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,味苦性寒有小毒,為楝科植物川楝(Melia toosendanSieb et Zucc)的果實(shí),具有疏肝泄熱、行氣止痛、殺蟲的功效,主治脘腹脅肋疼痛,疝氣疼痛,蟲積腹痛,頭癬。由川楝子、延胡索組成《保命集》經(jīng)典名方金鈴子散,具有活血散瘀、行氣鎮(zhèn)痛的作用,在臨床上也用于惡性腫瘤的治療。川楝素(toosendanin)是從川楝中提取的一種三萜類成分,藥理作用廣泛,尤其具有廣譜的抗腫瘤藥理作用,已有學(xué)者證實(shí)川楝素能抑制肺癌細(xì)胞增殖[4]、侵襲轉(zhuǎn)移[5],抑制肝癌細(xì)胞增殖[6],誘導(dǎo)尤文氏肉瘤細(xì)胞凋亡[7],逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞阿霉素耐藥[8],具有廣闊的應(yīng)用前景。然而,川楝素對(duì)胃癌細(xì)胞的影響少有探索。因此,本研究擬初步探索川楝素對(duì)人胃癌MKN-28 細(xì)胞的影響及其機(jī)制。

        1 材料與方法

        1.1 細(xì)胞株

        人胃癌MKN-28細(xì)胞購自上海細(xì)胞庫。

        1.2 藥物及試劑

        川楝素(純度≥98%,四川省維克奇生物科技公司,批號(hào):wkq-00131);順鉑(cisplatin,DDP,大連美侖生物公司,批號(hào):MB1055-S);二甲亞砜(DMSO,美國Sigma 公司,批號(hào):D2650-100ML);胎牛血清(FBS,批號(hào):A3160801)、胰酶(批號(hào):25200-072)(美國Gibco公司);RPMI-1640培養(yǎng)液(批號(hào):G4530-500ML)、青鏈霉素雙抗(批號(hào):G4003-100ML)(武漢賽維爾公司);Hoechst 33258 染色試劑盒(杭州碧云天公司,批號(hào):C0003);四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT,合肥Biosharp 公司,批號(hào):BS186-5 g);GAPDH(批號(hào):5174S)、Cleaved Caspase-3(批 號(hào):9664S)、Cleaved-PARP(批 號(hào):5625S)、p38(批號(hào):8690S)和p-p38(批號(hào):4511S);一抗(美國Cell Signaling Technology 公司);二抗(北京中杉金橋生物公司,批號(hào):ZB-2306)。

        1.3 主要儀器

        HERAcell 1501型CO2培養(yǎng)箱、1300A2型生物安全柜(美國Thermo 公司);ELX800 型全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國Bio-Tek 公司);MP-4型電泳儀及轉(zhuǎn)膜儀、CHEMIDOC XRS+伯樂凝膠成像儀(美國Bio-Rad 公司);DS-Qi2正置熒光顯微鏡(日本NIKON公司)。

        1.4 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

        網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析基于PubChem(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)獲取川楝素的2D 和3D 結(jié)構(gòu),通過上傳川楝素的3D 結(jié)構(gòu)圖至PharmMapper 網(wǎng)站(http://www. lilab-ecust. cn/pharmmapper/)獲取川楝素的靶點(diǎn)。根據(jù)PharmMapper 網(wǎng)站所提供的靶點(diǎn)信息,在Uniprot 數(shù)據(jù)庫(https://www. uniprot. org/)檢索出與蛋白靶點(diǎn)相對(duì)應(yīng)的gene symbol。檢索GeneCards(http://www. genecards. org/)數(shù)據(jù)庫和DisGeNET數(shù)據(jù)庫(https://www.disgenet.org),搜索與胃癌相關(guān)的疾病靶基因,將篩選出來的川楝素的作用靶點(diǎn)與胃癌疾病相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行映射,獲取共同靶點(diǎn),通過String 數(shù)據(jù)庫(https://www. string-db. org/)對(duì)共同靶點(diǎn)進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建,使用Cytoscape 3.8.0軟件構(gòu)建藥物-靶點(diǎn)相互作用的網(wǎng)絡(luò)圖。將基因列表導(dǎo)入到KOBAS 3.0(http://kobas.cbi.pku.edu.cn/kobas3)進(jìn)行KEGG 通路富集分析,并繪制藥物-靶點(diǎn)-通路-疾病網(wǎng)絡(luò)圖。

