于坤良，王思農(nóng)，郭斐斐，牛凡琪

（甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000）

相關(guān)研究表明，痤瘡是一種皮膚屏障功能破壞的產(chǎn)物［1］。角質(zhì)層含水量、經(jīng)皮失水量通常用來測定皮膚屏障作用的正常與否，當(dāng)損傷發(fā)生時，皮膚儲水功能下降，丟失水分過多，會出現(xiàn)脫屑、過敏等病理反應(yīng)。VEGF（血管內(nèi)皮生長因子）作為一種促進(jìn)血管新生因子，通常在痤瘡發(fā)病過程中出現(xiàn)含量升高的情況，給瘢痕增生提供了可能性。本課題組通過觀察三黃消痤面膜對于痤瘡大鼠皮膚屏障功能的修復(fù)作用及對大鼠血清中VEGF 含量的影響，探討外用三黃消痤面膜治療痤瘡的可能途徑與機制。

1 材料

1.1 實驗動物

SPF 級Wistar 大鼠48 只，雌性，4～8 周齡，體質(zhì)量（180±20）g，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供，實驗動物許可證號：SCXK（甘）2019－0003。常規(guī)飼養(yǎng)大鼠，由固定配方的標(biāo)準(zhǔn)飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，自由進(jìn)食飲水，動物房溫度20～25 ℃，濕度50%～70%，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后開始試驗。

1.2 實驗藥品

治療用藥：三黃消痤面膜（甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院院內(nèi)協(xié)定處方，試生產(chǎn)階段，方中所用中藥顆粒劑由廣東一方制藥有限公司提供，甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥房采購），組方為黃連、黃芩、黃柏、白及、白芷、茯苓、血竭、薄荷、冰片；0.025%維A酸乳膏（重慶華邦制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字：H50021820）。

造模用藥：100%油酸（天津市富宇精細(xì)化工有限公司提供，批號：101212）。

1.3 實驗儀器及試劑

GPSkin Barrier測試儀（韓國GPOWER 公司）；大鼠血清VEGF ELISA試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

2 方法

2.1 藥物制備方法

黃連、黃芩、黃柏、白及、白芷、茯苓、血竭、薄荷等面膜配方所需的藥物顆粒均勻混合，再將冰片用乳缽研成細(xì)粉，上述藥物均勻混合，放入罐中待用。使用時按相應(yīng)給藥劑量取藥粉，加入熱蒸餾水中混勻，自然冷卻至室溫后，涂抹于無菌敷料上，通過醫(yī)用無紡布貼固定到大鼠造模處，每次用藥20 min。

2.2 動物分組及造模方法

全部大鼠隨機分為空白組、模型組、三黃消痤面膜低劑量組（低劑量組）、三黃消痤面膜中劑量組（中劑量組）、三黃消痤面膜高劑量組（高劑量組）和維A酸乳膏組。除空白組外，對其余各組進(jìn)行造模，造模方法為于大鼠雙耳內(nèi)側(cè)耳廓導(dǎo)管開口處涂抹100%油酸，每次涂抹0.5 mL，每天1次，連續(xù)涂抹3周。造模結(jié)束后，抽取2 只模型大鼠，參照痤瘡組織學(xué)判定標(biāo)準(zhǔn)［3］，判斷滿足（+）～（+++）時表示大鼠痤瘡模型造模完成。見表1。

表1 痤瘡組織學(xué)標(biāo)準(zhǔn)

2.3 給藥方案

按照人和動物體表面積折算的等效劑量比率表計算各治療組大鼠的給藥劑量。低、中、高劑量組給藥劑量分別為0.05、0.1、0.2 g/（kg·d），維A 酸乳膏組給藥劑量為5 g/（kg·d）。造模成功次日開始，按相應(yīng)劑量分別將三黃消痤面膜和維A酸乳膏均勻涂于各治療組大鼠的造模部位進(jìn)行治療，每日1 次，連續(xù)治療14 d。空白組、模型組不涂抹任何藥物［4］。

2.4 實驗觀察指標(biāo)

無創(chuàng)性皮膚測試：采用韓國GPOWER 公司生產(chǎn)的GPSkin Barrier 測試儀，在同一時間、環(huán)境（室溫25～27 ℃，濕度50%～60%）下，分別于療程結(jié)束后6、24、48 h和7、14 d 時對大鼠皮膚含水量和經(jīng)皮失水量進(jìn)行測量，每處測量3 次，檢測結(jié)果取平均值。取鼠耳對造模部位進(jìn)行HE 染色及形態(tài)學(xué)和病理學(xué)觀察。治療后各組大鼠心臟取血，離心取上清液，采用ELISA 檢測血清VEGF含量，具體操作方法參照試劑盒說明書。

2.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 26.0 對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示計量資料，組間比較采用配對樣本t檢驗，P＜0.05 代表差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠治療前后耳廓皮損的病理改變情況

