本文通過(guò)對(duì)顯色培養(yǎng)基沙門(mén)氏菌檢測(cè)方法進(jìn)行研究,通過(guò)相關(guān)實(shí)踐檢測(cè)分析和對(duì)比,沙門(mén)氏菌是影響食品公共衛(wèi)生安全的重要因素之一。
隨著這些年的發(fā)展,顯色培養(yǎng)基成為當(dāng)前一種新型的食品沙門(mén)氏菌培養(yǎng)基。在以往培養(yǎng)基的基礎(chǔ)之上,增加了一種新型的具有組合式的特異發(fā)色性酶底物,一旦特異酶在細(xì)菌發(fā)酵過(guò)程中顯現(xiàn)出特異性的發(fā)色底物以后,那么當(dāng)目標(biāo)菌落呈現(xiàn)出不同顏色,此時(shí)就能對(duì)目標(biāo)菌落進(jìn)行有效的鑒別和分離措施,也可以通過(guò)計(jì)數(shù)的方式進(jìn)行。
其中沙門(mén)氏菌有一種非常重要的性質(zhì)就是食源性。目前,沙門(mén)氏菌在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)依舊沿用傳統(tǒng)生化的方式進(jìn)行,這個(gè)過(guò)程包括了分離培養(yǎng)、增菌、生化鑒定、血清鑒定等多個(gè)步驟。這樣的方式所需要的時(shí)間久,通常是需要一周的時(shí)間,并且操作的難度大,準(zhǔn)確度低。為此,這些年以來(lái)沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基由于其操作簡(jiǎn)單、具有很強(qiáng)的選擇性、所需要的時(shí)間較短,從而被全面推廣。這與其他顯色培養(yǎng)基相比較而言,更能被人們所接受。通過(guò)總結(jié)這些年顯色培養(yǎng)基在進(jìn)行沙門(mén)氏菌檢測(cè)時(shí),結(jié)合技術(shù)人員所培養(yǎng)得出的成果,從而獲得以下經(jīng)驗(yàn):
進(jìn)口類沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基對(duì)于市面上常見(jiàn)的幾種進(jìn)口沙門(mén)氏菌可以有以下幾種:美國(guó)BD、法國(guó)AES、法國(guó)科馬嘉、英國(guó)OXOID 等品種,它們的共同特點(diǎn)是菌落小、沙門(mén)氏菌所實(shí)驗(yàn)的菌落顏色對(duì)比十分明顯。進(jìn)口沙門(mén)氏菌在進(jìn)行顯色培養(yǎng)基過(guò)程中使用最為廣泛的屬法國(guó) CHROMagar 顯色培養(yǎng)基,所呈現(xiàn)出顏色則為紫色[1]。
國(guó)產(chǎn)類的沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基沙門(mén)氏菌培養(yǎng)顯色培養(yǎng)基在使用過(guò)程中較為簡(jiǎn)便,從而降低了檢測(cè)的整體工作量。我國(guó)許多培養(yǎng)基都是靠自主研發(fā),當(dāng)前,國(guó)產(chǎn)類的沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基在使用過(guò)程中主要有以下三種銷售量最多:廣東環(huán)凱、北京陸橋以及青島海博。其中北京陸橋的通過(guò)顏色可以判斷出這跟法國(guó)科馬嘉的顯色培養(yǎng)基的效果是相同的;對(duì)于沙門(mén)氏菌會(huì)呈現(xiàn)出紫紅色,那么不是沙門(mén)氏菌則呈現(xiàn)出藍(lán)綠色或者是沒(méi)有顏色。在2009 年廣東環(huán)凱沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基獲得了全國(guó)的發(fā)明銀獎(jiǎng),對(duì)沙門(mén)氏菌其顏色則呈現(xiàn)出粉紅色,如果是大腸桿菌或是大腸菌落則呈現(xiàn)出顯藍(lán)色,枸櫞酸桿菌則會(huì)呈現(xiàn)出紫色,對(duì)于其他菌落顯無(wú)色或者黃色。
從1974 年開(kāi)始法國(guó) CHROMagar公司便開(kāi)始進(jìn)行顯色培養(yǎng)基的相關(guān)研究,為此,從2000 年開(kāi)始沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基就開(kāi)始投入使用,對(duì)于所研究可以從兩大方面進(jìn)行分析: 其一,沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基跟以往的選擇性的培養(yǎng)基進(jìn)行比較,可以發(fā)現(xiàn)沙門(mén)氏菌培養(yǎng)基可以全面取代以往的選擇性的培養(yǎng)基;其二,是屬于國(guó)產(chǎn)類的沙門(mén)氏菌培養(yǎng)基與國(guó)外的沙門(mén)氏菌培養(yǎng)基對(duì)比實(shí)驗(yàn)。
