周文君，池建偉，易陽，張名位，張瑞芬，劉磊，賈栩超，董麗紅，黃菲*

（1.武漢輕工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，湖北武漢 430023）（2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部功能食品重點實驗室，廣東省農(nóng)產(chǎn)品加工重點實驗室，廣東廣州 510610）

龍眼（Dimocarpus longanLour.）為無患子科龍眼屬常綠喬木，主產(chǎn)于廣東、海南、廣西等地區(qū)，是典型的南方特色水果。龍眼多糖（longan polysaccharide，LP）是龍眼中最豐富的活性成分，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化等多種生物活性[1]。枸杞（Lycium barbarumL.）屬于茄科枸杞屬落葉灌木植物，主產(chǎn)于寧夏、甘肅、青海、新疆等地，是我國西北干旱地區(qū)重要經(jīng)濟作物[2]。枸杞多糖（goji polysaccharide，GP）是枸杞的主要活性成分，具有抗糖尿病、改善睪丸功能、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、抗結(jié)腸癌、細胞保護和神經(jīng)調(diào)節(jié)等功效[3]。紅棗（Zizyphus jujubeMill.）是鼠李科棗屬植物棗樹的果實，主產(chǎn)于新疆、河南、山東、河北等地區(qū)，是典型的北方特色水果。紅棗多糖（jujube polysaccharide，JP）是紅棗的主要活性物質(zhì)，具有抗衰老、增強肌力、護肝抗炎、降血糖、免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性[4,5]。研究發(fā)現(xiàn)不同來源多糖的結(jié)構(gòu)和活性均有顯著差異[6]。雖然關(guān)于龍眼、枸杞和紅棗多糖的研究已有較多報道，但對于三種多糖的理化特性和活性差異的研究較少。將南方特色水果龍眼、北方特色水果紅棗和西北干旱地區(qū)經(jīng)濟作物枸杞中的多糖進行比較，明確其構(gòu)效關(guān)系，對豐富植物多糖的理論研究有重要意義。

研究發(fā)現(xiàn)多糖因大分子結(jié)構(gòu)難以被機體直接消化吸收利用，需要依賴于腸道菌群酵解利用，通過影響腸道菌群構(gòu)成及其代謝產(chǎn)物發(fā)揮其生理功能[7]。多糖對腸道菌群的影響主要體現(xiàn)在促進腸道益生菌增殖、增加益生菌豐度[8]。如山藥多糖、發(fā)酵黃精多糖、蛹蟲草多糖等可增加小鼠結(jié)腸內(nèi)雙歧桿菌屬、乳酸菌屬、羅斯氏菌屬等益生菌的豐度，降低另枝菌屬、螺桿菌屬、梭菌屬鏈球菌屬、大腸桿菌、腸球菌等腸道病原菌的豐度，對腸道功能有一定的保護作用[9-11]。因而，植物多糖對益生菌的影響受到越來越多的關(guān)注，多糖通過調(diào)節(jié)益生菌進而發(fā)揮其他生理功效成為一種新的研究方向。

單一多糖的功效一般具有一定的局限性，有研究發(fā)現(xiàn)將多糖按照一定的比例復(fù)配后，其生理功效具有協(xié)同增效的作用[12]。如黃芪多糖和硫酸化三枝九葉草多糖組成的復(fù)合多糖可以克服環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫抑制，顯著促進T淋巴細胞增殖，提高血清抗體滴度、IFN-γ、IL-2、IgG和IgM水平，其復(fù)合多糖效果優(yōu)于單用黃芪多糖或硫酸化三枝九葉草多糖[13]；Wang等[14]將復(fù)合多糖（枸杞多糖:黃芪多糖:香菇多糖=1:1:1）灌胃幼鼠，構(gòu)建了幼齡大鼠腸道菌群與代謝產(chǎn)物的相關(guān)網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)復(fù)合多糖被微生物利用后產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物（如氨基酸和短鏈脂肪酸等）可促進益生菌豐度增加和腸道功能完善。復(fù)合多糖可增加肥胖小鼠腸道菌群中雙歧桿菌屬、別樣棒菌屬、蘇黎世桿菌科等益生菌的數(shù)量[15]。龍眼、枸杞和紅棗多糖的生理功效已被廣泛報道，但對其調(diào)節(jié)益生菌的研究不多，其是否具有協(xié)同益生活性亦不明確。因此，本研究以南方特色水果龍眼、北方特色水果紅棗和西北干旱地區(qū)經(jīng)濟作物枸杞為原料，通過對比三種多糖的理化性質(zhì)和基本結(jié)構(gòu)的差異，考察3種多糖單獨及復(fù)合作用對益生菌增殖的影響，明確其是否具有協(xié)同益生功效。本研究的結(jié)果既可以豐富植物多糖生物活性的理論研究，又能為龍眼、枸杞、紅棗功能性食品研發(fā)提供科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