空白組大鼠耳廓皮脂腺體積正常，角質(zhì)層未見明顯增厚。模型組大鼠耳廓皮脂腺體積明顯增大，大量炎細(xì)胞浸潤，角質(zhì)層增厚明顯，皮脂腺導(dǎo)管開口處角化異常明顯。治療后，維A 酸乳膏組皮脂腺體積變小，炎細(xì)胞浸潤減少，角質(zhì)層增厚較前減輕。低劑量組皮脂腺體積變小，炎細(xì)胞浸潤較前減少，角質(zhì)層增厚減輕。中劑量組皮脂腺體積變小，皮脂腺導(dǎo)管開口處角化物質(zhì)堆積減少，炎細(xì)胞浸潤數(shù)目減少。高劑量組皮脂腺體積明顯變小，偶見炎細(xì)胞浸潤，角質(zhì)層增厚明顯改善，皮脂腺開口處未見角化物質(zhì)堆積現(xiàn)象。見圖1。

圖1 各組大鼠耳廓皮損的病理改變情況（HE，×100）

3.2 各組大鼠治療前后皮膚角質(zhì)層含水量的比較

與空白組比較，模型組大鼠耳廓角質(zhì)層含水量明顯下降（t=20.26，P＜0.01）。治療后，與模型組比較，維A酸乳膏組及低、中、高劑量組大鼠角質(zhì)層含水量明顯升高（t1= －8.78，t2= －9.49，t3= －12.15，t4=－27.24，P＜0.01）。低劑量組與維A 酸乳膏組大鼠相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t5= －0.41，P＞0.05），而中、高劑量組與維A酸乳膏組大鼠相比，角質(zhì)層含水量上升，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t6=－5.35，t7= －6.18，P＜0.05）。見表2、圖2。

圖2 各組大鼠耳廓皮膚角質(zhì)層含水量變化

表2 各組大鼠耳廓皮膚角質(zhì)層含水量變化情況［xˉ±s，n=8，g/（h·cm2）］

3.3 各組大鼠治療前后皮膚經(jīng)皮失水量的比較

與空白組比較，模型組大鼠皮損經(jīng)皮失水量明顯上升（t=－12.08，P＜0.05）。治療后，與模型組比較，維A酸乳膏組及低、中、高劑量組大鼠皮膚經(jīng)皮失水量明顯下降（t1= 3.46，t2 =4.11，t3= 4.87，t4= 7.30，P＜0.05）。低劑量組與維A酸乳膏組大鼠相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t= 1.55，P＞0.05），而中、高劑量組與維A酸乳膏組相比，皮膚經(jīng)皮失水量明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t5= 5.72，t6= 11.61，P＜0.05）。見表3、圖3。

圖3 各組大鼠耳廓經(jīng)皮失水量情況

表3 各組大鼠耳廓皮膚經(jīng)皮失水量變化情況［xˉ±s，n=8，g/（h·cm2）］

3.4 各組大鼠治療前后血清中VEGF含量的比較

與空白組比較，模型組大鼠血清中VEGF 的含量明顯升高（t= －24.26，P＜0.01）。治療后，與模型組比較，維A 酸乳膏組及低、中、高劑量組血清中VEGF含量明顯下降（t1= 16.85，t2= 20.81，t3=21.88，t4= 25.09，P＜0.01）。低劑量組與維A 酸乳膏組相比，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（t5= 1.14，P＞0.05）。中、高劑量組與維A 酸乳膏組相比，血清中VEGF 含量明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t6=－4.97，t7= 7.20，P＜0.01）。見表4。

表4 各組大鼠血清中VEGF含量變化情況（xˉ±s，n=8）

4 討論

當(dāng)外界刺激如細(xì)菌、病毒、物理損傷來襲時，皮膚的屏障與免疫功能遭到破壞，表面微生物寄生的微環(huán)境失衡，各種損害也會相繼產(chǎn)生［2］。研究表明，各種損傷因素會誘導(dǎo)雄激素含量失調(diào)、皮膚油脂分泌異常且發(fā)生成分改變和pH值改變，導(dǎo)致出現(xiàn)粉刺、紅斑、丘疹及膿皰，修復(fù)不良時還會導(dǎo)致瘢痕形成［3－4］。因此，在痤瘡的治療中修復(fù)皮膚屏障功能越來越受到人們的關(guān)注。VEGF 在病理改變中的異常增殖是痤瘡瘢痕發(fā)生的早期改變，因此，降低血清中VEGF 表達(dá)，可抑制痤瘡瘢痕形成［5－6］。本次研究旨在觀察三黃消痤面膜對痤瘡大鼠皮膚含水量、經(jīng)皮失水量、VEGF 含量的影響，探討其對于痤瘡可能的治療途徑。

