年 娣，孫俊杰，李卓含，張 楠，江冉冉，時(shí) 鵬

（1.蚌埠醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)系核醫(yī)學(xué)教研室；2.蚌埠醫(yī)學(xué)院2018級(jí)本科檢驗(yàn)專業(yè)；3.蚌埠醫(yī)學(xué)院2019級(jí)本科檢驗(yàn)專業(yè)；4.蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，安徽 蚌埠 233000）

吉蘭?巴雷綜合征（Guillain-Barrésyndrome，GBS）又稱為急性炎癥性脫髓鞘型神經(jīng)病，是一種累及周圍神經(jīng)系統(tǒng)的自身免疫性疾病，亦是引起急性弛緩性癱瘓最常見原因，病因不明。實(shí)驗(yàn)性自身免疫 性 神 經(jīng) 炎（Experimental autoimmuna neuritis，EAN）大鼠是GBS的經(jīng)典動(dòng)物模型，具有外周神經(jīng)脫髓鞘和炎細(xì)胞浸潤(rùn)的病理學(xué)特點(diǎn)，臨床表現(xiàn)、神經(jīng)電生理改變與人GBS非常相似，被廣泛用于GBS發(fā)病機(jī)制及治療的基礎(chǔ)研究。

腸道菌群被譽(yù)為人體“第二基因組”。生理狀態(tài)下，腸道菌群與宿主間保持動(dòng)態(tài)平衡，通過(guò)調(diào)控腸道屏障穩(wěn)態(tài)、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)等保護(hù)機(jī)體免受病原菌侵襲［1-2］，微生物?腦?腸軸的紊亂與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)。維生素D（VD）經(jīng)典生物學(xué)作用是其調(diào)節(jié)鈣磷代謝、骨骼新陳代謝作用。但維生素D受體（Vitamin D Receptor，VDR）在人體幾乎所有組織類型中均有表達(dá)，近年研究表明［3-4］，維生素D在抗炎、調(diào)節(jié)免疫、調(diào)節(jié)腸道菌群中發(fā)揮重要作用。腸道菌群通過(guò)調(diào)節(jié)維生素D吸收、代謝等影響VD/VDR信號(hào)通路，益生菌的個(gè)體反應(yīng)可能依賴于VDR基因，維生素D與腸道菌群間相互影響共同參與維持腸道穩(wěn)態(tài)［5-6］。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)［7-9］，EAN大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)、組成均發(fā)生改變，益生菌干預(yù)可緩解臨床癥狀，提示腸道微生物可能通過(guò)影響腸外和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)而參與GBS發(fā)?。?，25（OH）2D3可減輕EAN大鼠坐骨神經(jīng)脫髓鞘和炎細(xì)胞浸潤(rùn)，但治療機(jī)制是否與其對(duì)EAN大鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用有關(guān)目前還不清楚。因此，本研究建立EAN大鼠模型，采用16SrDNA高通量測(cè)序技術(shù)觀察1，25（OH）2D3干預(yù)后EAN大鼠腸道菌群的變化，從腸道微生態(tài)的角度解釋1，25（OH）2D3對(duì)EAN大鼠的治療作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取6～8周齡健康雄性Lewis大鼠，體重（160±10）g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。飼養(yǎng)于蚌埠醫(yī)學(xué)院SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心屏障環(huán)境，溫度（22±2）℃，12 h明暗交替飼養(yǎng)。

1.1.2 主要試劑與儀器 周圍神經(jīng)髓鞘抗原P0180-199購(gòu)自上海吉爾生化有限公司；1，25（OH）2D3購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；結(jié)核桿菌H37Ra購(gòu)于Difco公司。高通量測(cè)序儀Miseq PE300型購(gòu)自美國(guó)Illumina公司。