        1.5 細(xì)胞培養(yǎng)

        取人胃癌MKN-28 細(xì)胞株,置于RPMI-1640 培養(yǎng)液(含有10%胎牛血清培養(yǎng)液+1%青鏈霉素雙抗)中,于37 ℃、5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞貼壁后長至80%~90%時(shí)進(jìn)行消化傳代,取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

        1.6 MTT實(shí)驗(yàn)

        取對(duì)數(shù)生長期的人胃癌MKN-28 細(xì)胞接種于96孔板中,每孔 接種6 × 103個(gè),在CO2溫箱中培養(yǎng)24 h。實(shí)驗(yàn)組每孔加入含不同濃度(3、1.5、0.75、0.375 μmol/L)川楝素的完全培養(yǎng)液,陽性參照組加入含5 mg/mL DDP 的完全培養(yǎng)液,空白對(duì)照組僅加入完全培養(yǎng)液。給藥24 h 后,棄去培養(yǎng)液,每孔加入20 μL終濃度為5 mg/mL 的MTT 溶液。繼續(xù)培養(yǎng)4 h 后棄去MTT 溶液,加入DMSO 溶液150 μL,振蕩5~10 min,嚴(yán)格避光操作,酶標(biāo)儀490 nm 處測(cè)OD 值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

        抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組OD值/空白對(duì)照組OD值)×100%

        1.7 Hoechst 33258染色實(shí)驗(yàn)

        取對(duì)數(shù)生長期的人胃癌MKN-28細(xì)胞,向預(yù)先放置了無菌蓋玻片的直徑60 mm培養(yǎng)皿中接種8×105個(gè)細(xì)胞,培養(yǎng)24 h 后加入含川楝素終濃度為1.5 μmol/L和0.75 μmol/L的完全培養(yǎng)液,陽性參照組加入含終濃度為5 mg/mL DDP 的完全培養(yǎng)液,加入陰性對(duì)照組僅加入完全培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)12 h。收集各組細(xì)胞玻片,以4% 的多聚甲醛固定,漂洗后以500 ng/mL 的Hoechst 33258 染色30 min,繼以PBS 漂洗2 次,以正置熒光顯微鏡觀察細(xì)胞染色質(zhì)的變化。

        1.8 Western Blot實(shí)驗(yàn)

        細(xì)胞培養(yǎng)及分組同Hoechst 33258 染色實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)前先配好G-250 考馬斯亮藍(lán)溶液、10%分離膠和5%濃縮膠、上樣緩沖液、電泳緩沖液、轉(zhuǎn)膜緩沖液、TBST緩沖液、5%BSA 封閉液。Western Blot 步驟:①蛋白提?。虎诘鞍诐舛葴y(cè)定(Bradford 法);③每個(gè)樣品取20 μg總蛋白上樣進(jìn)行SDS-PAGE 電泳;④轉(zhuǎn)膜;⑤免疫反應(yīng);⑥凝膠圖像分析。

        1.9 統(tǒng)計(jì)處理

        采用SPSS 26.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,經(jīng)t檢驗(yàn)符合正態(tài)分布者,以單因素方差分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05為差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 川楝素靶點(diǎn)篩選及通路分析

        通過PharmMapper 數(shù)據(jù)庫和Uniprot 數(shù)據(jù)庫篩選出川楝素的279 個(gè)潛在靶點(diǎn),靶點(diǎn)信息見表1。檢索GeneCards 數(shù)據(jù)庫和DisGeNET 數(shù)據(jù)庫,分別得到胃癌靶基因12 202個(gè)和3 806個(gè),去除重復(fù)靶點(diǎn)3 363個(gè),得到胃癌靶基因共12 578個(gè)。將川楝素靶基因與胃癌相關(guān)基因進(jìn)行映射,得到共同靶基因67個(gè),見圖1。