龍眼干產(chǎn)地廣東，品種為“儲良”；紅果枸杞干產(chǎn)地寧夏，品種為“寧夏枸杞”；紅棗干產(chǎn)地新疆，品種為“灰棗”；以上三種原料購自天平架水果市場。

葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、半乳糖、巖藻糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸標準品均為色譜純，上海源葉生物科技有限公司；葡聚糖標準品（分子量：1、5、12、25、150、270、410、670 ku）（色譜純），美國Sigma aldrich公司；考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒，南京建成科技有限公司；復(fù)合益生菌株（發(fā)酵乳桿菌、副干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、長雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、瑞士乳桿菌、嗜熱鏈球桿菌），廈門元之道生物科技有限公司；其它試劑均為國產(chǎn)分析純。

GL224I-1SCN分析天平，德國賽多利斯集團；SP902S可拆洗靜音破壁機，浙江紹興蘇泊爾生活電器有限公司；Eyelan-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、DRC-1000REC冷凍干燥器，東京理化器械株式會社；MRHei-Tec磁力攪拌器，德國海道夫集團；GL-20M高速冷凍離心機，湖南長沙易達儀器有限公司；BioTekGen5酶標儀，美國伯騰儀器有限公司；WatersACQUITYAPC高效液相色譜儀，美國沃特世公司；ICS 5000高效離子色譜儀，美國Dionex公司；Nexus5DXC FT-IR傅立葉變換紅外光譜儀，美國Nicolet公司；LEO1530VP場發(fā)射掃描電子顯微鏡，德國Zeiss公司；Malvern Zetasizer Series納米粒度儀，英國Malvern儀器有限公司；LS-75HD立式壓力蒸汽滅菌鍋，江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司；SW-OJ-1F超凈工作臺，蘇凈集團蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；HYQX-Ⅲ厭氧培養(yǎng)箱，上海躍進醫(yī)療器械有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 多糖的提取

取龍眼干、枸杞干、紅棗干原料洗灰去核，按料液比1:30（g/mL）的比例加入蒸餾水，打漿2 min直至果肉變成碎小顆粒，質(zhì)地均勻，將果漿轉(zhuǎn)移至5 L燒杯中，覆膜后置于95 ℃水浴浸提4 h，采用紗布趁熱過濾，收集上清液，將濾渣按料液比1:30（g/mL）的比例加入蒸餾水二次提取，收集上清液合并，在65 ℃的水浴溫度下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至原體積的1/5～1/4，得到粗多糖溶液。向粗多糖溶液中加入1/4體積的Sevag試劑（氯仿:正丁醇=4:1混合制得）去除蛋白，800 r/min磁力攪拌20 min后離心（4000 r/min，10 min），收集上清液，重復(fù)多次直至多糖溶液基本無蛋白沉淀，將上清液于65 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機試劑，得到脫蛋白多糖溶液。將脫蛋白多糖溶液加入4倍體積無水乙醇，于4 ℃冰箱存放12 h（靜置過夜），冷凍離心（4000 r/min，20 min）收集沉淀，加少量預(yù)熱蒸餾水溶解沉淀后，采用冷凍干燥得到三種多糖，分別標記為龍眼多糖（LP）、枸杞多糖（GP）和紅棗多糖（JP）。

1.2.2 多糖基本成分分析

1.2.2.1 多糖得率

使用重量法計算多糖得率，計算公式如下：

1.2.2.2 基本化學(xué)成分

中性糖含量測定：采用苯酚-硫酸法[16]。

糖醛酸含量測定：采用Filisetti的間羥基聯(lián)苯法[17]。

蛋白質(zhì)含量測定：采用考馬斯亮藍蛋白試劑盒測定蛋白含量。

1.2.2.3 分子質(zhì)量

樣品的配制方法：稱取適量樣品，加入1 mL流動相溶解，靜置12 h，搖勻，過0.45 μm濾膜，等待分析。

葡聚糖標準品的配制方法：稱取不同分子量的標準品各2 mg，加入流動相1 mL，靜置12 h，搖勻，等待分析。

色譜柱：UltranhydrogelLinear（7.8×300 mm），柱溫35 ℃；流動相：25 mmol/L Na2HPO4+25 mmol/L NaH2PO4+0.05% NaN3緩沖鹽溶液；流速：0.8 mL/min；等度洗脫，進樣體積：10 μL；檢測器：示差折光檢測器，溫度35 ℃。