1.2 方法

1.2.1 EAN模型建立 15只Lewis大鼠隨機(jī)分3組，每組5只：正常對(duì)照組（Control，C），模型組（EAN，E），維生素D干預(yù)組（VD）。依照課題組前期建立的模型制備方法［9］采用P0肽主動(dòng)免疫制備EAN模型，具體方法：模型組和維生素D干預(yù)組大鼠均后肢雙足底、多點(diǎn)注射致敏劑（250μg P0180-199乳化于等量的完全弗氏佐劑）共100μL/鼠，致敏第0天和24 h后分別尾靜脈注射200 ng百日咳毒素；正常對(duì)照組雙后肢多點(diǎn)注射等量完全弗氏佐劑。維生素D干預(yù)組大鼠每天給予1，25（OH）2D31μg·kg-1灌胃，正常對(duì)照組和模型組每天同等量花生油灌胃處理，連續(xù)2周。

1.2.2 高通量測(cè)序分析腸道菌群 無(wú)菌收集糞便樣本，采用16SrDNA高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)糞便菌群進(jìn)行分析。

1.2.2.1 DNA提取 稱取適量大鼠糞便樣本，使用E.Z.N.A.?Soil試劑盒提取糞便樣本中總DNA，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，NanoDrop 2000檢測(cè)DNA濃度和純度。

1.2.2.2 PCR擴(kuò)增、高通量測(cè)序 采用引物338F（5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3'）和806R（5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3'）對(duì)16SrRNA V3-V4可變區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增，Agencourt AMPure XP磁珠對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化并完成建庫(kù)，利用Agilent 2100 Bioanalyzer對(duì)文庫(kù)片段進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)合格的文庫(kù)選擇Illumina Miseq PE300平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序，由深圳華大基因科技服務(wù)有限公司完成檢測(cè)。

1.3 數(shù)據(jù)分析 數(shù)據(jù)過(guò)濾、Tags連接后進(jìn)行分析，利用USEARCH軟件，在97%相似度下進(jìn)行OTU聚類，生成OUTTable。利用R語(yǔ)言等進(jìn)行物種組成分析，單個(gè)樣品多樣性分析，樣品間多樣性分析等統(tǒng)計(jì)分析。采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用方差分析，多樣本間兩兩比較采用Tukey法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 1，25（OH）2D3對(duì)EAN大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度和脫髓鞘的影響 本課題沿用課題組前期實(shí)驗(yàn)方法：免疫后每天稱重、觀察發(fā)病情況并評(píng)分，發(fā)病高峰期進(jìn)行坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度、潛伏期測(cè)定（圖1），E組坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度（56.98±3.62）m·s-1，低 于C組（99.92±5.13）m·s-1和VD組（70.70±3.07）m·s-1，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；EAN組坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位振幅（7.16±0.50）mV，低于C組（16.30±1.38）mV和VD組（14.22±0.88）mV，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。發(fā)病高峰期取坐骨神經(jīng)透射電鏡（TEM）檢測(cè)（圖2），結(jié)果顯示C組有髓神經(jīng)纖維軸索結(jié)構(gòu)正常，髓鞘板層排列規(guī)則；EAN組髓鞘板層腫脹呈蜂窩狀改變及軸索剝離，VD干預(yù)后髓鞘腫脹等病理改變均較EAN組減輕。

圖1 各組坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度（A）和振幅（B）

圖2 透射電鏡檢測(cè)坐骨神經(jīng)脫髓鞘

2.2 OUT分析 在97%相似度下對(duì)所有序列進(jìn)行OUT劃分并進(jìn)行生物學(xué)信息統(tǒng)計(jì)。OUT Venn圖顯示（圖3），3組大鼠共15例糞便標(biāo)本共獲得OUT物種771個(gè)，3組共有OUT 525個(gè)，C組和VD組各有特有OUT物種37個(gè)，E組特有OUT物種41個(gè)。

