趙志敏，孔繼光，林曉鳳，林少香

廣東省深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院：1.檢驗(yàn)科；2.病理科，廣東深圳 518000

宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅女性健康，探討與其發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的分子標(biāo)志物對(duì)宮頸癌的早期診斷及治療尤為重要。肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子(HB-EGF)作為表皮生長(zhǎng)因子家族成員之一，已被證實(shí)在乳腺癌、胃癌等多種腫瘤中高表達(dá)[1-3]，HB-EGF通過(guò)提高腫瘤細(xì)胞的變形轉(zhuǎn)移能力,降低細(xì)胞間黏附力及誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等多種途徑來(lái)促進(jìn)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[4]，但目前其在宮頸癌中的研究較少。本研究通過(guò)檢測(cè)并對(duì)比HB-EGF在宮頸炎、宮頸低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)、高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)及宮頸癌組織中的表達(dá)情況，探討其與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年7月至2020年6月本院病理科保存的組織標(biāo)本為研究對(duì)象，包括宮頸癌組織標(biāo)本83例，HSIL組織標(biāo)本239例，LSIL組織標(biāo)本245例，宮頸炎組織標(biāo)本150例。入選標(biāo)本均由病理科2名具有高級(jí)職稱(chēng)的醫(yī)師，采用雙盲閱片法進(jìn)行判讀。本研究獲本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法 石蠟標(biāo)本切片，厚度4 μm，利用Envision免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HB-EGF在宮頸炎、LSIL、HSIL及宮頸癌組織中的表達(dá)情況。二甲苯、中性樹(shù)膠、顯色試劑盒、二抗、蘇木素復(fù)染劑等檢測(cè)試劑購(gòu)自瑞士羅氏公司；一抗購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，按1∶100稀釋。所有實(shí)驗(yàn)步驟均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3結(jié)果判定 細(xì)胞中可見(jiàn)棕黃色顆粒分布判定為陽(yáng)性細(xì)胞，以染色強(qiáng)度結(jié)合陽(yáng)性細(xì)胞百分比綜合計(jì)分。染色強(qiáng)度以多數(shù)細(xì)胞呈現(xiàn)的染色情況計(jì)分：基本不著色為0分，淡著色為1分，著色適中為2分，深著色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞百分比計(jì)分：0%～5%為0分，>5%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分。染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞百分比得分的乘積：0分計(jì)為-，1～4分計(jì)為+，5～8分計(jì)為++，9～12分計(jì)為+++，將-、+視為陰性，++、+++視為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

HB-EGF在宮頸炎、LSIL、HSIL及宮頸癌4種組織的上皮、部分間質(zhì)及炎癥細(xì)胞中均有表達(dá)，但在上皮細(xì)胞中的表達(dá)高于間質(zhì)細(xì)胞，主要表達(dá)于細(xì)胞核內(nèi)。HB-EGF在宮頸炎組織的上皮基底層及部分間質(zhì)細(xì)胞中少量表達(dá)，而在LSIL、HSIL及宮頸癌組織的上皮及間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)增加，見(jiàn)圖1。HSIL及宮頸癌組織中HB-EGF的陽(yáng)性率明顯高于LSIL與宮頸炎組織，LSIL組織中HB-EGF的陽(yáng)性率明顯高于宮頸炎組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 4種宮頸組織中HB-EGF的表達(dá)情況

注：A為宮頸炎組織；B為L(zhǎng)SIL組織；C為HSIL組織；D為宮頸癌組織。

3 討 論

HB-EGF是一種相對(duì)分子質(zhì)量為20×103～22×103的糖蛋白，起初以膜結(jié)合蛋白的形式存在，稱(chēng)為HB-EGF前體(proHB-EGF)，經(jīng)過(guò)多種金屬蛋白酶的水解作用，膜外成熟肽段脫落形成游離HB-EGF(sHB-EGF)，sHB-EGF與表皮生長(zhǎng)因子受體結(jié)合并被激活，刺激鄰近細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖[5]。sHB-EGF是多種細(xì)胞的有絲分裂原，包括上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及成纖維細(xì)胞等，主要以自分泌和(或)旁分泌的方式促進(jìn)上述細(xì)胞的增殖、分化、遷移[6-8]。HB-EGF在人體組織中廣泛表達(dá)，尤其是在肺、心臟、骨骼肌和腦組織中，其參與了人體多種生理過(guò)程，包括組織分化、皮膚損傷修復(fù)及妊娠等，同時(shí)也在許多病理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，如心臟肥大、肺動(dòng)脈高壓、動(dòng)脈粥樣硬化及腫瘤形成等[9-13]。研究證實(shí)，HB-EGF在乳腺癌、胃癌、卵巢癌、大腸癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、甲狀腺癌等多種類(lèi)型的腫瘤中高表達(dá)，且高表達(dá)HB-EGF的患者預(yù)后較差，考慮HB-EGF主要通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力，從而促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展[14-17]。因此，通過(guò)下調(diào)HB-EGF表達(dá)，抑制表皮生長(zhǎng)因子受體功能等來(lái)抑制腫瘤發(fā)展已被越來(lái)越多的學(xué)者關(guān)注，且相關(guān)研究已逐漸開(kāi)展并證實(shí)具有可行性[18-19]。

本研究比較了HB-EGF在宮頸炎、LSIL、HSIL及宮頸癌4種組織中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，HB-EGF在宮頸炎、LSIL、HSIL、宮頸癌組織中的表達(dá)呈逐漸升高的趨勢(shì)，HSIL及宮頸癌組織中HB-EGF的陽(yáng)性率明顯高于LSIL與宮頸炎組織，LSIL組織中HB-EGF的陽(yáng)性率明顯高于宮頸炎組織。HB-EGF在4種組織中的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果清晰，可為宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變及宮頸癌的診斷提供更加客觀的依據(jù)，有望成為形態(tài)學(xué)診斷的有力補(bǔ)充。本研究的不足之處為僅在蛋白水平證實(shí)了HB-EGF在宮頸癌組織中高表達(dá)，后續(xù)將擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步從分子水平證實(shí)研究結(jié)果的可靠性，并對(duì)HB-EGF促進(jìn)宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制進(jìn)行深入探討。

綜上所述，HB-EGF在HSIL及宮頸癌組織中高表達(dá)，可能在宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變及宮頸癌的診斷中具有一定價(jià)值，其在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用有待進(jìn)一步研究。