曾 琴，聶敏海

(西南醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院，四川 瀘州 646000)

Src家族激酶(Src family kinases，SFKs)是一組細(xì)胞內(nèi)的非受體酪氨酸激酶，參與細(xì)胞增殖、分化、遷移、侵襲及血管形成等多種細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)控[1]。Scr是SFKs核心家族成員。在正常組織中，Src激酶是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中心，協(xié)調(diào)細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外刺激的反應(yīng)。Src作為表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)、血小板衍生生長因子受體(platelet-derived growth factor receptor，PDGFR)和成纖維細(xì)胞生長因子受體(fibroblast growth factor receptors，F(xiàn)GFR)等多種生長因子受體的配體，能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用[2]。腫瘤細(xì)胞可以通過Src激酶異?；罨虮磉_(dá)失調(diào)影響正常細(xì)胞生長過程，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移[3]。有研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌、肺癌等多種腫瘤組織中Src激酶處于異常活化狀態(tài)[4]。本文就近年來Src激酶在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用進(jìn)行綜述，以期進(jìn)一步探索腫瘤發(fā)生、發(fā)展的作用機(jī)制，為腫瘤的靶向藥物治療提供參考。

1 SFKs結(jié)構(gòu)與活化

目前發(fā)現(xiàn)SFKs有11個(gè)家族成員，包括Blk、Brk、Fgr、Frk、Fyn、Hck、Lck、Lyn、c-Src、Srm、Yes[1]。SFKs由Src同源結(jié)構(gòu)域(Src homology，SH)-1、SH-2、SH-3、SH-4組成。SH-1是SFKs的酶結(jié)構(gòu)域，具有內(nèi)在酪氨酸激酶活性。SH-2是一種蛋白基序，可與磷酸化酪氨酸位點(diǎn)相結(jié)合。SH-3使Src激酶與富含脯氨酸肽序列和其他疏水氨基酸的蛋白結(jié)合形成Src復(fù)合物[4]。SH-2和SH-3促進(jìn)Src激酶與其形成復(fù)合物的蛋白質(zhì)分子間相互作用。SH-4是每個(gè)SFKs家族成員特有的區(qū)域[4]。SH-1、SH-2、SH-3、SH-4結(jié)構(gòu)域參與多個(gè)信號(hào)復(fù)合物的形成，并通過分子間的相互作用調(diào)節(jié)SFKs活性。c-Src激酶活性和構(gòu)象的變化可能受多種因素的影響，如SH-2和SH-3結(jié)合配體、催化結(jié)構(gòu)域的激活或Y530末端區(qū)域的去磷酸化等。Src激酶的活性可以被多種機(jī)制調(diào)節(jié)，包括共價(jià)修飾、異構(gòu)調(diào)節(jié)，在共價(jià)修飾中Src激酶的Tyr530位點(diǎn)和Tyr419位點(diǎn)的磷酸化在Src激酶活性調(diào)節(jié)中起主要作用[5]。Src激酶是激活細(xì)胞原癌基因信號(hào)的關(guān)鍵介質(zhì)，80%以上的結(jié)直腸癌患者的癌組織中Src激酶呈過度表達(dá)，因此，調(diào)節(jié)Src激酶的穩(wěn)定性和活性對(duì)結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展至關(guān)重要[6]。

2 Src激酶與腫瘤細(xì)胞侵襲

侵襲是指腫瘤細(xì)胞通過基質(zhì)屏障(如基底膜)以及組織隔室、血管、神經(jīng)周圍間隙和器官邊界的移位，是腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的必要前提。侵襲過程依賴于2個(gè)方面：一是細(xì)胞運(yùn)動(dòng)或遷移能力增加，二是細(xì)胞外基質(zhì)(extra cellular matrix，ECM)降解。體外研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞的侵襲與細(xì)胞外膜突起的形成有關(guān)，其主要機(jī)制是細(xì)胞外膜突起可以降解ECM[7]?；罨腟rc激酶能夠促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)的表達(dá)及EMC的降解的；還可以通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞膜的結(jié)合破壞細(xì)胞基底膜，使細(xì)胞突破基底膜發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。Src激酶對(duì)E-鈣黏蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞黏附具有動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)作用，Src激酶活性增加不僅可使腫瘤細(xì)胞間黏附降低甚至消失，還能介導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加，促使腫瘤細(xì)胞外滲，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移?；罨腟rc激酶通過促進(jìn)黏著斑激酶、鈣黏蛋白和連環(huán)蛋白等蛋白的再分布而破壞細(xì)胞間連接。研究表明，體內(nèi)Src激酶抑制劑可以阻止E-鈣黏蛋白下調(diào)，使細(xì)胞間黏附處于穩(wěn)定狀態(tài)，從而抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲[8]。研究發(fā)現(xiàn)，Src激酶可通過磷酸化線粒體單鏈DNA結(jié)合蛋白，使三陰性乳腺癌更具侵襲性[9]。另外，Src激酶可以通過溶酶體酶組織蛋白酶S和MMP-9的協(xié)同作用來抑制三陰性乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，這為乳腺癌的治療提供了一種新的策略[10]。因此，Src激酶可能是通過增加MMP 表達(dá)、降解ECM、下調(diào)E-鈣黏蛋白、破壞細(xì)胞間黏連來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲。王道鑫等[11]研究發(fā)現(xiàn)，Src激酶抑制劑PP2可通過調(diào)控縫隙連接蛋白43的表達(dá)來抑制肺癌A549細(xì)胞的侵襲。

