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        抗SSA、SSB和CENP-B抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡及干燥綜合征的發(fā)生率及濃度分析

        2021-11-24 02:54:30楊為斌王江平梅麗萍蔡望喜武漢市普仁醫(yī)院檢驗(yàn)科武漢43008湖北中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院湖北省中醫(yī)院檢驗(yàn)科武漢43006
        臨床檢驗(yàn)雜志 2021年10期
        關(guān)鍵詞:符合率抗原抗體

        楊為斌,王江平,梅麗萍,蔡望喜(.武漢市普仁醫(yī)院檢驗(yàn)科,武漢43008;.湖北中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 湖北省中醫(yī)院檢驗(yàn)科,武漢43006)

        以系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)和干燥綜合征(Sj?gren′s syndrome,SS)等為代表的自身免疫病(autoimmune disease,AID)在我國(guó)的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。抗干燥綜合征抗原A(Sj?gren′s syndrome antigen A,SSA)抗體、抗干燥綜合征抗原B(Sj?gren′s syndrome antigen B,SSB)抗體和抗著絲點(diǎn)蛋白B(centromere protein B,CENP-B)抗體對(duì)于AID的臨床診斷發(fā)揮重要作用。其中,抗SSA和SSB抗體是SS患者中常見(jiàn)的自身抗體,大約50%~70%的SS患者體內(nèi)可檢測(cè)到上述2種抗體[1]??笴ENP-B抗體則往往被視為系統(tǒng)性硬化癥(systemic sclerosis,SSc)臨床診斷的血清學(xué)標(biāo)記物,該抗體在CREST綜合征的發(fā)生率高達(dá)50%~90%[2]。上述3種抗體在不同疾病中的發(fā)生率已有不少文獻(xiàn)報(bào)道,但已有的研究數(shù)據(jù)均基于傳統(tǒng)免疫學(xué)檢測(cè)方法獲得,包括對(duì)流免疫電泳、免疫雙擴(kuò)散、免疫印跡法或酶聯(lián)免疫吸附法等。在國(guó)內(nèi)大部分臨床實(shí)驗(yàn)室在開(kāi)展抗SSA、SSB和CENP-B抗體檢測(cè)時(shí),仍然沿用傳統(tǒng)免疫印跡法開(kāi)展定性檢測(cè)。近年來(lái),具有全自動(dòng)、定量、隨機(jī)上樣和靈活組合等特點(diǎn)的化學(xué)發(fā)光法(chemiluminescent immunoassay,CLIA)被逐步應(yīng)用到自身抗體的臨床檢測(cè)領(lǐng)域[3-4]。本研究同時(shí)采用CLIA和ELISA對(duì)上述3種抗體在SLE和SS等患者人群中的發(fā)生率和濃度展開(kāi)對(duì)比研究。同時(shí)比較CLIA和ELISA兩種方法在檢測(cè)上述抗體時(shí)的符合率。

        1 材料與方法

        1.1 臨床樣本 收集2017年1月至2019年6月期間湖北省中醫(yī)院就診的531例SLE患者(女480例,男51例,平均年齡36歲)、96例SS患者(女92例,男4例,平均年齡50歲)和93例本院職工體檢健康人群(healthy individual,Hi)(女56例,男37例,平均年齡43.5歲)血清樣本,樣本采集后直接檢測(cè)或-20℃保存。入組患者的臨床診斷均嚴(yán)格遵循相關(guān)疾病的臨床分類標(biāo)準(zhǔn)[5-6]。其中,Hi組均自述無(wú)自身免疫相關(guān)疾病病史,且血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能和免疫指標(biāo)(含免疫球蛋白和補(bǔ)體)等常規(guī)體檢指標(biāo)未見(jiàn)異常。本研究已通過(guò)湖北省中醫(yī)院倫理委員會(huì)的倫理審查,所有受試者均簽署知情同意書(shū)。所有樣本同時(shí)采用CLIA和ELISA開(kāi)展抗SSA、SSB和CENP-B抗體的檢測(cè)。

