付曉蕊，康蓓佩，賀文芳，張鵬亮，周 磊

空軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科，陜西西安 710032

急性呼吸道感染在社區(qū)和醫(yī)院較為常見，尤其是近年來，禽流感病毒、嚴重急性呼吸綜合征(SARS)冠狀病毒、新型冠狀病毒的大肆出現(xiàn)[1]，讓人類對呼吸道病毒相關(guān)傳染性疾病的關(guān)注度不斷上升[2-3]。當(dāng)前，呼吸道病毒感染檢測主要靠PCR[4]，靈敏度和特異度高。本研究應(yīng)用的Filmarray全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)可檢測17種呼吸道病毒和3種細菌/非典型病原體，包括人呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒、甲型流感病毒H1型、甲型流感病毒H3型、甲型流感病毒H1N1-2009型、乙型流感病毒、腺病毒、副流感病毒1～4型、人鼻/腸病毒、人冠狀病毒(hCoV)-OC43、hCoV-229E、hCoV-NL63、hCoV-HKU1、百日咳鮑特菌、肺炎衣原體、肺炎支原體等[5-7]。

目前，臨床上對病毒性感染的關(guān)注度還不夠高，存在一定程度上的認識不足、觀念落后、意識淡薄。全球每年新發(fā)病毒型肺炎200多萬例，成人和兒童各100多萬例，亟須臨床醫(yī)生加強應(yīng)對能力。本研究旨在分析本院常見呼吸道相關(guān)病原體檢測結(jié)果，明確相關(guān)病原體感染類型，從而縮短診斷時間，為臨床呼吸道病原體感染快速診斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年8月至2019年6月本院診治的發(fā)熱、咳嗽，疑似呼吸道感染的患者(0～89歲)231例為研究對象，其中住院患者160例(呼吸科患者98例，非呼吸科患者62例)，門診患者71例；0～<10歲15例，10～<20歲8例，20～<30歲18例；30～<40歲21例，40～<50歲31例，50～<60歲38例，60～<70歲42例，70～<80歲37例，80～89歲21例；檢測標(biāo)本包括咽拭子164例、支氣管肺泡灌洗液38例、痰液29例。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2方法 采集痰液、咽拭子及支氣管肺泡灌洗液，放入轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基中；痰液及支氣管肺泡灌洗液留取在無菌痰杯中，及時送檢。標(biāo)本運輸和儲存條件：室溫下最多保存4 h，2～8 ℃最多保存3 d，-15 ℃下最多保存30 d，標(biāo)本避免反復(fù)凍融。

采用Filmarray快速呼吸道病原體檢測試劑盒(法國生物梅里埃公司)同步對多種呼吸道病原體的核酸進行擴增與檢測，嚴格按照產(chǎn)品說明書進行操作。在檢測結(jié)果的基礎(chǔ)上再次分析其基本病歷資料和臨床感染相關(guān)指標(biāo)，比如基礎(chǔ)疾病、發(fā)熱情況、住院時間、生化指標(biāo)和炎癥指標(biāo)等。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS26.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理和分析，不呈正態(tài)分布的計量資料以中位數(shù)和四分位數(shù)[M(P25，P75)]表示，組間比較采用秩和檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1住院和門診患者呼吸道病原體分布情況 住院患者呼吸道病原體檢測總例數(shù)為160例，陽性61例，陽性率為38.13%；其中呼吸科患者檢測總例數(shù)最多，占61.25%，陽性35例，陽性率為35.71%；兒科患者陽性率最高，為77.78%。門診患者檢測總例數(shù)為71例，陽性26例，陽性率為36.62%；其中急診科患者檢測總例數(shù)最多，占32.39%，陽性9例，陽性率為39.13%，感染科和兒科患者陽性率較高，均為50.00%。見表1、2。

表1 住院患者呼吸道病原體分布情況

表2 門診患者呼吸道病原體分布情況

2.2各年齡段呼吸道病原體分布情況 0～<10歲年齡段患者為易感人群，陽性率最高，為80.00%，各年齡段呼吸道病原體分布情況見表3。

表3 各年齡段呼吸道病原體分布情況

2.3呼吸科住院患者與非呼吸科住院患者基本病歷資料比較 呼吸科住院患者與非呼吸科住院患者在年齡、吸煙、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、體溫、咳嗽、肌肉痛或疲勞、咳痰、平均住院時間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表4 呼吸科住院患者與非呼吸科住院患者基本病歷資料比較

