陳美任

嘉應(yīng)學院醫(yī)學院附屬醫(yī)院檢驗科，廣東梅州 514000

肺癌是指原發(fā)于氣管、 支氣管和肺的惡性腫瘤，該病發(fā)病率和死亡率有逐年上升的趨勢，主要包括鱗癌、腺癌、小細胞癌和大細胞癌這幾種主要類型，其中非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）約占80%以上[1]。由于肺癌早期癥狀不明顯，確診時多為中晚期，增加了治療難度和患者死亡率。在腫瘤發(fā)病早期，機體免疫系統(tǒng)就可識別腫瘤相關(guān)抗原，從而激活機體免疫反應(yīng)產(chǎn)生抗體，稱為腫瘤相關(guān)自身抗體[2]。近年來，多項腫瘤相關(guān)抗原自身抗體（tumor associated autoantibodies，TAAB）聯(lián)用在肺癌、乳腺癌等腫瘤得到應(yīng)用。本研究聯(lián)用7 項TAAB 包括抑癌基因53（p53 Tumor Suppressor，p53）、神經(jīng)元胞質(zhì)蛋白基因產(chǎn)物（protein gene product 9.5，PGP9.5）、性別決定區(qū)Y框蛋白2（sex determining region Y-box 2，SOX2）、G抗原7（G antigen 7，GAGE7）、腫瘤抗原4-5（GBU4-5）、人癌抗原（cancer associated gene，CAGE）和黑色素瘤抗原A1（melanoma antigen 1，MAGE A1）來評估其在NSCLC 臨床診斷中的效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至2020年7月于嘉應(yīng)學院醫(yī)學院附屬醫(yī)院行肺癌根治術(shù)的初治NSCLC 患者57例為研究對象，并設(shè)為NSCLC 組。納入標準：①首次確診為非小細胞肺癌，且符合第8 版肺癌TNM 分期標準[3]；②均接受肺癌根治術(shù)治療；③配合相關(guān)指標檢測及臨床資料完善。排除標準：①復發(fā)、轉(zhuǎn)移癌或合并其它腫瘤病史；②合并自身免疫性疾病者；③診斷為多種腫瘤者；④有化療史及服用過靶向藥物者。NSCLC組中，男31 例，女26 例；年齡58～75 歲，平均（63.54±3.24）歲；腫瘤分類：鱗癌19 例，腺癌25 例，其它13例；臨床分期：Ⅳ期16 例，Ⅲ期9 例，Ⅱ期4 例，Ⅰ期28例；腫瘤直徑：＞3 cm 24 例，≤3 cm 18 例，無法評估15例。排除。選擇同期入院的52 例肺部良性疾病者作為良性組，選擇同期入院的58 名健康人群設(shè)置為健康組。良性組中，男28 例，女24 例；年齡55～75 歲，平均（63.43±3.45）歲；肺部疾病包括肺炎41 例，肺氣腫5 例，支氣管炎6 例。健康組中，男31 例，女27 例，年齡54～73歲，平均（63.33±3.49）歲。三組的性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審批通過。

1.2 方法

①采集所有NSCLC 患者肺部根治術(shù)前清晨空腹靜脈血4 ml，良性組患者于入院檢查時采集，健康組患者于體檢時采集。室溫靜置30 min 后取血清，于4℃、1000 r/min 離心10 min 中離心處理，離心半徑13.5 cm，分裝置于-80℃待檢測使用。②使用ELISA檢測7 項腫瘤相關(guān)自身抗體，分別為p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1。將血清樣本及試劑置于室溫，選用7 種自身抗體譜檢測試劑盒進行ELISA 檢測，按照試劑盒說明書進行相關(guān)操作，使用美國伯樂iMark 酶標儀在450 nm 處讀取吸光度值。做受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curves，ROC） 分析7 種腫瘤相關(guān)自身抗體診斷肺癌的價值，根據(jù)最大約登指數(shù)確定各自診斷臨界值，如果血清腫瘤相關(guān)自身抗體的檢測濃度低于診斷臨界值即為陰性，否則為陽性。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較進行LSD-t 檢驗； 采用ROC 曲線分析多種腫瘤相關(guān)自身抗體在非小細胞肺癌中的聯(lián)合診斷效果，曲線下面積越大，表示其診斷價值越高，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三組患者腫瘤相關(guān)自身抗體水平比較

NSCLC 組的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1 水平均高于良性組和健康組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。良性組和健康組的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE、MAGE A1 水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）（表1）。

表1 三組患者腫瘤相關(guān)自身抗體水平比較（U/ml，±s）

表1 三組患者腫瘤相關(guān)自身抗體水平比較（U/ml，±s）

與良性組比較，aP＜0.05；與健康組比較，bP＜0.05

組別 例數(shù) p53 PGP9.5 SOX2 GAGE7 GBU4-5 GAGE MAGE A1 NSCLC 組良性組健康組F 值P 值57 52 58 2.26±0.53ab 1.23±0.33 1.18±0.24 178.909＜0.001 13.51±4.26ab 9.64±2.54 9.33±2.01 27.373＜0.001 13.51±4.26ab 9.64±2.54 9.33±2.01 27.373＜0.001 15.31±5.19ab 13.16±4.31 12.82±4.06 4.996 0.008 8.03±2.84ab 6.27±2.34 6.02±1.87 11.996＜0.001 10.36±3.63ab 8.14±2.65 6.89±2.66 19.363＜0.001 7.64±2.14ab 6.58±2.61 6.31±2.31 5.082 0.007