面膜作為一種美容保養(yǎng)品的載體，以其獨特的作用機理，近年來被廣泛應(yīng)用于皮膚病的治療過程中。中藥面膜是以中藥粉或中藥加工品配合一定的成膜材料，均勻涂抹在患者面部的一種外用涂劑［7］。使用面膜治療痤瘡不僅可以將外來刺激進(jìn)行短暫隔絕，形成皮損局部的封閉環(huán)境，還可以擴(kuò)張毛孔，提高代謝，增強角質(zhì)層水合程度，促進(jìn)藥物有效滲透。面膜在揭去的同時，可以帶走皮膚代謝產(chǎn)物、多余分泌的皮脂及壞死細(xì)胞，達(dá)到清潔作用，減少炎細(xì)胞及菌群的數(shù)量，恢復(fù)皮膚表面微環(huán)境的動態(tài)平衡［8］。另一方面，面膜作為藥物成分的載體，能夠使抗炎消腫、活血散瘀的藥物更好地透皮吸收，通過藥物的表皮作用途徑，改變皮損部位的炎癥因子聚集現(xiàn)象、痤瘡丙酸桿菌異常增殖現(xiàn)象和瘢痕形成前期的毛細(xì)血管增生現(xiàn)象，進(jìn)而抑制痤瘡皮損的炎癥反應(yīng)、炎性色素沉著和可能的瘢痕遺留問題。三黃消痤面膜是我院皮膚科的院內(nèi)協(xié)定處方，臨床運用效果較好，且不良反應(yīng)發(fā)生率低，但其對痤瘡的治療機制尚未明確，故在本次實驗中對其進(jìn)一步研究，探討其對于痤瘡的治療機理。

中醫(yī)學(xué)多從清熱解毒祛風(fēng)的角度論治痤瘡。在《外科啟玄》一書中提出了痤瘡血熱發(fā)病的病機，并采用清肺涼血、活血化瘀的原則進(jìn)行治療。三黃消痤面膜以面膜為藥物載體，運用活血化瘀、清熱涼血的中藥來治療痤瘡。方中用藥多苦寒清熱，其中黃芩入肺胃經(jīng)，清肺胃濕熱，涼血；黃連入心脾經(jīng)，清心脾濕熱，理氣機；黃柏入腎經(jīng)，清濕熱退虛熱；白及苦甘澀寒，入肺胃腎經(jīng)，清肺熱補腎水，涼血且能消腫生??；白芷辛溫歸肺胃經(jīng)，祛在表之風(fēng)邪，消腫止痛，燥濕排膿，調(diào)和諸藥之寒涼傷胃；茯苓甘淡性平，驅(qū)邪扶正，主利水消腫，補益正氣；血竭甘咸性平，歸肝經(jīng)，活血化瘀，止痛生肌；薄荷辛涼，入肺肝經(jīng)，透疹，散在表之風(fēng)邪；冰片性辛苦寒，歸心脾肺經(jīng)，增強清熱涼血之效。全方清三焦血熱，兼能活血化瘀?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃芩中的有效成分黃芩苷可提高皮膚抗氧化能力，減輕痤瘡炎癥反應(yīng)［9］。黃連具廣譜抗菌作用，可抑制痤瘡丙酸桿菌過度增殖［10］，且黃連中所含的黃連多糖具有抗氧化作用，能夠減緩細(xì)胞凋亡與異常角化，修復(fù)皮膚微環(huán)境平衡［11］。黃柏可抑制免疫反應(yīng)，減輕炎癥反應(yīng)［12］。白及可促進(jìn)上皮細(xì)胞及組織形成，促進(jìn)表皮新生，修復(fù)表皮損傷［13］。白芷在抑制炎癥反應(yīng)的同時可以平衡激素水平，維持雌雄激素動態(tài)平衡［14］。茯苓能夠增強機體免疫功能，增強皮膚抵御外界刺激的能力［15］。血竭促進(jìn)表皮修復(fù)的功能主要體現(xiàn)在促進(jìn)Ⅰ型膠原形成，減少Ⅲ型膠原形成，在促進(jìn)愈合的同時預(yù)防和減少瘢痕形成［16］。薄荷抗菌作用顯著，且能促進(jìn)藥物透皮吸收［17］。冰片在消炎抑菌的同時，與薄荷相輔，增加角質(zhì)層儲藏功能，促進(jìn)藥物經(jīng)皮吸收［18］。諸藥合用，在清熱涼血，祛風(fēng)散結(jié)的同時，配合面膜載體增強皮膚角質(zhì)層含水量，減少經(jīng)皮失水量，恢復(fù)皮膚表面菌群平衡，促進(jìn)皮膚屏障功能的修復(fù)。

本次實驗從皮膚屏障修復(fù)功能的角度探討三黃消痤面膜治療痤瘡的作用機制，結(jié)果表明三黃消痤面膜可以增加表皮含水量，減少經(jīng)皮失水量，調(diào)節(jié)血清VEGF含量，從而達(dá)到治療痤瘡的效果。