彭 麗，唐 婷，李 玲

1.湖北省中醫(yī)院檢驗科，湖北武漢 430061；2.湖北省中醫(yī)藥研究院，湖北武漢 430074

因日本、歐美國家科技和工業(yè)的飛速發(fā)展，其生產(chǎn)的醫(yī)療檢驗設(shè)備也隨之得到高速發(fā)展。我國目前發(fā)展較好的二級醫(yī)院及各三級醫(yī)院檢驗科均引進了國外大品牌全自動生化分析儀[1]。近年來國內(nèi)醫(yī)療行業(yè)快速發(fā)展，國產(chǎn)試劑的穩(wěn)定性和準確性得到很大的提升。與進口的配套試劑相比，國產(chǎn)試劑在成本、試劑有效期等方面更具優(yōu)勢，因此國產(chǎn)試劑越來越多地應(yīng)用于進口生化分析儀[2-4]。檢驗儀器及項目的性能在檢驗醫(yī)學(xué)界一直備受關(guān)注[5-7]。根據(jù)《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認可準則》[8]相關(guān)規(guī)定和要求，實驗室檢測系統(tǒng)的性能驗證是臨床檢驗質(zhì)量管理的重要內(nèi)容之一。本實驗室根據(jù)相關(guān)要求，對搭配國產(chǎn)試劑使用的西門子ADVIA2400全自動生化分析儀進行性能驗證和評價，其過程如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集湖北省中醫(yī)院門診及住院患者各檢測項目的異常低值和高值；隨機收集湖北省中醫(yī)院體檢中心體檢健康者的新鮮血清，無乳糜、溶血，無黃疸。

1.2儀器與試劑 所有生化項目的檢測均在西門子全自動生化分析儀上完成，型號為ADVIA2400。天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)檢測試劑購自北京利德曼生化股份有限公司，其他檢測試劑均購自寧波美康生物科技公司。使用的校準品均購自相應(yīng)的試劑公司，質(zhì)控品購自英國朗道公司，使用中、高2個水平，批號分別為1284UN、1005UE。

1.3方法 通過評估丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、AST、GGT、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白、清蛋白、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、肌酸激酶(CK)、總膽紅素(TBIL)、鈣、磷、葡萄糖、尿素、肌酐、尿酸、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)這18個項目的正確度、精密度、線性范圍、臨床可報告范圍和生物參考區(qū)間，結(jié)果與生產(chǎn)廠家給出的性能指標進行比較，驗證生產(chǎn)廠家給出的性能指標是否能滿足檢驗科的要求；若無廠家性能指標則與國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心規(guī)定的標準比較，判斷儀器的性能是否符合要求。

1.3.1正確度驗證 參加2020年國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心脂類、電解質(zhì)、酶類、代謝物、總蛋白正確度驗證計劃、室間質(zhì)評和湖北省臨床檢驗中心室間質(zhì)評，依據(jù)回報結(jié)果判斷是否通過。判定標準：相對偏倚應(yīng)小于衛(wèi)生行業(yè)標準規(guī)定的偏倚或滿足國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心室間質(zhì)評標準對正確度驗證的要求[9]。

1.3.2精密度驗證 選擇低值(中水平)、高值(高水平)質(zhì)控品和新鮮混合血清標本各20份，測量前先定標，再做質(zhì)控，質(zhì)控結(jié)果在控制范圍內(nèi)，連續(xù)重復(fù)測定20次，計算標準差、變異系數(shù)(CV)，得到重復(fù)性精密度。判定標準：重復(fù)精密度<1/4允許總誤差(TEa)。中間精密度，取1個月的室內(nèi)質(zhì)控值(高值、低值)計算CV、標準差，得到批間精密度。判定標準：中間精密度<1/3TEa。

1.3.3線性范圍評價 以50 μL為1個體積單位，將高值標本與低值標本以3∶1、2∶2、1∶3的體積比例混合，加上高、低值標本共5個標本按照由低到高測定2次，計算均值，記錄結(jié)果。以直接測定結(jié)果計算得出的相應(yīng)濃度為X，以通過稀釋測定結(jié)果為Y，采用線性回歸方程計算得到a、b及r值。結(jié)果判斷：若b在0.97～1.03，r2>0.95，作a與0有無差異的t檢驗，如果P>0.05，則可直接判斷線性范圍在已涉及濃度內(nèi)。若b不在0.97～1.03，a較大，舍去高值或低值數(shù)據(jù)，縮小分析范圍，另做線性回歸統(tǒng)計，直至其線性回歸方程的a和b均符合要求，則該范圍為線性范圍。