        1.2 試劑和儀器 CLIA自身抗體檢測(cè)系統(tǒng):全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀(Smart 6500,重慶科斯邁公司)及配套的抗SSA、SSB和CENP-B抗體CLIA檢測(cè)試劑盒(江蘇浩歐博公司)。ELISA檢測(cè):SUNRISE酶聯(lián)儀(瑞士TECAN公司)及抗SSA、SSB和CENP-B抗體ELISA檢測(cè)試劑盒(德國(guó)歐蒙公司)。

        1.3 方法

        1.3.1 CLIA法檢測(cè)抗SSA、SSB和CENP-B抗體

        均按照試劑說(shuō)明書(shū)操作,在全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀(Smart 6500)上檢測(cè)。臨界值均為20 RU/mL。

        1.3.2 ELISA法檢測(cè)抗SSA、SSB和CENP-B抗體 血清標(biāo)本1∶201稀釋,加入包被特定靶抗原的微孔板中,室溫反應(yīng)30 min,用清洗緩沖液清洗3次,每孔加入100μL酶標(biāo)記的抗人IgG抗體,室溫反應(yīng)30 min,用清洗緩沖液清洗3次,每孔加入100μL 3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺底物液,室溫反應(yīng)15 min,最后加入100μL終止液,在酶聯(lián)儀中以450 nm和620 nm雙波長(zhǎng)測(cè)量吸光度測(cè)量。根據(jù)吸光度值計(jì)算抗體濃度并判讀陰陽(yáng)性結(jié)果。所有ELISA抗體的檢測(cè)臨界值均為20 RU/mL。

        1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS21.0軟件進(jìn)行。相關(guān)組別的抗體濃度比較采用t檢驗(yàn)分析;不同樣本組抗體發(fā)生率差異采用χ2檢驗(yàn)。不同方法檢測(cè)結(jié)果差異的比較,采用四格表的χ2檢驗(yàn),兩種方法檢測(cè)結(jié)果一致性的分析采用Kappa檢驗(yàn),一致性強(qiáng)度的判斷:當(dāng)Kappa<0.4,一致性強(qiáng)度較差;0.4≤Kappa<0.75,兩者一致性一般;Kappa≥0.75兩者一致性較好。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 抗SSA、SSB和CENP-B抗體在SLE和SS的發(fā)生率及濃度 CLIA法結(jié)果顯示:SLE患者組的抗體發(fā)生率分別為63.3%、17.5%和9.2%,SS患者組的抗體發(fā)生率則分別為84.4%、40.6%和7%??筍SA和SSB抗體在SS患者組的發(fā)生率均高于SLE患者組(P<0.01),而抗CENP-B抗體在上述2種疾病中的發(fā)生率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)??筍SA抗體濃度在上述兩組患者中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.09),而抗SSB和CENPB抗體的濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表1和表2。

        表1 抗SSA、SSB和CENP-B抗體在不同疾病組的抗體發(fā)生率比較

        表2 抗SSA、SSB和CENP-B抗體在SLE和SS患者的抗體濃度比較(ˉx±s,RU/mL)

        2.2 抗SSB抗體和抗SSA抗體的相關(guān)性 入組樣本中抗SSB抗體陽(yáng)性134例,其中抗SSA抗體陰性而抗SSB抗體陽(yáng)性的例數(shù)僅為4例。結(jié)果表明,無(wú)論是在SLE還是SS患者人群中,抗SSB抗體的發(fā)生總是伴隨抗SSA抗體的存在,呈現(xiàn)對(duì)抗SSA抗體的高度依賴性(P<0.05)。見(jiàn)表3。

        表3 抗SSB抗體伴隨抗SSA抗體發(fā)生率[n(%)]

