王悅，隋海山，聶曉華，胡鵬

（濰坊市檢驗檢測中心，山東濰坊 261000）

在藥品檢驗過程中，多種不確定因素均會對最終測定結(jié)果造成影響［1-2］。作為判斷測定結(jié)果可信度的重要參考依據(jù)，不確定度已成為各類檢驗檢測實驗室質(zhì)量控制的一項重要指標［3-9］。復方羅布麻片I 是一種常用的中西合用降壓復方制劑［10］，由羅布麻葉、野菊花、氫氯噻嗪等10 味中藥材和化學藥物組成?，F(xiàn)行標準［11］中采用高效液相色譜（HPLC）法測定復方羅布麻片I 中氫氯噻嗪的含量。氫氯噻嗪是臨床常用的利尿劑，主要通過促進體內(nèi)鈉離子的排泄起到降壓作用［12］，但同時增加了尿鉀、磷、鎂等離子的排泄，可能會導致電解質(zhì)紊亂，還可能引起尿酸升高、糖代謝、脂代謝異常［13］，因此準確控制復方羅布麻片I 中氫氯噻嗪的含量尤為重要。目前對于氫氯噻嗪測定結(jié)果的不確定度評定研究較少，王建平等［14］對HPLC 法測定珍菊降壓片中氫氯噻嗪不確定度進行了評定，供試品溶液采用直接配制，沒有進行二次稀釋。筆者采用二次稀釋方法配制對照品和供試品溶液，用HPLC 法測定復方羅布麻片I中氫氯噻嗪含量，并根據(jù)JJF 1059.1—2012 《測量不確定度的評定與表示》［15］對測定結(jié)果的不確定度進行評定，分析影響不確定度的各種因素，為復方羅布麻片I 氫氯噻嗪含量測定的準確性提供可靠的理論依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1260 Infinity II 型，配有二極管陣列檢測器，美國安捷倫科技有限公司。

電子天平：XSE-205DU 型，感量分別為0.1 mg和0.01 mg，瑞士梅特勒-托利多有限公司。

移液管：10 mL，A 級，天津玻璃二廠。

容量瓶：25、100、200 mL，A 級，天津玻璃二廠。

氫氯噻嗪對照品：純度（質(zhì)量分數(shù)）為99.7%，批號為100309-201404，中國食品藥品檢定研究院。

復方羅布麻片I：批號為190633，山西云鵬制藥有限公司。

乙腈：色譜純，美國賽默飛世爾科技公司。

實驗所用其它試劑均為分析純。

實驗用水為超純水。

1.2 色譜條件

色譜柱；Agilent Eclipse Plus C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，美國安捷倫科技有限公司）；流動相：乙腈-水（體積比為12∶88）；檢測波長：271 nm；流量：1.0 mL／min；進樣體積：20 μL；柱溫：30 ℃。

1.3 對照品溶液制備

精密稱取氫氯噻嗪對照品0.010 59、0.010 29 g，分別置于2 只100 mL 容量瓶中，各加入20 mL 乙腈和2 mL 冰乙酸，超聲處理15 min，然后加入50 mL 流動相，超聲處理15 min，冷卻，最后加入流動相稀釋至標線，搖勻。精密量取上述溶液各10 mL，分別置于2 只25 mL 容量瓶中，用流動相稀釋至標線，搖勻，分別作為對照品溶液Ⅰ和對照品溶液Ⅱ。

1.4 供試品溶液制備

取20 片復方羅布麻片I，研細，精密稱取細粉0.900 3、0.900 0 g，分別置于2 只200 mL 容量瓶中，各加入20 mL 乙腈和2 mL 冰乙酸，超聲處理15 min，然后加入20 mL 流動相，超聲處理15 min，冷卻，最后加入流動相稀釋至標線，搖勻，濾過。精密量取上述溶液各10 mL，分別置于2 只25 mL 容量瓶中，用流動相稀釋至標線，搖勻，濾過，取濾液，分別作為供試品溶液Ⅰ和供試品溶液Ⅱ。

1.5 實驗方法

分別精密移取氫氯噻嗪對照品溶液、復方羅布麻片I 供試品溶液各20 μL，按1.2 色譜條件進樣測定，利用外標法以色譜峰面積計算復方羅布麻片I 中氫氯噻嗪含量。

2 數(shù)學模型與不確定度來源分析

2.1 數(shù)學模型

復方羅布麻片Ⅰ中氫氯噻嗪含量按式(1)計算：

式中：X——每片樣品中氫氯噻嗪質(zhì)量，mg；

AX——供試品色譜峰面積；

AR——對照品色譜峰面積；

WX——供試品取樣量，g；

WR——對照品取樣量，g；

VX——供試品溶液體積；

VR——對照品溶液體積；

W——平均片重，g；

PR——對照品純度。

2.2 不確定度來源

根據(jù)試驗過程和數(shù)學模型，復方羅布麻片I 中氫氯噻嗪測定結(jié)果的不確定度來源包括對照品的純度、對照品的稱量、對照品溶液配制過程、供試品的稱量、供試品溶液配制過程、對照品和供試品的色譜峰面積以及平均片重。各不確定度分量相互獨立，互不相關。不確定度來源如圖1 所示。

圖1 不確定度分量魚骨圖

3 不確定度評定

3.1 對照品純度引入的相對標準不確定度urel(PR)