1.3.4臨床可報告范圍評價 取濃度偏于線性范圍高值的血清標本，按照1∶5、1∶10稀釋，個別項目可按1∶2、1∶4稀釋。每個項目檢測2次，取均值。判定標準：計算平均稀釋回收率，平均稀釋回收率應(yīng)在90%～110%。

1.3.5生物參考區(qū)間的驗證 選擇20份體檢合格的健康者血清標本，在檢測系統(tǒng)上進行測定，對結(jié)果進行統(tǒng)計并與用相關(guān)行業(yè)標準提供的參考區(qū)間進行驗證[10]。R=(測定結(jié)果在參考范圍的例數(shù)/總測定例數(shù))×100%。結(jié)果判斷：20份標本的檢測結(jié)果只允許10%的數(shù)據(jù)超過所驗證參考區(qū)間，否則，進行參考區(qū)間確立試驗。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均用EXCEL2010分析處理，計算標準差、CV、線性回歸方程、r等。

2 結(jié) 果

2.1正確度驗證結(jié)果 清蛋白、TBIL、磷參加國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心和湖北省臨床檢驗中心室間質(zhì)評，室間質(zhì)評回報結(jié)果均顯示通過，CV分別為1.06%(<3.0%)、4.29%(<7.5%)、1.46%(<5.0%)；其他15個生化項目參加2020年國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心正確度驗證計劃，每個項目均有2個批號的標本，回報結(jié)果均顯示通過。見表1。

表1 正確度驗證結(jié)果

2.2精密度驗證結(jié)果 18個生化項目的重復(fù)精密度和中間精密度結(jié)果見表2，CV均通過了精密度驗證，見表2。

表2 精密度驗證結(jié)果

2.3線性范圍及臨床可報告范圍驗證結(jié)果 所有生化項目的線性范圍均來源于試劑說明書，18個生化項目線性范圍及臨床可報告范圍結(jié)果見表3、表4。

表3 線性范圍驗證結(jié)果

表4 臨床可報告范圍驗證結(jié)果

2.4生物參考區(qū)間驗證結(jié)果 ALP、尿素、肌酐等項目根據(jù)不同的性別、年齡劃分了不同的生物參考區(qū)間，分別分組進行驗證。18個生化項目生物參考區(qū)間的驗證結(jié)果見表5。

表5 生物參考區(qū)間驗證結(jié)果

3 討 論

檢測系統(tǒng)的性能是實驗室質(zhì)量的重中之重?！夺t(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認可準則在臨床化學(xué)檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用說明》中明確規(guī)定檢驗方法和程序的分析性能驗證內(nèi)容，至少包括正確度、精密度和可報告范圍[11]。對于使用內(nèi)部程序的實驗室，應(yīng)該進行性能確認試驗，以評估分析性能是否符合預(yù)期用途。本實驗室使用的寧波美康生物科技公司和北京利德曼生化股份有限公司生產(chǎn)的18個生化試劑，廠家均在西門子ADVIA2400這一款全自動生化分析儀上進行過性能確認試驗，試劑說明書也明確規(guī)定適用于該機型。因此實驗室只需要做性能驗證試驗。

正確度是評價儀器測量結(jié)果與真值的一致程度。國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心正確度驗證，使用的標本類型為新鮮冰凍血清，全程干冰運輸，基質(zhì)為人血清，因此不存在基質(zhì)效應(yīng)，具有嚴格的均勻性、穩(wěn)定性，可用于互通性評價。本實驗室參加2020年酶類、電解質(zhì)、脂類、代謝物、總蛋白正確度驗證，每個測定日(3 d)各批號重復(fù)測定5次，15個項目均通過，且CV小。無法參加正確度驗證計劃的清蛋白、TBIL、磷通過參加2020年國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心和湖北省臨床檢驗中心室間質(zhì)評，回報結(jié)果顯示通過，即為通過正確度驗證。