        2.3 CLIA和ELISA 2種方法檢測(cè)抗SSA、SSB和CENP-B抗體的符合率 本研究對(duì)所有樣本同時(shí)平行開(kāi)展CLIA和ELISA檢測(cè)。結(jié)果顯示,CLIA和ELISA在檢測(cè)上述3種抗體時(shí)總符合率分別為96.4%、95.7%和98.3%(Kappa>0.85),提示CLIA和ELISA 2種方法對(duì)3種抗體的檢測(cè)結(jié)果具有可比性。見(jiàn)表4。

        表4 CLIA與ELISA檢測(cè)抗SSA、SSB和CENP-B抗體的符合率(%)分析

        3 討論

        隨著環(huán)境的改變以及老齡化程度的增加,國(guó)內(nèi)AID的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。在臨床實(shí)踐中,與AID相關(guān)的自身抗體實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果對(duì)于疾病的臨床診斷和治療監(jiān)測(cè)發(fā)揮重要作用。抗SSA抗體和抗SSB抗體由于在SS患者中具有較高的發(fā)生率,因此對(duì)SS的臨床診斷具有重要價(jià)值。而抗CENP-B抗體則被認(rèn)為是SSc的重要血清學(xué)標(biāo)記物。已有的研究表明,上述3種抗體在包括SLE、原發(fā)性膽汁性膽管炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等AID中均有不同的發(fā)生率[7-9]。但大部分針對(duì)上述抗體發(fā)生率研究所采用的方法學(xué)均為傳統(tǒng)免疫方法,例如免疫雙擴(kuò)散法、對(duì)流免疫電泳、ELISA或免疫印跡法(line immunoassay,LIA)等。不同檢測(cè)方法學(xué)由于檢測(cè)原理不同,因此不同方法學(xué)檢測(cè)結(jié)果往往容易存在差異。目前,國(guó)內(nèi)針對(duì)上述3種抗體在SLE和SS發(fā)生率和濃度的研究比較少見(jiàn)。本研究應(yīng)用CLIA和ELISA方法對(duì)臨床確診的患者開(kāi)展上述3種抗體的平行檢測(cè),從而探討上述3種抗體在國(guó)內(nèi)SLE和SS患者的抗體發(fā)生率以及濃度。結(jié)果顯示,抗SSA和SSB抗體在SLE和SS患者組中均具有較高的發(fā)生率,抗SSA抗體的發(fā)生率分別為63.6%和84.4%,抗SSB抗體的發(fā)生率分別為17.5%和40.6%。本研究中抗SSB抗體在SS確診患者組中的發(fā)生率明顯高于Yang等[10]采用LIA方法的研究結(jié)果(25.3%)。值得注意的是,抗SSB抗體不僅發(fā)生率SS患者組高于SLE組,而且該抗體在SS組中的濃度顯著高于SLE患者(P<0.01)。在臨床實(shí)踐中,SS患者包括原發(fā)和繼發(fā)兩類患者。其中,17.8%的SLE患者可繼發(fā)出SS,從而在臨床表現(xiàn)出上述2種疾病的重疊(SLE-SS)。SLE-SS與單獨(dú)SLE相比較,不僅臨床表現(xiàn)有所不同,而且自身抗體的表現(xiàn)也存在差異,其中抗SSA和SSB抗體在SLE-SS患者組中的發(fā)生率明顯高于單獨(dú)SLE組[11]。本研究結(jié)果顯示,抗SSB抗體在SS患者組的發(fā)生率和濃度均顯著高于SLE組,提示與抗SSA抗體相比,抗SSB抗體在SS疾病的發(fā)病過(guò)程中可能發(fā)揮更重要的作用。