3 Src激酶與腫瘤細(xì)胞的遷移

腫瘤從早期發(fā)展至晚期的過程包括腫瘤細(xì)胞的生長(細(xì)胞增殖)和腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(細(xì)胞遷移)。轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的多步驟過程，包括腫瘤細(xì)胞基質(zhì)和細(xì)胞黏附喪失，腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞的內(nèi)滲、侵襲、外滲及遠(yuǎn)離原發(fā)腫瘤在其他部位的種植等。Src激酶通過控制細(xì)胞基質(zhì)的黏附和MMP的活化，促進(jìn)實(shí)體腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)，在前列腺癌轉(zhuǎn)移中Src激酶呈異常高表達(dá)，推測(cè)其可能機(jī)制是活化的Src激酶增強(qiáng)了遷移、侵襲、血管生成等細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力，調(diào)節(jié)了肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[12]。Src激酶對(duì)FAK的調(diào)節(jié)主要通過與整合素、RhoA和FAK直接相互作用。Src激酶介導(dǎo)的RhoA失活阻斷了肌動(dòng)蛋白的應(yīng)力纖維，從而降低黏著斑的穩(wěn)定性，促進(jìn)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)。侵襲足是一種富含肌動(dòng)蛋白的癌細(xì)胞動(dòng)態(tài)膜突起，在v-Src細(xì)胞中被首次發(fā)現(xiàn)[13]，其通過快速形成肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架、細(xì)胞黏附結(jié)構(gòu)和分泌ECM降解酶及MMP而發(fā)揮ECM黏附性和降解能力。皮層蛋白是一種細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)因子，最初在Src激酶轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。皮層蛋白作為Src激酶的一種底物，在細(xì)胞遷移的前緣，可能對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架中肌動(dòng)蛋白絲的重組起著一定的作用[14]。MMP的表達(dá)上調(diào)不僅可以增強(qiáng)肺和乳腺纖維化，還可以促進(jìn)癌癥中上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的發(fā)生，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[15]。蔣國軍等[16]發(fā)現(xiàn)，Src激酶在乳腺癌對(duì)阿奇霉素產(chǎn)生耐藥體外實(shí)驗(yàn)中呈異常激活,當(dāng)Src激酶活性受到抑制時(shí)，乳腺癌細(xì)胞 MCF-7/ADM的侵襲、轉(zhuǎn)移能力降低。說明Src激酶抑制劑可抑制腫瘤細(xì)胞的遷移。

4 Src激酶對(duì)腫瘤血管的影響

Src激酶是VEGF信號(hào)傳導(dǎo)通路下游所必需的信號(hào)傳導(dǎo)蛋白，對(duì)血管生成和保護(hù)均有調(diào)節(jié)作用[17]。Src激酶的表達(dá)或活化異常已被證明可以促進(jìn)血液系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[17]。而血液可為腫瘤細(xì)胞提供足夠的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，使其發(fā)生增殖和轉(zhuǎn)移。在實(shí)體腫瘤的低氧區(qū)，Src激酶活性增加，通過增強(qiáng)低氧誘導(dǎo)因子-1a和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3的轉(zhuǎn)錄活性，誘導(dǎo)VEGF表達(dá)而促進(jìn)血管生成。除促血管生成作用外，內(nèi)皮細(xì)胞中SFKs的激活還增加了血管通透性，這是腫瘤細(xì)胞營養(yǎng)供給和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵過程。SFKs通過重排肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架和內(nèi)皮細(xì)胞中的黏附連接來促進(jìn)細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變，而這些黏附連接通過改變血管結(jié)構(gòu)而產(chǎn)生細(xì)胞間隙。腫瘤細(xì)胞可以在血行擴(kuò)散、血管內(nèi)滲和外滲過程中利用細(xì)胞間隙進(jìn)入血液循環(huán)。HU等[18]研究表明，Src家族蛋白酪氨酸激酶的活化是破壞內(nèi)皮屏障和誘導(dǎo)血管通透性的關(guān)鍵。在內(nèi)皮細(xì)胞中，VEGF與VEGF受體2的結(jié)合增加了細(xì)胞的有絲分裂、趨化和高通透性，使血管發(fā)生滲漏。由黏附連接和緊密連接組成的連接復(fù)合物對(duì)維持內(nèi)皮細(xì)胞屏障完整性有著重要作用[19]。血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-cadherin)通過鈣黏蛋白家族為細(xì)胞間提供分子鍵，并將質(zhì)膜與細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架連接起來，導(dǎo)致Src激酶活化和VE-cadherin最終磷酸化，使所有連接的復(fù)合蛋白解離，從而破壞內(nèi)皮屏障[19]。Src激酶介導(dǎo)的Tyr685磷酸化對(duì)VEGF誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞遷移和腫瘤血管生成的調(diào)控也至關(guān)重要。Src激酶介導(dǎo)VEGF、MMPs及白細(xì)胞介素-8的表達(dá)，并通過破骨細(xì)胞的活化促進(jìn)血管生成和骨轉(zhuǎn)移[20]。最近的一項(xiàng)研究表明，辣椒酸酯是一種類似辣椒素的化合物，對(duì)VEGF誘導(dǎo)的c-Src活化和下游信號(hào)分子磷酸化有直接的抑制作用，從而抑制VEGF誘導(dǎo)的血管生成和降低血管通透性。目前，Src激酶抑制劑達(dá)沙替尼被認(rèn)為是治療慢性粒細(xì)胞白血病的有效藥物[21]。