圖3 OUTVenn圖

2.3 Alpha多樣性 基于OUT聚類分析，樣本稀釋曲線隨測(cè)序量增加而逐漸趨于平坦，表明測(cè)序深度已足以覆蓋樣品中所有的物種，測(cè)序深度足夠。進(jìn)一步進(jìn)行Alpha多樣性分析，估計(jì)微生物群落的豐富度、多樣性等生物學(xué)信息。Chao、Ace、Sobs指數(shù)可反映樣品中群落中物種的數(shù)量，其數(shù)值越大，提示樣品物種豐度越高；Shannon指數(shù)反映群落的多樣性，Shannon指數(shù)越大說(shuō)明樣本群落的多樣性越高；Coverge則反映樣本文庫(kù)的覆蓋率即樣品的測(cè)序深度，樣品測(cè)序覆蓋率高于0.9則說(shuō)明樣本測(cè)序覆蓋率較高，數(shù)據(jù)較可靠。

Alpha多樣性分析顯示（表1），各組Coverge均大于0.99，表明本次測(cè)序覆蓋度良好，可以代表樣品的真實(shí)情況。E組Chao、Ace、Sobs指數(shù)均較C組降低（P＜0.05），C組大鼠腸道菌群多樣性最高，EAN組大鼠菌群豐富度較C組大鼠有所減少。1，25（OH）2D3干預(yù)后Chao、Ace、Sobs指數(shù)顯著回升（P＜0.05）。

表1 腸道菌群Alpha多樣性指數(shù)/±s，n=5

表1 腸道菌群Alpha多樣性指數(shù)/±s，n=5

注：與EAN組比較，*P＜0.05。

組別C EAN VD n555 Chao 554.49±13.93*462.43±14.41553.01±26.68*Shannon 3.97±0.243.80±0.414.08±0.05 Ace 549.85±10.75*469.99±7.94550.00±26.53*Sobs 494.00±1.73*410.33±18.93497.00±16.46*Coverage 0.99870.99860.9987

2.4 Beta多樣性分析 熱圖（圖4A）分析顯示，與E組相比，VD組和C組樣本之間距離較近。Beta多樣性指數(shù)盒形圖（圖4B）也顯示E組和C組差異較大，VD組和C組較接近（P＜0.05）。

圖4 Beta多樣性圖

2.5 腸道菌群組成結(jié)構(gòu)分析

2.5.1 門水平菌群變化 如圖5 Phylum所示，不同組別大鼠菌群結(jié)構(gòu)在門水平相對(duì)豐度差異明顯。C組大鼠菌群在門水平上主要由厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroidetes）構(gòu)成，相對(duì)豐度分別為87.26%、10.23%。E組較C組Firmicutes明顯減少、Bacteroidetes增加，相對(duì)豐度分別是55.54%、25.90%；疣微菌門（Verrucomicrobia）在E組中表達(dá)顯著增加，相對(duì)豐度為11.86%。經(jīng)1，25（OH）2D3干預(yù)后VD組相比E組Firmicutes顯著增加、Bacteroidetes略有減低，Verrucomicrobia顯著降低但仍高于C組水平，相對(duì)豐度分別是68.23%、23.51%和1.93%。

2.5.2 綱水平菌群變化 如圖5 Class所示，C組小鼠腸道菌群綱水平以梭菌（Clostridia）、芽孢桿菌（Bacilli）、擬桿菌綱（Bacteroidia）為主，相對(duì)豐度分別 為72.29%、14.57%、10.22%。E組 較C組Clostridia、Bacilli顯著減少，相對(duì)豐度分別51.08%、3.59%；而疣微菌綱（Verrucomicrobiae）、丙型變形菌綱（Gammaproteobacteria）、擬桿菌綱（Bacteroidia）顯著增加，相對(duì)豐度為11.86%、3.32%、25.89%。1，25（OH）2D3干預(yù)后VD組較E組Bacilli水平大幅度回升，相對(duì)豐度13.17%；Clostridia略有回升但變化不明顯，相對(duì)豐度54.70%；同時(shí)Verrucomicrobiae、Bacteroidia等表達(dá)水平均有所回落，相對(duì)豐度為1.92%、23.50%。