2.2 多種腫瘤相關(guān)自身抗體單獨診斷NSCLC 的ROC 曲線結(jié)果

p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1 單獨診斷NSCLC 的曲線下面積均＞0.6（P＜0.05），均有一定診斷價值，根據(jù)最大約登指數(shù)確定診斷臨界值分別為1.57 U/ml、12.92 U/ml、12.67 U/ml、14.64 U/ml、8.45 U/ml、8.23 U/ml、7.68 U/ml，單獨診斷p53 敏感度最高達91.20%，其次為GAGE 達68.40%，GP 9.5 和GAGE7 均為59.60%（表2、圖1，封3）。

表2 多種腫瘤相關(guān)自身抗體單獨診斷NSCLC 的ROC 曲線結(jié)果

圖1 多種腫瘤相關(guān)自身抗體單獨診斷NSCLC 的ROC 曲線圖

3 討論

由于肺癌早期癥狀不明顯，不易被發(fā)現(xiàn)，約80%患者確診時已到肺癌中、晚期，不僅治療難度大，而且預后不良，極易出現(xiàn)復發(fā)及癌細胞轉(zhuǎn)移，因而中晚期肺癌患者死亡率極高。早發(fā)現(xiàn)、早確診、早治療是控制肺癌的有效手段[4-5]。目前，肺癌的早期篩查手段有限，主要依靠低劑量計算機斷層掃描（low-dose computed tomography，LDCT） 和癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）、細胞角蛋白19 抗原片段（cytokeratin 19 fragment 21-1，CYFRA21-1）和鱗狀上皮細胞癌抗原等腫瘤標志物抗原聯(lián)合診斷進行篩查，雖然LDCT 敏感度高，但假陽性率也相對較高，對篩查良性和惡性肺部腫瘤具有一定局限性，因而臨床應(yīng)用也受到了一定限制。腫瘤標志物抗原聯(lián)合診斷易受非病理因素，敏感度和特異度均無法滿足臨床診斷的需求[6-7]。

相關(guān)研究[8]顯示，癌癥發(fā)病早期，機體內(nèi)腫瘤相關(guān)抗原發(fā)生表達、突變等一系列改變，從而引起機體自身反應(yīng)性免疫應(yīng)答，刺激B 細胞產(chǎn)生腫瘤相關(guān)自身抗體，少量機體內(nèi)腫瘤相關(guān)抗原即可促使機體產(chǎn)生大量腫瘤相關(guān)自身抗體。相比于抗原，抗體具有半衰期長、含量高且穩(wěn)定等優(yōu)越性，因而在臨床診斷應(yīng)用價值更高。有研究[9]表明，腫瘤自身相關(guān)抗體可早在癥狀出現(xiàn)數(shù)年前于患者血清中檢測出來，這大大提高了肺癌早期診斷的可能。目前，還未發(fā)現(xiàn)有單一腫瘤自身相關(guān)抗體可滿足肺癌診斷的敏感度和特異度，本研究結(jié)果顯示，NSCLC 組的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1 水平均高于良性組和健康組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），因而本研究選取7 種與腫瘤相關(guān)的自身抗體檢測以提高肺癌診斷的準確性。國外有相關(guān)研究[10]表明，聯(lián)用p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1 這7 項自身抗體在肺癌的診斷中敏感度和特異度可以達到76%和92%，敏感度和特異度均相對較高。研究[11]發(fā)現(xiàn)，p53是迄今為止與人類腫瘤相關(guān)性最高的基因，可劃分為野生型和突變型，突變型p53 對癌癥的發(fā)生和發(fā)展有促進作用。在肺癌中，p53 是發(fā)生率最高的DNA 序列改變，p53 通過基因突變，半衰期從20 min 延長至幾小時，并造成細胞內(nèi)蛋白產(chǎn)物堆積，促使機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答[12]；PGP9.5 是一類蛋白水解酶，在癌癥的發(fā)生過程中，PGP9.5 誘導細胞周期蛋白泛素化上調(diào)，致使細胞生長失控，有研究者通過基因表達系列分析法發(fā)現(xiàn)PGP9.5 在肺癌早期高表達，且與肺癌進展關(guān)系特殊，因而可作為肺癌早期診斷的標志[13]；SOX2 的主要作用包括參與胚胎早期發(fā)育、 維持干細胞全能性、參與神經(jīng)發(fā)育等，近年來，SOX2 被發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤中高表達，因而SOX2 相關(guān)抗體可作為肺癌鑒別診斷中的一項指標[14]；GAGE7 和GBU4-5 在肺癌組織中的作用較為局限，但各種試驗可檢測出其在早期肺癌中的高表達，因而可作為聯(lián)合診斷的一項指標；隨著腫瘤免疫治療在腫瘤治療中應(yīng)用越來越廣泛，GAGE 作為最具免疫原性的腫瘤抗原也受到了極大的關(guān)注；MAGE A1 是目前應(yīng)用前景較好的腫瘤標志物，尤其在鑒別良惡性肺結(jié)節(jié)方面[15-18]。由于本研究樣本量有限，未對診斷效能尚可的相關(guān)聯(lián)合診斷效能進行深入分析，相關(guān)結(jié)論及相關(guān)抗體聯(lián)合診斷效能有待進一步研究和證實。

綜上所述，7 項腫瘤相關(guān)自身抗體對NSCLC 的診斷具有重要的臨床意義和應(yīng)用價值。