5 Src激酶在EMT中的作用

EMT具有多潛能干細(xì)胞特征，參與發(fā)育器官組織結(jié)構(gòu)的形成和細(xì)胞分化，在胚胎發(fā)育過程中起重要作用[22]。EMT表現(xiàn)為細(xì)胞失去上皮細(xì)胞特性，包括細(xì)胞極性消失、細(xì)胞間連接蛋白下調(diào)等，具有間充質(zhì)細(xì)胞特性，可使細(xì)胞形態(tài)變?yōu)樗笮?，增?qiáng)細(xì)胞遷移及侵襲能力[23]。上皮性癌細(xì)胞具有間充質(zhì)特性，使其能夠從原發(fā)腫瘤侵襲到其他正常組織。間充質(zhì)細(xì)胞具有高度的移動(dòng)性和侵襲性，可以使腫瘤細(xì)胞發(fā)生局部侵襲，這是腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要前提。由于上皮細(xì)胞通常在脫離基底層時(shí)發(fā)生失巢凋亡，而間充質(zhì)細(xì)胞不會(huì)發(fā)生凋亡，EMT可促進(jìn)癌細(xì)胞的生存[24]，因此，EMT是腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的早期步驟之一。腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT后，可誘導(dǎo)腫瘤血管生成，并經(jīng)過增殖、脫離、遷移、侵襲和黏附，分泌各種腫瘤衍生因子，從而建立一個(gè)利于其生長的新環(huán)境，促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。正常上皮細(xì)胞與基底膜有一定接觸，可以依靠E-鈣黏蛋白、β-連環(huán)蛋白來穩(wěn)定細(xì)胞間黏附，使細(xì)胞以強(qiáng)黏聚的多細(xì)胞結(jié)構(gòu)連接在一起。Src激酶可以抑制E-鈣黏蛋白的黏附能力，降低細(xì)胞間的黏附力，從而促進(jìn)EMT的發(fā)生，增加細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移能力[25]。譚琪[26]研究發(fā)現(xiàn)，SliT2-Robo1信號(hào)通過活化Src激酶誘導(dǎo)E-鈣黏蛋白磷酸化，經(jīng)Hakai泛素化、降解后，誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中可以發(fā)現(xiàn)EMT標(biāo)志物，如E-鈣黏蛋白和波形蛋白，Src激酶活性增加使E-鈣黏蛋白表達(dá)下調(diào)，波形蛋白表達(dá)增加，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲[27]。在小葉性乳腺癌中Src激酶活性增加與間充質(zhì)標(biāo)志物波形蛋白和N-鈣黏素的上調(diào)及與腫瘤細(xì)胞的侵襲進(jìn)展有關(guān)，提示腫瘤細(xì)胞侵襲性的獲得需要EMT的介導(dǎo)[28]。E-鈣黏蛋白和β-連環(huán)蛋白在正常胰腺細(xì)胞中呈高表達(dá)，N-鈣黏蛋白和波形蛋白在正常胰腺細(xì)胞中則呈低表達(dá)，在胰腺腫瘤細(xì)胞中可以發(fā)現(xiàn)N-鈣黏蛋白和波形蛋白表達(dá)增高，由此可見EMT與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[29]。

綜上所述，Src激酶參與腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移、血管生成及EMT過程，促進(jìn)腫瘤的生長和發(fā)展。雖然在肺癌、前列腺癌、胰腺癌等大多數(shù)腫瘤中均可以發(fā)現(xiàn)Src激酶異常活化或表達(dá)，由此推測(cè) Src激酶可能是預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移的潛在有效靶點(diǎn)，但是具體由哪種蛋白、因子或哪條通路導(dǎo)致Src激酶表達(dá)失調(diào)還有待于進(jìn)一步研究。