2.5.3 目水平菌群變化 如圖5 Order所示，C組小鼠腸道菌群目水平以梭菌目（Clostridiales）、乳酸桿菌目（Lactobacillales）、擬桿菌目（Bacteroidiales）為主，相對(duì)豐度分別72.29%、14.55%、10.22%。E組與C組相比Lactobacillales、Clostridiales明顯減低，相對(duì)豐度分別為3.54%和51.08%，疣微菌目（Verrucomicrobiales）、Bacteroidiales、腸 桿 菌 目（Enterbacteriales）顯著增加，相對(duì)豐度分別11.85%、25.89%、2.71%。VD組較E組Lactobacillales水平大幅度回升，Clostridiales有回升但不明顯，相對(duì)豐度分別13.01%和54.69%；同時(shí)Verrucomicrobiales顯著降低，Bacteroidiales水平略有降低，相對(duì)豐度分別1.92%、23.50%。

2.5.4 科水平菌群變化 如圖5Family所示，E組毛螺菌科（Lachnospiraceae）、乳桿菌科（Lactobacillaceae）、瘤胃球菌科（Ruminococcaceae）、梭菌科（Clostridiaceae）等均較C組明顯減少，疣微菌科（Verrucomicrobiaceae）、腸桿菌科（Enterbacteriaceae）E組較C組明顯增加。VD組Lactobacillaceae、Lachnospiraceae水平較 E組顯 著回升 ，Verrucomicrobiaceae水平在VD干預(yù)后明顯降低，S24?7變化不明顯。

2.5.5 種屬水平菌群變化 如圖5 Species、Genus所示，E組瘤胃球菌屬（Ruminococcus）、乳酸菌屬（Lactobacillus）、顫 螺 菌 屬（Oscillospira）、梭 菌 屬（Clostridium）、糞球菌屬（Coprococcus）等均較C組明顯減少，阿克曼氏菌（Akkermansia）、埃希氏桿菌屬（Escherichia）、Adlercreutzia、普氏菌屬（Prevotella）E組較C組明顯增加。VD組Lactobacillus、Ruminococcus水平較E組顯著回升，Escherichia、Akkermansia水平在VD干預(yù)后明顯降低。

2.6 腸道差異菌群分析 腸道菌群主要由Firmicutes、Bacteroidetes等構(gòu)成，厚壁菌門/擬桿菌門（F/B）比值是評(píng)估病理狀態(tài)的生物標(biāo)志物［10］，如圖5 Phylim所示，EAN大鼠腸道菌群組成發(fā)生顯著改變。與C組相比，E組大鼠Firmicutes相對(duì)豐度顯著降低，而Bacteroidetes相對(duì)豐度顯著增加，即F/B比值降低（11.27±6.39 vs 2.29±1.01，P＜0.05）。1，25（OH）2D3干預(yù)一定程度上增加Firmicutes的豐度，同時(shí)降低了Bacteroidetes的豐度，VD組較E組F/B比值由2.29±1.01上升至3.17±1.27（P＞0.05）。

圖5 門、綱、目、科和種屬水平各組腸道菌群相對(duì)豐度

進(jìn)一步利用LEfSe分析不同組相對(duì)豐度顯著差異的物種，并選擇P＜0.05、LDA＞2的菌屬進(jìn)行展示，如圖6。結(jié)果顯示EAN組大鼠Enterobacteriales、Enterobacteriaceae、Escherichia顯著增多。1，25（OH）2D3干預(yù)顯著改變EAN大鼠菌群OUT聚類，VD組Coriobacteriia、Coriobacteriaceae、Coriobacteriales、Adlercreutzia顯著增加。