2.4呼吸科住院患者與非呼吸科住院患者臨床相關(guān)指標(biāo)比較 呼吸科住院患者與非呼吸科住院患者白細胞計數(shù)、B型腦鈉肽水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表5。

表5 呼吸科住院患者與非呼吸科住院患者臨床相關(guān)指標(biāo)比較

2.5Filmarray 檢測的多項陽性結(jié)果 共檢測出陽性標(biāo)本87例，單一病毒感染標(biāo)本52例，其中檢出最多的是鼻/腸病毒22例，占42.31%；2種病毒合并感染19例，3種病毒合并感染14例，4種病毒合并感染2例。檢測標(biāo)本中包括2例暫未判斷出型別的甲型流感病毒，即甲型流感病毒核酸檢測陽性，但因為反應(yīng)測試條中引物的局限性不能做出型別判定，需送市級疾控中心檢測，后咨詢市級疾控中心回報流感H5N1型。見表6。

表6 Filmarray 檢測多項陽性結(jié)果

3 討 論

Filmarray全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)是一個多功能集成的快速病原體檢測設(shè)備，允許檢測17種呼吸道病毒和3種細菌/非典型病原體，F(xiàn)ilmarray系統(tǒng)呼吸道感染模塊操作僅需要5 min的人工標(biāo)本處理和65 min的儀器檢測時間，快速方便、特異度和靈敏度高[8-9]，可以快速向臨床報告檢測結(jié)果，是一種新的分子即時檢測方法。

本研究結(jié)果顯示，本院住院患者呼吸道病原體陽性率為38.13%，低于華山醫(yī)院的檢測結(jié)果[10]。其中呼吸科患者檢測陽性例數(shù)最多(35例)，陽性率為35.71%，兒科患者陽性率最高，為77.78%，與后面的年齡分布統(tǒng)計結(jié)果0～<10歲的患兒陽性率80.00%相吻合，與國內(nèi)外研究報道基本一致[11-14]。0～<10歲的兒童為每年呼吸道感染易感人群[15]，并且以常見的鼻/腸病毒、副流感病毒和呼吸道合胞病毒多見，這提示0～<10歲兒童呼吸道病毒性感染不容忽視，需作好相關(guān)病毒性感染的宣傳教育活動。本院門診患者急診科檢測呼吸道病原體總例數(shù)最多，占32.39%，陽性9例，陽性率為39.13%，提示對于急診患者快速高效的呼吸道相關(guān)病原體檢測十分有必要，能迅速明確感染類型，便于醫(yī)生診斷和臨床用藥。

本研究中呼吸科住院患者與非呼吸科住院患者的年齡、吸煙、COPD、體溫、咳嗽、肌肉痛或疲勞、咳痰，以及白細胞計數(shù)、B型腦鈉肽水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示有呼吸系統(tǒng)相關(guān)癥狀的患者出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)疾病的概率會比其他患者要大一些，應(yīng)密切關(guān)注。

除此之外，本研究共檢測出陽性標(biāo)本87例，鼻/腸病毒檢測陽性率最高，共檢出33例，占37.93%。檢測結(jié)果可以通過樣品和質(zhì)控品的反應(yīng)曲線讀取，但也有碰到部分檢測標(biāo)本中包括暫未判斷出型別的甲型流感病毒，即甲型流感病毒核酸檢測陽性，但因為反應(yīng)測試條中引物的局限性不能做出型別判定，需送市級疾控中心檢測，這對發(fā)現(xiàn)檢測試劑條范圍以外的相關(guān)性感染也有一定的提示作用。

Filmarray全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)有其獨特的優(yōu)勢，比如患者受肺炎支原體、肺炎衣原體、非典型病原體、百日咳鮑特菌感染困擾，因其培養(yǎng)條件苛刻常規(guī)實驗室無法快速明確病原體，而此方法可以很快向臨床報告結(jié)果，還可以同時檢測到多種呼吸道相關(guān)病原體感染，對疑難病例有重要臨床指導(dǎo)價值，便于醫(yī)生及時了解患者感染狀態(tài)，全面防控相關(guān)病原體感染。但因其費用昂貴，一般情況不建議使用，如遇病情遷延不愈或高度懷疑病毒感染而又暫時無法確認或者混合感染時，可以考慮采用Filmarray全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)快速檢測常見呼吸道感染相關(guān)的病原體，它能更好地服務(wù)于感染性疾病的診斷與臨床藥物的合理使用中，對臨床呼吸道感染患者的診斷和治療具有重要意義。