1.2.3 單糖組成分析

參考Zhang[18]的研究：5 mg樣品加4 mL 4 mol/L三氟乙酸在安瓿瓶中溶解，酒精噴燈封管，在110 ℃條件下水解6 h。冷卻到室溫后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去多余的三氟乙酸，加入3 mL甲醇復(fù)溶，蒸發(fā)干燥四次。最后，使用超純水溶解殘渣，定容到50 mL容量瓶后，過0.22 μm濾膜進行分析。

離子色譜條件：CarbopacPA1分析柱（250×4 mm2）；梯度洗脫過程如下：0～25 min，1% 500 mmol/L NaOH；25～40 min，線性梯度1～100% 500 mm NaOH；40～50 min，100% 500 mmol/L NaOH。用NaOH和CH3COONa洗脫葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸。0～20 min，20% 500 mmol/L NaOH；20～30 min，100% 100 mmol/L NaOH和170 mmol/L CH3COONa，30～45 min，線性梯度20～35% 500 mmol/L NaOH。進樣量為20 μL，柱溫為30 ℃。結(jié)果根據(jù)單糖標準品的保留時間進行分析，并通過出峰的面積比計算出單糖摩爾百分比。

1.2.4 紅外光譜分析

取1～2 mg多糖樣品，與100 mg KBr研磨混合后壓片，采用傅立葉變換紅外光譜儀掃描分析，掃描范圍為4000～400 cm-1。

1.2.5 掃描電鏡分析

取2～3 mg多糖粉末，使其薄且均勻的分布在導(dǎo)電膠上，真空噴金，用掃描電子顯微鏡觀察其在200和20000倍下的形貌特征。

1.2.6 多糖的溶液特性分析

多糖的溶解性測定：參考尹艷[19]的研究并稍作修改，稱取200 mg的多糖樣品，溶于4 mL蒸餾水中，室溫下靜置30 min，期間每隔5 min渦旋振蕩10 s。靜置后離心（4000 r/min，10 min），取上清液1 mL，冷凍真空干燥，稱重干燥后的上清質(zhì)量，以每毫升水中溶解的多糖的質(zhì)量來表征其溶解性。

多糖溶液的粒徑與電位測定：稱取10 mg的多糖樣品，溶于4 mL蒸餾水中，渦旋混勻后使用納米粒度儀在25 ℃通過動態(tài)光散射分析多糖水溶液的Zeta電位（Zp）和粒度（Size）。

1.2.7 單一多糖對復(fù)合菌種的益生活性評價

無碳MRS液體培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，酵母膏4 g，牛肉膏8 g，檸檬酸氫二銨2 g，無水乙酸鈉5 g，七水合硫酸鎂0.2 g，磷酸二氫鉀2 g，四水合硫酸錳0.04 g，吐溫801 mL，L-半胱氨酸0.5 g，加入1 L蒸餾水，調(diào)整pH為6.2～6.5。

菌株活化：將保存的復(fù)合益生菌株（發(fā)酵乳桿菌、副干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、長雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、瑞士乳桿菌、嗜熱鏈球桿菌）溶于適量0.9%無菌生理鹽水中制成菌懸液，取200 μL菌懸液接種到MRS液體培養(yǎng)基中，置于厭氧恒溫培養(yǎng)箱（10% CO2、10% H2和80% N2，37 ℃）中培養(yǎng)24 h進行活化。取活化好的菌液繼續(xù)傳代培養(yǎng)。將傳代培養(yǎng)至穩(wěn)定期的菌液3500 r/min離心10 min，棄去上清液，用0.9%無菌生理鹽水洗滌沉淀兩次，最后加入10 mL生理鹽水重懸菌體制成菌懸液備用。