圖6 OUT差異顯著的LDA值分布柱狀圖

3 討論

腸道是人體內(nèi)微生物主要定植場(chǎng)所，近年研究表明腸道菌群通過(guò)調(diào)控腸道屏障穩(wěn)態(tài)、調(diào)節(jié)先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)、維持激素代謝平衡使宿主保持穩(wěn)定的狀態(tài)，保護(hù)機(jī)體免受病原菌侵襲。隨著微生物?腸?腦軸研究的深入，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注腸道菌群在神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)生發(fā)展中的作用。CEKANAVICIUTE E等［11］在無(wú)菌小鼠體內(nèi)定植MS患者腸道菌群后，無(wú)菌小鼠表現(xiàn)出嚴(yán)重的腦組織炎癥反應(yīng)，推測(cè)腸道菌群影響免疫系統(tǒng)引發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥可能是多發(fā)性硬化癥的病因。全基因組關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)VDR基因是影響腸道微生物群的宿主元素，VDR基因與整體微生物變異和個(gè)體分類顯著相關(guān)，益生菌的個(gè)體反應(yīng)依賴于VDR基因［5］。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)益生菌干預(yù)可緩解EAN大鼠臨床癥狀，1，25（OH）2D3可減輕EAN大鼠坐骨神經(jīng)脫髓鞘和炎細(xì)胞浸潤(rùn)，結(jié)合維生素D受體是形成腸道微生物群落的關(guān)鍵因素，我們推測(cè)腸道菌群可能是1，25（OH）2D3防治EAN的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，故本研究建立EAN大鼠模型，采用16SrDNA高通量測(cè)序技術(shù)觀察1，25（OH）2D3干預(yù)前后EAN大鼠腸道菌群的變化，探討1，25（OH）2D3對(duì)EAN大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響。

本研究Alpha多樣性分析發(fā)現(xiàn)EAN大鼠菌群豐富度指數(shù)Chao、Sobs、Ace均較C組降低，說(shuō)明在EAN病情進(jìn)展過(guò)程中腸道菌群結(jié)構(gòu)和豐度發(fā)生了改變。1，25（OH）2D3干預(yù)后Chao等指數(shù)的回升，提示1，25（OH）2D3可顯著提高EAN大鼠腸道菌群的多樣性。BASHIR M等［12］、HSIAOEY等［13］研究也表明補(bǔ)充維生素D3可改變腸道菌群豐度，這與我們的研究結(jié)果一致。

進(jìn)一步在腸道菌群組成進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，EAN大鼠在門水平上雖仍以Firmicutes、Bacteroidetes為主要優(yōu)勢(shì)菌群，但相對(duì)豐度改變。與C組相比EAN大鼠Lactobacillales、Bacilli、Clostridiales、Lactobacillaceae、Ruminococcaceae、Oscillospira、Coprococcus等均顯著減少，而Akkermansia、Verrucomicrobiae、Bacteroidiales、Gammaproteobacteria、S24?7、Verrucomicrobiales、Enterobacteriales、Enterobacteriaceae、Escherichia、Prevotella等顯著增加，提示EAN大鼠病情進(jìn)展過(guò)程中腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，不同水平上腸道菌群豐度發(fā)生了改變。TREMLETTH等［14］發(fā)現(xiàn)MS患者脫硫弧菌科增多、毛螺菌科和瘤胃菌減少。UNGER MM等［15］發(fā)現(xiàn)PD患者糞便擬桿菌門和普雷沃氏菌科減少和同時(shí)伴有短鏈脂肪酸的減少。彭龍等［16］發(fā)現(xiàn)代謝綜合征大鼠Ruminococcaceae類菌屬下降明顯。Ruminococcaceae、Clostridiales等菌屬代謝產(chǎn)物以短鏈脂肪酸（SCFAs）為主，其中丁酸鹽具有維持腸道屏障功能、調(diào)節(jié)免疫、抗炎作用，因此推測(cè)EAN發(fā)病過(guò)程中此類菌群減少，可能導(dǎo)致體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)等功能改變，加速病情進(jìn)展。

