次曉娟

（豐鎮(zhèn)市檢驗(yàn)檢測(cè)中心，內(nèi)蒙古烏蘭察布 012199）

脫氫乙酸是一種新型的化學(xué)防腐劑，自20世紀(jì)中葉發(fā)現(xiàn)它具有抗菌性以來，已被許多國家作為防腐劑，屬廣譜類防腐劑，安全性和穩(wěn)定性高，抑制酵母菌、霉菌和細(xì)菌的繁殖作用極強(qiáng)。戴有金[1]利用脫氫乙酸鈉對(duì)大小鼠進(jìn)行經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)，得出脫氫乙酸若使用不當(dāng)，會(huì)對(duì)人的身體健康產(chǎn)生威脅的結(jié)論，WHO將脫氫乙酸列入低毒級(jí)別進(jìn)行管控。我國規(guī)定脫氫乙酸鈉在腌漬蔬菜和淀粉制品中限量是1.0 g/kg，黃油、糕點(diǎn)、肉制品等其他幾類產(chǎn)品中規(guī)定添加量不得超過0.3～0.5 g/kg[2]。檢測(cè)脫氫乙酸的含量要求要準(zhǔn)確且高效，檢測(cè)機(jī)構(gòu)常將氣相色譜法和液相色譜法作為常用方法使用，再以其他方法作為輔助檢測(cè)方法。

1 氣相色譜法

氣相色譜法為GB 5009.121—2016[3]的第一法，基本原理為固體（半固體）樣品，沉降蛋白，經(jīng)脫脂酸化后，用乙酸乙酯提取。如果蔬汁、果蔬漿樣品經(jīng)酸化后，采用乙酸乙酯提取，F(xiàn)ID檢測(cè)器測(cè)定，以色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量，但該方法中推薦的檢測(cè)條件，并不是最優(yōu)條件。

在樣品的前處理環(huán)節(jié)上，劉煒等[4]發(fā)現(xiàn)一般生產(chǎn)時(shí)添加的防腐劑是脫氫乙酸鈉，加鹽酸酸化后，形成脫氫乙酸，極性減弱，較易被弱極性的乙醚提取，加入酸性氯化鈉后，由于鹽析作用，會(huì)使乙醚層中的微量水盡可能釋放出來，促進(jìn)分層。經(jīng)過兩次25 mL乙醚萃取，脫氫乙酸能完全萃取，該方法的回收率在87.6%～97.9%，RSD在0.8%～3.7%，該方法結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性良好。

在色譜條件上，朱自德等[5]將GB 5009.121—2016中建議的極性毛細(xì)管柱換成弱極性毛細(xì)管柱DB-5，最佳升溫程序?yàn)槌跏紲囟?0 ℃，以12 ℃/min速率升至210 ℃，再以25 ℃/min速率升至240 ℃，保持4 min，適宜采用分流比為10∶1。中高低3個(gè)梯度的加標(biāo)回收率均在90%～100%，該方法測(cè)得結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

以上研究針對(duì)國標(biāo)中氣相色譜法檢測(cè)的不足之處進(jìn)行方法研究和改進(jìn)，通過優(yōu)化色譜條件和前處理方法，探索出簡便、快捷和高效，且使用樣品基質(zhì)范圍較廣的檢測(cè)方法。

2 液相色譜法

液相色譜法為GB 5009.121—2016的第二法，基本原理是試樣中的脫氫乙酸經(jīng)氫氧化鈉溶液提取后，再進(jìn)行脫脂、脫蛋白等處理，用PDA檢測(cè)器測(cè)定，依據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

在樣品的前處理環(huán)節(jié)上，富含蛋白質(zhì)的樣品在前處理過程中很難通過濾膜，脫氫乙酸難溶解于水，用常規(guī)方法，將亞鐵氰化鉀和乙酸鋅加入后，雜質(zhì)和脫氫乙酸均被沉淀，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性被降低。鄧迎春[6]等先用硫酸鋅（0.4 mol/L）和氫氧化鈉（0.5 mol/L）將溶液調(diào)為堿性，將脫氫乙酸變?yōu)殁c鹽，使之更易溶于水，再分別用甲醇和硫酸鋅及氫氧化鈉完成蛋白沉淀和進(jìn)一步去除蛋白的任務(wù)，檢測(cè)準(zhǔn)確性有所提高。

吳寧寧[7]等發(fā)現(xiàn)，按照GB 5009.121—2016提供色液相條件進(jìn)行檢測(cè)，色譜峰拖尾嚴(yán)重。原因在于脫氫乙酸的羰基結(jié)構(gòu)易與C18柱中的硅羥基結(jié)構(gòu)發(fā)生反應(yīng)，形成氫鍵，可通過改變流動(dòng)相的pH來確定合適的流動(dòng)相及其比例。以甲醇+0.1%磷酸水溶液（55+45）為流動(dòng)相的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定發(fā)現(xiàn)，回收率在90%以上，線性相關(guān)系數(shù)、重復(fù)性等均良好，且色譜峰拖尾明顯改善。

以上研究在國標(biāo)中液相色譜法的基礎(chǔ)上對(duì)樣品的前處理及色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，將前處理過程簡單化，色譜條件中對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了調(diào)整，優(yōu)化后的檢測(cè)方法更加快捷、準(zhǔn)確，可在某些食品檢測(cè)系統(tǒng)中推廣應(yīng)用。

3 其他檢測(cè)方法

除以上兩種色譜檢測(cè)方法外，常用的還有利用紫外分光光度法測(cè)定脫氫乙酸的含量。陳丹萍[8]將樣品中脫氫乙酸在酸性條件下經(jīng)水蒸氣和有機(jī)溶劑萃取后，用紫外分光光度計(jì)在308 nm波長處測(cè)定吸光度。結(jié)果顯示脫氫乙酸加標(biāo)回收率為94.1%～103.7%，精密度在0.4%～4.7%。趙舒景[9]采用293 nm為檢測(cè)波長，將樣品加蛋白質(zhì)沉淀劑硫酸鋅溶液（0.42 mol/L）和氫氧化鈉溶液（20 g/L）后離心用上清液上機(jī)檢測(cè)，這種前處理方法簡單、省時(shí)，檢測(cè)脫氫乙酸加標(biāo)回收率為94.9%～99.0%。肖樹秀[10]同樣采用293 nm為檢測(cè)波長，經(jīng)去蛋白、離心后，取上清液上機(jī)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)回收率為97.2%。

該方法操作簡單，儀器設(shè)備投入較小，檢測(cè)成本低，適用于簡單基質(zhì)的樣品。隨著人們物質(zhì)生活的提升，送檢的樣品基質(zhì)愈發(fā)復(fù)雜，存在雜質(zhì)會(huì)影響吸光度，進(jìn)而對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性存在較大影響。紫外分光光度法的適用范圍有限，適用于基層檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)，可作為國標(biāo)方法的補(bǔ)充。

4 結(jié)語

目前，脫氫乙酸的檢測(cè)方法以氣相色譜法和液相色譜法為主，面對(duì)復(fù)雜的送檢基質(zhì)，可通過改進(jìn)前處理方法，優(yōu)化檢測(cè)條件等措施，建立適應(yīng)于市場(chǎng)的檢測(cè)方法，為食品安全監(jiān)管提供技術(shù)支持。