試驗設(shè)計：空白對照組、陽性對照組（菊粉和葡萄糖）、LP、GP和JP組，每組均設(shè)計5個濃度（1、5、10、20、30 mg/mL）。

按照4%（V/V）的接種量將制備好的菌懸液接種至以不同多糖樣品和對照為碳源的培養(yǎng)基中，于37 ℃厭氧培養(yǎng)，培養(yǎng)48 h后取1.5 mL測培養(yǎng)液的pH值，另取2 mL培養(yǎng)液離心（5000 r/min，10 min），去除上層清液，沉淀用等量生理鹽水重懸，以生理鹽水為空白，在600 nm處測各組OD值，每個樣品重復(fù)測定3次。采用比濁度法，以O(shè)D600值（反映溶液中細菌總數(shù)）為評價指標比較各多糖對益生菌增殖的影響作用。

1.2.8 正交試驗優(yōu)化三種多糖的最佳配比

表1 LP、GP和JP復(fù)合正交試驗因素水平表Table 1 Factors level of orthogonal test for probiotic activity of LP, GP and JP

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，選擇10、20和30 mg/mL三個水平，以復(fù)合益生菌株在不同多糖配比下發(fā)酵48 h后的OD600值為考察指標，設(shè)計三因素三水平正交試驗優(yōu)化復(fù)合多糖最佳配比，試驗因素水平安排見表1。單因素試驗中得到多糖益生活性最佳濃度為30 mg/mL，確定復(fù)合多糖溶液最終濃度為30 mg/mL，培養(yǎng)方法及檢測指標參考1.2.7。

1.2.9 統(tǒng)計分析

每個試驗重復(fù)3次，通過SPSS 19.0.0軟件分析數(shù)據(jù)，并用Duncan檢驗比較組間差異，以不同小寫字母表示（p＜0.05）。結(jié)果以均數(shù)±標準差（ˉx±s）表示，采用Origin 9.0和Excel軟件制表作圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 多糖基本成分

3種多糖的得率、分子量和基本化學(xué)組成見表2。JP的得率最高為4.07%，LP和GP的得率分別為1.59%和1.84%，并無顯著性差異（p＞0.05）。3種原料多糖的得率與前人研究基本一致，如本課題組前期研究的龍眼多糖得率為1.06%～8.58%[20,21]，文獻報道枸杞多糖得率為0.35%～14.12%[22,23]，紅棗多糖得率為2.30%～8.01%[24,25]。多糖的得率與原料品種、來源，以及提取方式等都有密切關(guān)系。

LP和JP的純度相對較高，含有一個分子量峰，GP的純度相對較差，含有2個分子量峰[26]。3種多糖主峰分子量大小為：JP＞GP＞LP。3種多糖主要由中性糖和糖醛酸組成，含有少量的蛋白質(zhì)。三種多糖的中性糖含量為：LP＞JP＞GP，且均超過70%。GP的糖醛酸含量顯著高于LP和JP（p＜0.05），而JP的蛋白質(zhì)含量顯著高于LP和GP（p＜0.05）。

表2 LP、GP和JP的得率、分子量和化學(xué)成分Table 2 Yield, molecular weight and chemical composition of LP, GP and JP

2.2 多糖的單糖組成

LP、GP和JP的單糖組成見表3。3種多糖含有5種中性糖、2種糖醛酸，且均以中性糖為主。LP和GP的單糖組成比較相似，主要由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖組成，JP則主要由葡萄糖、半乳糖醛酸和阿拉伯糖組成。3種多糖中含量最高均為葡萄糖，其比例超過50%。3種多糖的單糖組成與前人報道的龍眼多糖、枸杞多糖和紅棗多糖的結(jié)果相似[27-29]。