培養(yǎng)基及試劑沙門(mén)氏、志賀氏、腸道菌、GN 增液菌、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)、瓊脂(SS、HE)。北京陸橋生物技術(shù)有限責(zé)任公司所制定出培養(yǎng)基試劑:腸道綜合雙糖管以及對(duì)腸桿菌科鑒定進(jìn)行編碼。沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基產(chǎn)地來(lái)自法國(guó)科馬嘉公司,那么則由鄭州的博騫生物技術(shù)研究所進(jìn)行分裝。對(duì)于沙門(mén)氏菌、大腸埃希氏菌以及志賀氏族進(jìn)行診斷的血清選購(gòu)來(lái)自蘭州生物制品研究所。上面所使用的試劑都是在有效期內(nèi)[2]。
所用儀器和設(shè)備生物安全柜、顯微鏡、電熱恒溫培養(yǎng)箱、電子天平、高壓滅菌鍋。
實(shí)驗(yàn)方法在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中初了所使用的顯微鏡和培養(yǎng)基配置之外,具體的實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)該在100— 1000 級(jí)具有生物特性的潔凈室內(nèi)。
第一,菌株檢測(cè)方法按照 GB/T4789— 2008 中相應(yīng)操作規(guī)程進(jìn)行;第二,菌株的篩選和鑒定經(jīng)過(guò)初篩在CAS、SS、HE 分離平板上挑取相應(yīng)的疑似菌落接種雙糖鑒別生化管,初篩符合者,血清玻片凝集試驗(yàn)和鏡檢,系統(tǒng)生化鑒別實(shí)驗(yàn)。
沙門(mén)氏菌成為引起人們食物中毒或者是導(dǎo)致腸道腹瀉的病原菌之一,成為重要的腸道病原菌。其中通過(guò)添加了特異的顯色底物的方式就能更快檢測(cè)出樣品中所含的沙門(mén)氏菌,從而快速地提高檢測(cè)的準(zhǔn)確率。當(dāng)前沙門(mén)氏菌檢測(cè)的方法依舊沿用之前的生化方法,其中包括了亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液增菌、分離培養(yǎng)、血清型鑒定生化鑒定等多個(gè)步驟,這個(gè)過(guò)程一般需要一個(gè)星期,操作起來(lái)比較繁瑣,并且不能很好地保證和滿足微生物檢測(cè)要求,所以,要快速檢查沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基這個(gè)是非常重要的環(huán)節(jié)。通過(guò)顯色培養(yǎng)基進(jìn)行微生物鑒定的方法,成為這些年配置新型快速檢測(cè)關(guān)鍵技術(shù),就能直接根據(jù)沙門(mén)氏菌的實(shí)驗(yàn)菌落的顏色,從中獲取相關(guān)的變化進(jìn)行初步的鑒定,從而能有效減少其他的干擾因素。在腸道相關(guān)的診斷部門(mén)來(lái)看,其對(duì)食物的采集并不是很規(guī)范,對(duì)于培養(yǎng)基而言有其局限性等眾因素的影響,從而使以往的檢測(cè)分離方法的靈敏度降低。 由于顯色培養(yǎng)基具有高靈敏度、高效率等優(yōu)點(diǎn),作為一種新型的微生物檢測(cè)技術(shù),這種方式得到人們普遍的認(rèn)可。對(duì)于沙門(mén)氏菌在 CAS 顯色平板上,其所呈現(xiàn)出的菌落顏色非常容易辨別出來(lái)是紫色,然而不是沙門(mén)氏菌則會(huì)表現(xiàn)為藍(lán)色或者是灰白色,則充分說(shuō)明 CAS 平板的沙門(mén)氏菌檢出率都普遍高于 SS 以及HE 平板,從而有效簡(jiǎn)化相關(guān)的程序,節(jié)約時(shí)間,由此可見(jiàn),在進(jìn)行顯色培養(yǎng)基時(shí),是屬于有價(jià)值的分離鑒定平板,可以作為以往平板的補(bǔ)充[3]。
總而言之,對(duì)于CAS 平板而言其具有易鑒別、選擇性好的特點(diǎn),其最大的優(yōu)勢(shì)是對(duì)普通培養(yǎng)基的選擇,尤其在面對(duì)突發(fā)事件的處理過(guò)程,通過(guò)選擇CAS 平板的鑒定方式就能取得很好的結(jié)果。通過(guò)將顯色培養(yǎng)基與以往的檢測(cè)技術(shù)結(jié)合的方式能對(duì)食物性致病的菌落進(jìn)行檢測(cè),能快速地獲取到結(jié)果,最終成為微生物快速檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的重要方向。