        表1 川楝素靶點(diǎn)信息表

        圖1 川楝素治療胃癌的藥物-疾病共同靶點(diǎn)韋恩圖

        將67個(gè)共同靶基因?qū)氲絊tring數(shù)據(jù)庫對(duì)共同靶點(diǎn)進(jìn)行PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建,根據(jù)得到的靶點(diǎn)相互作用關(guān)系表繪制藥物-靶點(diǎn)相互作用的網(wǎng)絡(luò)圖,見圖2,設(shè)置節(jié)點(diǎn)大小反映Degree 值,紅線代表藥物和靶點(diǎn)之間的關(guān)系,藍(lán)線代表靶點(diǎn)蛋白之間的相互作用關(guān)系。圖中共有68 個(gè)節(jié)點(diǎn),136 條邊,其中Degree 值較大者為INS、EP330、SOD2、ALDH18A1、FOXM1、ANXA1、SDHA、ACTA1(Degree值分別為18、12、8、7、6、6、6、6),表明這些蛋白是川楝素治療胃癌的關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白,SHFM1 節(jié)點(diǎn)不是川楝素的靶基因,但與其他靶基因具有相互作用關(guān)系,其可能是川楝素治療胃癌潛在的靶基因。

        圖2 川楝素-胃癌靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖

        對(duì)川楝素與胃癌的67 個(gè)共同靶蛋白進(jìn)行KEGG通路富集分析,得到164 條通路,排除如“Insulin signaling pathway”“Bladder cancer”“Parkinson disease”“Glioma”等與胃癌不相關(guān)的通路,最后確定了20 條通路,見表2,包括“Metabolic pathways”“Cell cycle”“Pathways in cancer”“TGF-beta signaling pathway”“NF-kappa B signaling pathway”等,并做出KEGG 通路富集分析圖,見圖3。富集分析結(jié)果顯示川楝素有關(guān)胃癌靶點(diǎn)主要作用于“Metabolic pathways”“Cell cycle”“Pathways in cancer”“TGF-beta signaling pathway”和“NFkappa B signaling pathway”相關(guān)通路,其中“Metabolic pathways”的富集因子(rich factor)最高,見圖3,根據(jù)靶點(diǎn)與信號(hào)通路之間的聯(lián)系,建立靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖,見圖4,其中藍(lán)色菱形表示信號(hào)通路,綠色圓形表示疾病靶點(diǎn),黑色連線表示靶點(diǎn)與通路之間的關(guān)系。富集于這20 條通路的靶基因有ACADS、ALAD、PRPS1、PRDX6、ALDH18A1、GSTZ1、SDHA、FBP1、DDC、BLVRA、SUOX、EP300、CUL1、E2F1、SKP1、CALML3、MMP2、PRKCQ、TAB1、BTK、CSNK1G1、PRKD2、INS、PTPRF,其中EP300、CUL1、INS、SKP1、CALML3、E2F1、TAB1 富集的通路較多,分別為8、6、6、5、4、4、3 條通路。

        圖3 川楝素靶點(diǎn)KEGG信號(hào)通路富集分析

        圖4 川楝素治療胃癌的藥物-靶點(diǎn)-通路-疾病網(wǎng)絡(luò)圖

        表2 川楝素KEGG 通路富集

        基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果,初步推測(cè)含有INS、TAB1靶點(diǎn)蛋白的絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信號(hào)通路可能是川楝素治療胃癌的作用通路之一,因此進(jìn)一步設(shè)計(jì)分子生物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證川楝素治療胃癌的作用機(jī)制。

        續(xù)表1

        2.2 川楝素對(duì)人胃癌MKN-28細(xì)胞增殖的影響

        不同濃度的川楝素作用于人胃癌MKN-28 細(xì)胞24 h 后,其抑制細(xì)胞增殖的抑制能力呈現(xiàn)出良好的量效關(guān)系,見圖5。在川楝素濃度到達(dá)3 μmol/L 時(shí),抑制率達(dá)到(80.10 ± 0.70)%;即使在給藥濃度為0.375 μmol/L 時(shí),其抑制率仍能達(dá)到(22.93 ± 1.03)%,與對(duì)照組相比仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),其中川楝素3 μmol/L 組抑制率(80.10 ± 0.70)%與作為陽性參照的5 mg/mL 的DDP 效果(79.93 ± 0.78)%接近?;谝陨蠈?shí)驗(yàn)結(jié)果,筆者初步判定川楝素是一種能夠高效抑制人胃癌MKN-28細(xì)胞增殖的藥物,具有潛在的研究?jī)r(jià)值,并確定了川楝素1.5、0.75 μmol/L作為后續(xù)機(jī)制探討的給藥濃度。