表3 LP、GP和JP的單糖組成（摩爾比）Table 3 Monosaccharide composition of LP, GP and JP

2.3 多糖的紅外光譜

3種多糖的紅外光譜吸收峰見圖1。LP、GP和JP在3600～3200 cm-1均出現(xiàn)了強吸收峰，是糖類分子之間或分子內(nèi)的O-H伸縮振動峰[30]；2931 cm-1處的吸收峰為甲基或亞甲基C-H鍵伸縮振動吸收峰；1103 cm-1、1078 cm-1、1052 cm-1和1030 cm-1處的吸收峰是α型吡喃糖苷的C-O-C伸縮振動特征吸收峰[31]，由這三組糖類的特征峰可以判斷，LP、GP和JP是多糖。801 cm-1處的吸收峰由呋喃環(huán)的C-H變角振動引起的，865 cm-1和923 cm-1處的吸收峰表示含有呋喃糖環(huán)結(jié)構(gòu)。1614 cm-1、1420 cm-1為C=O伸縮振動特征吸收峰，表明羧基的存在；1261 cm-1處的吸收峰為羧基-COOH的O-H變角振動；1371 cm-1處的吸收峰是-COOH中C=O對稱伸縮振動引起的，表明3種多糖均為酸性多糖。紅外光譜結(jié)果表明3種含有典型的多糖結(jié)構(gòu)特征官能團，且均為酸性多糖，與其單糖組成結(jié)果一致。

圖1 LP、GP和JP的紅外光譜圖Fig.1 FT-IR spectra of LP, GP and JP

2.4 多糖的微觀形態(tài)

3種多糖不同放大倍數(shù)的掃描電鏡圖如圖2所示。3種多糖的微觀結(jié)構(gòu)有顯著差異。在低倍率下（×200），LP為碎片化聚集體；GP呈片狀，碎屑化堆積形態(tài)；JP則為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。在高倍率下（×20000），LP表面相對光滑，且有少量分散體纏繞；GP表面形貌呈干燥褶皺狀；JP表面光滑，有少量凹凸不平。

圖2 LP、GP和JP的掃描電鏡圖Fig.2 SEM images of LP, GP and JP

2.5 多糖的溶液特性

3種多糖的溶解性、粒徑、粒度分散指數(shù)（PDI）和Zeta電位結(jié)果見表4。三者的溶解性并無顯著性差異（p＞0.05），均在40 mg/mL以上。3種多糖的粒徑大小為：JP＞LP＞GP。PDI反映的是粒徑分布的均勻程度，PDI值越大表明分布越不均勻[21]。三種多糖的PDI大小為：GP＞LP＞JP，表明GP分布最不均勻。Zeta電位反映多糖在溶液中的帶電情況，其電位絕對值越大，表明其在溶液中越穩(wěn)定[32]。3種多糖的Zeta電位都是帶負電，表明其均為陰離子多糖；3種多糖電位的絕對值大小為：JP＞LP＞GP，表明JP最穩(wěn)定，GP最不穩(wěn)定。這與GP含有2個分子量峰結(jié)果一致，表明其不均勻性。

表4 LP、GP和JP溶解性、粒徑、粒度分散指數(shù)與Zeta電位Table 4 Solubility, particle size, particle size dispersion index and Zeta potential of LP, GP and JP

表5 各碳源對復(fù)合益生菌株增殖的影響Table 5 Effects of various carbon sources on the proliferation of compound probiotics

表6 各碳源對復(fù)合益生菌株產(chǎn)酸的影響Table 6 Effects of various carbon sources on acid production of compound probiotics

2.6 單一多糖的益生活性

3種多糖對復(fù)合益生菌株增殖作用的結(jié)果見表5。由此可知，3種多糖對復(fù)合益生菌株的增殖有促進作用。對于同一種多糖而言，隨著多糖濃度的增加，其培養(yǎng)基的OD600值呈增大的趨勢，說明多糖的增殖效果隨其濃度的增加而增加，在多糖濃度為30 mg/mL時增殖效果最好。對于不同多糖而言，在相同濃度下，各碳源培養(yǎng)基OD600值整體趨勢為：JP≈GP＞LP＞菊粉＞葡萄糖＞空白對照組（無碳源），但在低濃度下（1 mg/mL）JP組的OD600值高于GP組，在高濃度下（20和30 mg/mL）菊粉組和LP組的OD600值相當(dāng)，說明3種多糖對復(fù)合益生菌有顯著的促進增殖效果，其效果優(yōu)于菊粉和葡萄糖；JP和GP的益生活性相當(dāng)，均比龍眼多糖好。不同益生元的聚合度、單糖組成、支鏈結(jié)構(gòu)都會對其益生活性產(chǎn)生影響[33]，3種多糖因其理化特性不同，因而表現(xiàn)出不同的益生活性。