1，25 （OH）2D3干預(yù)后發(fā)現(xiàn)腸道菌群F/B比值略有回升。與E組相比，Lactobacillales、Bacilli、Lactobacillaceae、Coriobacteriia、Coriobacteriaceae、Coriobacteriales、Ruminococcus、Adlercreutzia等水平顯著增加，Verrucomicrobiae、Verrucomicrobiales、Escherichia、Akkermansia、Bacteroidia等表達(dá)水平回落。提示1，25（OH）2D3對(duì)EAN大鼠腸道菌群失衡有一定的調(diào)節(jié)作用，結(jié)合Alpha多樣性、Shannon指數(shù)分析此調(diào)節(jié)作用并未影響腸道菌群整體平衡。有研究發(fā)現(xiàn)，VD攝入量不同人群的糞便微生物組成也不同，猜測(cè)VD與腸道菌群相互影響而參與疾病進(jìn)展。F/B比值改變會(huì)影響機(jī)體的能量吸收利用，肥胖人群體內(nèi)厚壁菌門豐度降低而擬桿菌門豐度增加。乳酸菌屬于厚壁菌門，作為益生菌的一員，目前研究認(rèn)為其是具有預(yù)防腸道炎癥的菌群之一。ZAMANI等［17］發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)充Lactobacillus acidophilus可降低RA患者血清hs-CRP、IL-6水平并緩解臨床癥狀。QIAO等［18］研究表明，乳酸菌通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)、腸道上皮細(xì)胞通透性等發(fā)揮改善腸道屏障功能作用。本研究顯示，EAN大鼠Lactobacillales較C組減低，VD干預(yù)后Firmicutes、Lactobacillaceae的豐度一致性升高，再次證實(shí)VD干預(yù)可調(diào)整腸道菌群結(jié)構(gòu)，其對(duì)EAN治療作用可能與乳酸菌有關(guān)，具體機(jī)制有待于進(jìn)一步的研究。Akkermansia屬于疣微菌門，為革蘭氏陰性球菌，可降解腸上皮細(xì)胞釋放的黏蛋白，目前認(rèn)為其通過(guò)調(diào)節(jié)腸道黏蛋白而參與腸道黏膜層構(gòu)成，保護(hù)腸道免受病原體侵害，通過(guò)修復(fù)腸壁黏液層而改善腸道通透性減少內(nèi)毒素吸收，在糖尿病、肥胖患者中發(fā)揮作用［19-22］?？杀狙芯匡@示EAN組Akkermansia菌屬顯著增多，1，25（OH）2D3干預(yù)后Akkermansia菌屬雖減少但仍高于C組，這與傳統(tǒng)觀點(diǎn)Akkermansia為機(jī)體有益菌相反。但JANGI等［23］研究發(fā)現(xiàn)，MS患者腸道Akkermansia菌較正常對(duì)照組增加。SAUER等［24］研究顯示，Zn缺乏小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)改變，疣微菌門豐度增高。高血紅素鐵膳食導(dǎo)致腸道黏液層損傷的同時(shí)A.muciniphila豐度顯著增加，抗生素治療后其豐度也顯著降低［25］，這與我們結(jié)果一致。因此，推測(cè)Akkermansia在不同背景下可能具有不同的代謝特征，進(jìn)而發(fā)揮不同的作用。EAN大鼠模型中Akkermansia可能大量降解腸道黏蛋白而削弱腸道黏膜屏障的防御作用，增加了Enterobacteriaceae、Escherichia、Gammaproteobacteria等條件致病菌感染機(jī)體的機(jī)會(huì)，促進(jìn)了EAN病情的進(jìn)展。同樣定位于腸道黏液層中，同樣具有降解黏蛋白的功能的Lactobacillaceae菌屬，在EAN大鼠體內(nèi)為何與Akkermansia呈現(xiàn)相反的變化，二者之間是否存在聯(lián)系值得進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究檢測(cè)了EAN大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的變化以及1，25（OH）2D3對(duì)其干預(yù)作用。發(fā)現(xiàn)在EAN發(fā)病過(guò)程中腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，主要以腸桿菌科、紅蝽菌科、疣微菌目、疣微菌科等改變?yōu)橹?。補(bǔ)充1，25（OH）2D3有調(diào)節(jié)腸道菌群的作用，但具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。