        圖5 不同濃度川楝素對(duì)人胃癌MKN-28細(xì)胞增殖的影響

        2.3 川楝素對(duì)人胃癌MKN-28細(xì)胞凋亡的影響

        逃逸凋亡是惡性腫瘤的基本特征之一,而誘導(dǎo)凋亡是抗腫瘤藥物主要的藥理作用。凋亡過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變,常被用來評(píng)判細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況。為進(jìn)一步明確川楝素是不是通過誘導(dǎo)凋亡來達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的藥理作用,筆者選用了Hoechst 33258染色法,從形態(tài)學(xué)角度觀察凋亡過程中染色質(zhì)的變化。

        Hoechst 33258 是一種能夠特異性結(jié)合DNA 的活性染料,并能夠在正置熒光顯微鏡的紫外光激發(fā)下發(fā)射藍(lán)色熒光,從而特異性地標(biāo)記和反應(yīng)染色質(zhì)形態(tài)。細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變包括:Ⅰ期細(xì)胞核呈波紋狀或折縫樣,部分呈現(xiàn)固縮狀態(tài);Ⅱa 期染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化,形成新月形;Ⅱb 期裂解為碎塊,形成凋亡小體。

        筆者在鏡下觀察發(fā)現(xiàn),空白組中沒有明顯的腫瘤細(xì)胞凋亡的跡象,而與之相比,在經(jīng)不同濃度川楝素、DDP 處理24 h 后,給藥組細(xì)胞核染色質(zhì)出現(xiàn)了凋亡表現(xiàn),包括染色體邊集形成新月形,甚至在川楝素3 μmol/L 組中觀測(cè)到了核破碎形成凋亡小體現(xiàn)象,從形態(tài)學(xué)上直觀地證實(shí)了川楝素能夠誘導(dǎo)胃癌MKN-28細(xì)胞發(fā)生凋亡。見圖6。

        圖6 川楝素對(duì)人胃癌MKN-28細(xì)胞細(xì)胞凋亡的影響

        2.4 川楝素對(duì)MKN-28 細(xì)胞Cleaved Caspase-3,Cleaved-PARP蛋白表達(dá)的影響

        為了探索川楝素誘導(dǎo)凋亡背后的分子機(jī)制,筆者選擇Western Blot 實(shí)驗(yàn)觀察凋亡相關(guān)蛋白的改變。凋亡大體可分為內(nèi)源性凋亡和外源性凋亡,兩種途徑最終都以Caspase-3 活化,剪切PARP 為凋亡執(zhí)行階段標(biāo)志。用Western Blot 法檢測(cè)川楝素對(duì)MKN-28細(xì)胞Cleaved Caspase-3,Cleaved-PARP 蛋白的影響,結(jié)果見圖7。發(fā)現(xiàn),人胃癌MKN-28 細(xì)胞受到不同濃度(1.5、3 μmol/L)的川楝素作用后,與空白組比較,Caspase-3活化形式(Cleaved Caspase-3)表達(dá)隨濃度升高而逐漸升高,而凋亡標(biāo)志性蛋白PARP 隨之被剪切為Cleaved-PARP。作為陽參的DDP 也能明顯地誘導(dǎo)以上兩種凋亡蛋白的表達(dá)上調(diào)。從蛋白層面上證實(shí)了川楝素能夠誘導(dǎo)胃癌MKN-28細(xì)胞凋亡。

        圖7 川楝素對(duì)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

        2.5 川楝素對(duì)MKN-28 細(xì)胞p38、p-p38 蛋白表達(dá)的影響

        調(diào)控信號(hào)通路是抗腫瘤藥物誘導(dǎo)凋亡的上游機(jī)制,絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及診治中都具有重要作用,與腫瘤凋亡、自噬、侵襲轉(zhuǎn)移和耐藥等關(guān)系密切,為此筆者用Western Blot 法檢測(cè)p38 MAPK 信號(hào)通路相關(guān)蛋白p38、p-p38,結(jié)果見圖8。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)p38及其磷酸化形式p-p38 的表達(dá)量,隨著川楝素給藥濃度的增加而上調(diào),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