糖類物質(zhì)可被益生菌作為碳源酵解利用，代謝產(chǎn)生乙酸、丙酸、丁酸等短鏈脂肪酸以及乳酸等，這些有機酸會導(dǎo)致培養(yǎng)基pH降低，因此，可以通過測定培養(yǎng)基pH值間接判斷益生菌生長狀況。從表6可以看出，對于同一種多糖而言，隨著其濃度增加，液體培養(yǎng)基的pH值顯著減小，在30 mg/mL的添加量下pH值達到最小。對于不同多糖而言，在相同濃度下，3種多糖培養(yǎng)基pH值大小為JP＜GP＜LP，這與OD600值的變化結(jié)果相符。菊粉組和LP組在實驗濃度范圍內(nèi)各濃度下pH值都無顯著性差異。葡萄糖組pH值是所有碳源組中最高的。Ji等[34]推測多糖的單糖組成影響其被腸道微生物酵解利用，如多糖中的阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、鼠李糖和甘露糖等單糖更容易被腸道微生物利用；本課題組研究發(fā)現(xiàn)多糖中的葡萄糖的相對含量越高，其益生活性越強；具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的多糖，更易于被微生物分泌的碳水化合物活性酶分解利用[35,36]，這與本研究的結(jié)果一致。

2.7 三種多糖的最佳配比

正交試驗優(yōu)化LP、GP和JP復(fù)合配比的結(jié)果及方差分析見表7和表8。由表7可見，3種多糖對復(fù)合益生菌增殖的影響大小為LP＞JP＞GP，復(fù)合多糖的最佳配方為A2B3C1，即LP:GP:JP=2:3:1，該最佳配比形成的復(fù)合多糖作用于復(fù)合益生菌48 h后，其OD600值最大為3.29。在表8方差分析中，LP對OD600值影響極其顯著（p＜0.01），因素JP對OD600值影響不顯著（p＞0.05），因素GP可歸為誤差，這與極差分析的因素主次結(jié)果一致。

進一步比較最佳配比形成的復(fù)合多糖與各單一多糖在相同濃度下對復(fù)合益生菌增殖和pH的影響，結(jié)果如圖3所示，在30 mg/mL的濃度水平上，復(fù)合多糖促進復(fù)合益生菌株增殖的效果顯著高于單一多糖及葡萄糖和菊粉對照組（p＜0.05），其對應(yīng)培養(yǎng)基的pH值顯著低于單一多糖和其他對照組（p＜0.05）。由此表明，LP、GP和JP多糖經(jīng)復(fù)合后，具有顯著的協(xié)同益生增效作用。分析3種多糖具有協(xié)同增效的原因，可能與其結(jié)構(gòu)以及對不同益生菌的影響不同有關(guān)。前人研究報道龍眼多糖能促進發(fā)酵乳桿菌、干酪乳桿菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌等益生菌增殖表現(xiàn)出益生活性[35]，而枸杞多糖可顯著促進長雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、德氏乳酸桿菌保加利亞亞種等益生菌增殖[14,37]，紅棗多糖則促進發(fā)酵乳酸菌和雙歧桿菌等益生菌增殖[38,39]。由此可見，3種多糖對不同益生菌的影響效果是不同的，因此3種多糖的復(fù)合多糖對復(fù)合益生菌的促增殖效果會顯著強于單一多糖。

表7 試驗方案和極差分析結(jié)果Table 7 Test scheme and range analysis results

表8 正交試驗的方差分析表Table 8 Variance analysis table of probiotic activity

圖3 各碳源對復(fù)合益生菌株增殖（a）和產(chǎn)酸（b）的影響Fig.3 Effects of various carbon sources on the proliferation (a) and acid production (b) of the compound probiotics

3 結(jié)論

比較龍眼多糖、枸杞多糖和紅棗多糖的理化性質(zhì)和益生活性差異，發(fā)現(xiàn)紅棗多糖得率最高、分子量最大；枸杞多糖的中性糖含量最低、糖醛酸含量最高；龍眼多糖的分子量最小、中性糖含量最高；3種多糖的微觀結(jié)構(gòu)有顯著差異，枸杞多糖在溶液中最不穩(wěn)定、紅棗多糖最穩(wěn)定；3種多糖單獨作用時均能顯著促進益生菌增殖，經(jīng)復(fù)配后其益生活性顯著增強，最佳的復(fù)配比為龍眼多糖:枸杞多糖:紅棗多糖=2:3:1。有關(guān)三種多糖協(xié)同作用的機理有待進一步研究。本研究可豐富植物活性多糖的理論基礎(chǔ)，又可為龍眼、枸杞、紅棗的精深加工提供理論依據(jù)。