對照品純度引入的不確定度為B 類測量不確定度。氫氯噻嗪對照品純度（質(zhì)量分數(shù)）為99.7%，因未給出不確定度相關信息，假設其分布區(qū)間為±0.05%。按照矩形分布計算，k= 3，則對照品純度引入的相對標準不確定度：

3.2 對照品稱量引入的相對標準不確定度urel(WR)

對照品稱量引入的不確定度包括天平示值誤差和稱量重復性引入的不確定度，均為B 類測量不確定度。稱量對照品所用的電子天平感量為0.01 mg，檢定證書給出的最大允許誤差為±0.03 mg，重復性誤差為0.05 mg。按矩形分布評定，k= 3，天平示值誤差引入的標準不確定度：

3.3 對照品溶液配制過程引入的相對標準不確定度urel(VR)

對照品溶液配制包括初步溶解、移液和二次稀釋3 個過程。

（2）移液過程引入的相對標準不確定度urel(VR2)。10 mL 移液管的最大允許誤差為±0.02 mL，按照矩形分布評定，k= 3，10 mL 移液管最大允許誤差引入的標準不確定度：

（3）二次稀釋過程引入的標準不確定度u(VR3)。二次稀釋使用25 mL 容量瓶，其最大允許誤差為±0.03 mL，按照矩形分布評定，k= 3，容量瓶最大允許誤差引入的標準不確定度：

需求情況：農(nóng)業(yè)秋季用肥已經(jīng)結(jié)束，需求欠佳。復合肥企業(yè)冬儲政策尚未大面積釋放，市場需求支撐有限，開工率較上周下降4.22個百分點至32.68%左右，較去年同期下滑9.11個百分點；下游經(jīng)銷商提貨積極性不高，企業(yè)出貨壓力較大。

綜上，對照品溶液配制過程引入的相對標準不確定度：

3.4 對照品色譜峰面積引入的相對標準不確定度urel(AR)

對照品色譜峰面積主要受進樣重復性影響，為A 類測量不確定度。選取對照品溶液Ⅰ，連續(xù)進樣測定6 次，平均色譜峰面積為1 505.1，相對標準偏差為0.59%，因此對照品色譜峰面積引入的相對標準不確定度：

3.5 供試品稱量引入的相對標準不確定度urel(Wx)

稱量供試品所用的電子天平感量為0.1 mg，檢定證書給出最大允許誤差為±0.1 mg，重復性誤差0.11 mg。按矩形分布評定，k= 3，天平示值誤差引入的標準不確定度：

重復性引入的標準不確定度：

稱量兩份供試品，分別為0.900 3 g 和0.900 0 g，則供試品稱量引入的相對標準不確定度：

3.6 供試品溶液配制過程引入的相對標準不確定度urel(VX)

供試品溶液配制包括初步溶解、移液和二次稀釋3 個過程。

200 mL 容量瓶在該實驗溫度條件下產(chǎn)生的 體 積 增 量 為200 mL×0.000 21 ℃-1×(26-20)℃=0.252 mL，按矩形分布評定，k= 3，溫度變化

3.7 供試品色譜峰面積引入的相對標準不確定度urel(AX)

供試品稱樣量分別為0.900 3、0.900 0 g，每份供試品溶液分別測定2 次，供試品溶液Ⅰ的色譜峰面積分別為1 426.95、1 426.24，平均色譜峰面積為1 426.60，極差R1=0.71；供試品溶液Ⅱ的色譜峰面積分別為1 374.18、1 374.86，平均色譜峰面積為1 374.52，R2=0.68。采用極差法計算，當n=2 時，極差系數(shù)C=1.13，供試品溶液Ⅰ引入的相對標準不確定度：

3.8 平均片重引入的相對標準不確定度urel(W)

平均片重引入的不確定度主要包括兩個來源，一是天平示值誤差引入的不確定度，為B 類測量不確定度；二是片重差異引入的不確定度，為A 類測量不確定度。取供試品20 片，精密稱定，平均片重為0.145 2 g，20 片片重標準偏差s=3.0 mg，則天平示值誤差引入的相對標準不確定度：

片重差異引入的相對標準不確定度：

3.9 合成相對標準不確定度及擴展不確定度

各不確定度分量匯總見表1。上述各不確定度分量互不相關，則高效液相色譜法測定復方羅布麻片Ⅰ中氫氯噻嗪含量的合成相對標準不確定度：

表1 不確定度分量匯總

氫氯噻嗪含量測定結(jié)果為1.58 mg，合成標準不確定度u(X)=1.58 mg×urel(X)=0.014 mg。

正態(tài)分布下，取包含因子k=2，置信區(qū)間為95%，則擴展不確定度U(X)=ku(X)=0.028 mg。因此復方羅布麻片I 中氫氯噻嗪含量可表示為(1.58±0.028) mg，k=2。

4 結(jié)語

高效液相色譜法測定復方羅布麻片I 中氫氯噻嗪含量的不確定度主要由對照品純度、稱量、對照品溶液配制、對照品色譜峰峰面積、供試品稱量、供試品溶液配制、供試品色譜峰面積及平均片重引入，其中對照品的稱量對不確定度影響最大，平均片重次之。在藥品檢驗的日常工作中，檢驗人員在規(guī)范操作的同時，需定期對天平和高效液相色譜儀等儀器進行檢定、校準和期間核查，并做好維護和保養(yǎng)。操作過程中盡可能保持實驗條件的相對恒定，從而減小實驗誤差。