精密度是通過檢測每個項目質(zhì)控品值，計算項目重復(fù)精密度和中間精密度，并與寧波美康生物科技公司或者北京利德曼生化股份有限公司實際說明書中的聲明進行比較，核實是否與廠家聲明的一致。如果試驗的精密度>廠家聲明的精密度值，需要進一步計算該項的驗證值，如果重復(fù)精密度、中間精密度<驗證值，說明差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，同樣核實了與允許范圍的一致性，驗證通過。如二者數(shù)值很接近，為可靠起見，可以添加2個批次測量，將所得數(shù)據(jù)與以前數(shù)據(jù)合并再計算，可能得到更可靠的結(jié)果。如果重復(fù)精密度、中間精密度>驗證值，精密度驗證未通過，應(yīng)與廠家聯(lián)系并取得幫助。重復(fù)精密度是考察儀器檢測方法的隨機誤差。本實驗室的18個項目重復(fù)精密度均<1/4TEa，且增加了1個新鮮混合血清。其中重復(fù)精密度CV值最高的2個項目分別是ALT、AST。ALT重復(fù)精密度低值CV為3.30%，AST重復(fù)精密度低值CV為3.50%，這2個項目分別在檢測值為40 U/L、34 U/L時重復(fù)性稍差。中間精密度是在檢測系統(tǒng)處于優(yōu)良的條件下，連續(xù)測定20 d，取得20個結(jié)果，判斷這20個獨立結(jié)果間的一致程度。本實驗室的18個項目中間精密度均<1/3TEa，其中AST中間精密度低值CV為3.38%，HDL-C中間精密度高值CV為3.32%，為中間精密度CV值較高的2個項目。AST、HDL-C的中間精密度允許范圍分別是<5.0%和<10.0%，HDL-C的允許范圍比較大，且AST重復(fù)精密度的低值CV為3.50%，雖然結(jié)果也能滿足要求，依然需要密切關(guān)注AST。

線性范圍是采用未經(jīng)過任何處理的患者檢驗標本，確定某項目檢測上限的同時驗證其檢測上下限范圍是否呈線性關(guān)系[12-13]。臨床可報告范圍上限為線性范圍上限×最大稀釋度。結(jié)合最大稀釋度及線性范圍確定臨床可報告范圍。線性范圍關(guān)系到能否給臨床提供一份可靠的數(shù)據(jù)[14]，本實驗室使用的國產(chǎn)試劑可以準確地定量分析出這18個生化項目的檢測范圍，可以在對標本不做任何預(yù)處理的情況下得到可靠的線性范圍和臨床可報告范圍。所有項目的b值均在0.97～1.03，r2均>0.95，即表示在標本狀態(tài)良好無干擾的情況下，已驗證上述項目的線性范圍與廠家相符。其中AST、葡萄糖、尿素這3個項目驗證出的線性范圍與廠家相比，范圍略窄，體現(xiàn)在低值偏高，驗證的線性范圍是2～600 U/L、0.4～25.0 mmol/L、0.4～35.7 μmol/L，廠家提供的線性范圍分別是1～600 U/L、0.2～25.0 mmol/L、0.3～35.7 μmol/L。臨床可報告范圍是分析各稀釋濃度的線性關(guān)系，確定最高稀釋倍數(shù)，從而確保高值標本報告的準確性。在日常工作中，經(jīng)常會遇到超出線性范圍的高值標本，需要稀釋處理才能得到檢測結(jié)果[15]。本研究檢測的18個生化項目，最高稀釋倍數(shù)均為10倍，平均稀釋回收率均在90%～110%，即在驗證的臨床可報告范圍內(nèi)，對標本進行稀釋處理，檢驗結(jié)果是可靠的，符合臨床要求。

生物參考區(qū)間的驗證，也就是參考值范圍的驗證[16]。本實驗室根據(jù)相關(guān)標準，不同的分組分別進行生物參考區(qū)間的驗證。除了AST(女)，總蛋白、清蛋白、尿素(男≥60歲)這3組的R值為95%，其他組別均為100%。說明生物參考區(qū)間驗證通過，使用的參考范圍適用于本實驗室。

綜上所述，本實驗室在西門子ADVID2400全自動生化分析儀上對國產(chǎn)試劑的正確度、精密度、線性范圍、臨床可報告范圍、生物參考區(qū)間等性能指標進行驗證，結(jié)果均達到衛(wèi)生行業(yè)標準要求。國產(chǎn)試劑搭配進口全自動生化分析儀，可以滿足臨床檢測需求。