        圖8 川楝素對(duì)MKN-28細(xì)胞p38、p-p38蛋白表達(dá)的影響

        3 討論

        胃癌的綜合治療手段包括手術(shù)、放療、化療、靶向治療和中醫(yī)藥治療等,其中手術(shù)及放療是針對(duì)局部病灶的治療手段,后三者可以起到全身治療的作用。但是由于胃癌細(xì)胞異質(zhì)性大等特點(diǎn),胃癌化療有效率停滯在50%左右,缺乏有效率高的標(biāo)準(zhǔn)化療方案,造成了進(jìn)展期胃癌治療有效率低、復(fù)發(fā)率高及病死率高的臨床困境。近年來胃癌靶向治療方面都取得了一些進(jìn)步,雷莫盧單抗、阿帕替尼等靶向藥物的相繼問世,給臨床提供了更多治療手段,然而獲益人群主要局限于晚期胃癌患者,且獲益微弱。中醫(yī)藥可以貫穿腫瘤治療的全過程,并被證實(shí)有誘導(dǎo)凋亡、抑制侵襲轉(zhuǎn)移、逆轉(zhuǎn)多藥耐藥等藥理機(jī)制,從而成為腫瘤治療的重要組成部分。川楝素作為一個(gè)從廣泛應(yīng)用的中藥川楝子中獲得的活性成分,近年來在抗腫瘤的研究中大放異彩。本研究借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)系統(tǒng)分析了川楝素治療人胃癌的作用靶點(diǎn)分子,篩選出川楝素作用于胃癌的主要靶點(diǎn)和信號(hào)通路,并通過中藥藥理及細(xì)胞分子實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,明確川楝素調(diào)控MAPK 信號(hào)通路治療胃癌,本項(xiàng)研究將兩者結(jié)合起來,具有一定的創(chuàng)新性和可行性。

        凋亡,又稱為Ⅰ型程序性細(xì)胞死亡,凋亡逃逸是惡性腫瘤的十大特征[9]之一,而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡也是抗腫瘤藥物研發(fā)的主要思路。本研究中,通過Hoechst 33258染色法,從形態(tài)學(xué)角度證實(shí)人胃癌MKN-28細(xì)胞很少發(fā)生自發(fā)性的凋亡,具有凋亡逃逸的特征,但川楝素可以明顯地誘導(dǎo)其發(fā)生細(xì)胞凋亡,見圖6。

        為明確相關(guān)分子機(jī)制,筆者檢測(cè)了凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)隨著給藥劑量的增加,凋亡標(biāo)志性蛋白Caspase-3 被活化成Cleaved Caspase-3,而PARP 隨之被剪切為Cleaved-PARP,見圖7。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果從分子層面提示,川楝素能誘導(dǎo)人胃癌MKN-28 細(xì)胞凋亡,并呈現(xiàn)濃度依賴性。

        隨著腫瘤分子生物學(xué)研究的逐步深入,信號(hào)通路在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中的作用日益受到學(xué)界重視,成為抗腫瘤藥物研發(fā)的重要基礎(chǔ)。MAPK 通路在進(jìn)化上具有高度的保守性,決定了基于調(diào)節(jié)該通路的抗腫瘤藥物,可能在不同物種、瘤種上具有普適性。p38 MAPK作為MAPK 通路中的一支,從多維度調(diào)控腫瘤的發(fā)生和發(fā)展:調(diào)控細(xì)胞周期、分化、凋亡、自噬、侵襲轉(zhuǎn)移及耐藥等[10-13]。因此,筆者選擇MAPK 信號(hào)通路,探索川楝素抗胃癌的分子機(jī)制,保證了本研究結(jié)果的普遍適用性。筆者觀察了川楝素對(duì)MAPK 通路的核心蛋白p38 及其磷酸化形式p-p38 的影響,基于實(shí)驗(yàn)結(jié)果推斷:川楝素可以劑量依賴性地激活MAPK通路。

        通過本研究,可以得出以下結(jié)論:①川楝素能高效抑制人胃癌MKN-28細(xì)胞增殖;②川楝素是通過激活MAPK 通路,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,發(fā)揮其抗腫瘤藥理作用。川楝素是一個(gè)具有進(jìn)一步研究?jī)r(jià)值的抗腫瘤藥物,后續(xù)可通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證其抗腫瘤藥理機(jī)制及其安全性。

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