        已有的研究表明,抗SSA抗體和抗SSB抗體具有不同的疾病特異性。前者在多種AID疾病中均有一定的發(fā)生率,包括SLE、SS和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等,而后者則對(duì)SS具有更高的疾病特異性。在本研究中,抗SSB抗體盡管在SS的發(fā)生率明顯高于SLE,但該抗體的出現(xiàn)始終伴隨著抗SSA抗體的陽(yáng)性。作為真核細(xì)胞內(nèi)的重要核糖核蛋白分子,SSA和SSB抗原在結(jié)構(gòu)上具有一定的關(guān)聯(lián)性。天然的SSA和SSB抗原的共同特點(diǎn)都是由一個(gè)核糖核蛋白與特定小分子核酸(hY-RNAs)組成的復(fù)合物。與SSA抗原中相對(duì)分子質(zhì)量為60 000的蛋白質(zhì)分子相結(jié)合的hY-RNAs分子,同時(shí)也具有與SSB抗原中相對(duì)分子質(zhì)量為48 000的蛋白質(zhì)分子結(jié)合的位點(diǎn)。相對(duì)分子質(zhì)量為60 000和48 000的結(jié)合蛋白的分子量不同,但由于可結(jié)合在同一hY-RNAs分子上,因此在抗原結(jié)構(gòu)上相關(guān)性也使得其臨床發(fā)生率具有一定的相關(guān)性[12]。本研究中所使用的CLIA方法在檢測(cè)抗SSA和SSB抗體時(shí)均使用天然抗原,而檢測(cè)結(jié)果也顯示出抗SSB抗體的發(fā)生率具有抗SSA抗體的依賴性。最近的研究表明,抗SSA抗體與SLE患者的頭疼、視力模糊以及疾病活動(dòng)度相關(guān),而抗SSB抗體則與SLE患者的頭疼和疾病活動(dòng)度相關(guān),且上述2個(gè)抗體在SLE患者中往往同時(shí)出現(xiàn)[13]。對(duì)于單獨(dú)抗SSA抗體陽(yáng)性的SLE和SS患者與2個(gè)抗體同時(shí)陽(yáng)性的患者之間,是否存在更多的臨床差異(包括臨床表征、疾病進(jìn)程和療效預(yù)后等),仍需要更多的臨床分組研究具體解答。

        抗CENP-B抗體一直以來(lái)都作為SSc疾病的血清學(xué)標(biāo)志物,尤其與具有鈣化、雷諾現(xiàn)象、食管運(yùn)動(dòng)障礙、指端硬化和毛細(xì)血管擴(kuò)張為主要表現(xiàn)的CREST綜合征高度相關(guān)。越來(lái)越多的研究表明,抗CENP-B抗體同樣可以在其他自身免疫疾病中出現(xiàn),包括SLE、SS、原發(fā)性膽汁性膽管炎和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等。隨著研究的不斷深入,抗CNEP-B抗體陽(yáng)性的SS患者與抗體陰性患者相比,由于具有雷諾現(xiàn)象、指端硬化和合并自身免疫甲狀腺炎的概率更高,因此該抗體陽(yáng)性的SS患者被視為一個(gè)獨(dú)特的臨床 亞 型[14]。Respaldiza等[15]研 究 顯 示,抗CENP-B抗體在SLE的發(fā)生率僅為1.9%。在本研究中,抗CENP-B抗體在SLE的發(fā)生率高達(dá)9.2%。差異造成的原因有可能是Respaldiza等[15]的研究所采用的方法學(xué)均為傳統(tǒng)的檢測(cè)方法,包括間接免疫熒光法、ELISA、western blot等,對(duì)于抗CENP-B抗體的檢測(cè)敏感性偏低。

        本研究對(duì)所有樣本同時(shí)采用CLIA和ELISA平行檢測(cè)結(jié)果顯示,2種方法在檢測(cè)上述3種抗體時(shí)表現(xiàn)出良好的符合率和一致性。盡管CLIA和ELISA在抗原包被和反應(yīng)原理上存在一定的差異,但由于2種方法針對(duì)上述3種抗體的檢測(cè)均采用了相同來(lái)源的抗原成分(SSA和SSB均采用天然抗原,而CENP-B同為重組抗原),確保2種方法學(xué)在檢測(cè)上述3種抗體時(shí)具有良好的符合率。實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展自身抗體檢測(cè)方法學(xué)選擇之前,應(yīng)根據(jù)方法學(xué)性能參數(shù)等多因素綜合評(píng)判。

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