賈冰 喬世巖

新生兒溶血病（HDN）在臨床較為常見，常由母嬰血型不合而導(dǎo)致的分娩或妊娠階段母親IgG 抗體進(jìn)入胎兒體內(nèi)，進(jìn)而破壞胎兒正常紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致其出現(xiàn)免疫性反應(yīng)而造成的溶血[1，2]。一般情況下，HDN 患兒血型多為A 型或B 型，且母親血型為O 型，患兒體內(nèi)存在母親抗體，輸血時(shí)無法依照常規(guī)方式同型輸血，避免HDN 患兒溶血癥狀加重[3，4]。因此，輸血前須對(duì)HDN 患兒進(jìn)行溶血三項(xiàng)和紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的篩查，保證新生兒輸血安全。微柱凝膠檢測(cè)法（MGCT）是近年來臨床中應(yīng)用較廣的檢測(cè)技術(shù)，但其在HDN 患兒輸血前的應(yīng)用鮮有報(bào)道[5]。因而對(duì)我院收治的ABO 血型系統(tǒng)與血型不規(guī)則抗體引起的新生兒溶血病（ABO-HDN）患兒作為研究對(duì)象，分析MGCT 在檢測(cè)直接抗球蛋白、紅細(xì)胞不規(guī)則抗體中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取2016年1月～2020年2月我院收治的200 例ABO-HDN 患兒作為研究對(duì)象，其中男107 例、女93 例，年齡1～5.5d，體質(zhì)量2.50～3.58kg。依次采用兩種不同檢驗(yàn)方法對(duì)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，采用試管法檢驗(yàn)資料設(shè)為對(duì)照組，采用MGCT 法檢驗(yàn)資料設(shè)為觀察組。該研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過（編號(hào)：201601002）。

1.2 入組及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 入組標(biāo)準(zhǔn) ①無家族心臟病史；②無藥物過敏史；③無其他血液科疾病；④患兒母親血型為O 型；⑤患兒監(jiān)護(hù)人知情同意并簽字。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①存在原發(fā)性免疫缺陷性疾??；②存在肝腎心等器官異常疾病；③患兒監(jiān)護(hù)人要求退出該研究。

1.3 方法

1.3.1 樣本準(zhǔn)備 用EDTA 抗凝2ml 離心分離血清，使用生理鹽水對(duì)抗凝全血標(biāo)本進(jìn)行洗滌，后分別配置成0.8%、3%～5%紅細(xì)胞懸液，剩余1ml 紅細(xì)胞配成壓積紅細(xì)胞。

1.3.2 直接抗人球蛋白試驗(yàn) 觀察組采用抗人球蛋白卡（長(zhǎng)春博訊），加入0.8%患兒紅細(xì)胞懸液50μl，置入離心機(jī)離心1min 觀察結(jié)果。對(duì)照組向標(biāo)記試管內(nèi)加入3%～5%紅細(xì)胞懸液1 滴，再加入1 滴特異性抗人球蛋白血清，混勻、離心，最后觀察結(jié)果。

1.3.3 游離抗體試驗(yàn) 對(duì)抗人球蛋白卡進(jìn)行標(biāo)記，向各孔中加入0.8%ABO 標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液50μl，加入新生兒血清50μl，后孵育15min，并離心處理觀察離心結(jié)果。對(duì)照組取試管并標(biāo)注，向其中加入新生兒血清2 滴，加入3%～5%紅細(xì)胞懸液1 滴，后37℃水浴60min。然后加入廣譜抗IgG 抗人球蛋白血清1 滴，最后離心處理觀察結(jié)果，若出現(xiàn)凝集則判定抗體檢測(cè)陽(yáng)性。

1.3.4 紅細(xì)胞不規(guī)則抗體檢測(cè) 觀察組分離血漿，并在Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ孔中加入血漿50μl，然后對(duì)應(yīng)加入篩查譜細(xì)胞50μl，37℃水浴15min 后離心取出，依照譜紅細(xì)胞反應(yīng)格局判定結(jié)果，紅細(xì)胞凝集或出現(xiàn)溶血?jiǎng)t判定為陽(yáng)性；若紅細(xì)胞完全沉降于凝膠管底部，則判定為陰性。

1.3.5 放散液中抗體檢測(cè) 采用酸放散法制備放散液，然后采用釋放實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其中抗體。取大試管向其中加入1ml 新生兒壓積紅細(xì)胞及生理鹽水，56℃水浴7min，后離心5min，分離上清放散液備用。觀察組對(duì)抗人球蛋白卡標(biāo)記，加入0.8%紅細(xì)胞懸液及放散液各50μl，后孵育處理15min，再離心處理10min，若O 孔出現(xiàn)陽(yáng)性則表明釋放ABO 外抗體，另取抗人球蛋白卡，加入抗體篩選細(xì)胞后加入50μl放散液對(duì)不規(guī)則抗體篩選。對(duì)照組取試管加入3%～5%紅細(xì)胞懸液，置入37℃水浴60min，然后使用生理鹽水洗滌3 次，最后加入1 滴廣譜抗IgG 抗人球蛋白血清，離心觀察結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法本研究采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行分析，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差及百分率表示計(jì)量資料和計(jì)數(shù)資料，行t檢驗(yàn)及卡方檢驗(yàn)分析組間數(shù)據(jù)差異，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不規(guī)則抗體檢測(cè)結(jié)果觀察組不規(guī)則抗體陽(yáng)性檢出率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.296，P<0.05），見表1。

表1 不規(guī)則抗體檢測(cè)結(jié)果（n）

2.2 直接抗球蛋白檢測(cè)結(jié)果觀察組直接抗球蛋白陽(yáng)性檢出率為97.00%（194/200）高于對(duì)照組的66.50%（133/200），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=31.176，P=0.000）。

2.3 游離抗體檢測(cè)結(jié)果觀察組游離抗體檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率為93.50%（187/200）高于對(duì)照組的48.50%（97/200），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=49.174，P=0.000）。

2.4 釋放實(shí)驗(yàn)抗體檢測(cè)結(jié)果觀察組抗體放散檢測(cè)陽(yáng)性率94.00%（188/200）高于對(duì)照組的43.50%（87/200），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=59.351，P=0.000）。

3 討論

HDN 是臨床中較為常見的疾病，該病是由母嬰血型不合而導(dǎo)致的母親體內(nèi)產(chǎn)生血型抗體，其抗體與胎兒血型抗原不匹配，可通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)導(dǎo)致免疫性溶血的出現(xiàn)[6]。ABO-HDN 的臨床發(fā)病率居高不下，有研究結(jié)果顯示導(dǎo)致ABO-HDN 的主要原因是母嬰血型不合[7]。一般情況下，當(dāng)母體內(nèi)的血型IgG 抗體通過胎盤屏障進(jìn)入胎兒血液，可導(dǎo)致胎兒紅細(xì)胞破壞，繼發(fā)高膽紅素血癥、溶血、貧血[8]，這是其主要發(fā)病機(jī)制。輸血是現(xiàn)階段臨床治療HDN 的主要方法，為患兒實(shí)施輸血前應(yīng)加強(qiáng)檢驗(yàn)工作，但臨床樣本數(shù)較多，且可能出現(xiàn)檢驗(yàn)不合理的情況，因而導(dǎo)致校驗(yàn)準(zhǔn)確率低，出現(xiàn)誤診及漏診[9，10]。一般情況下，在對(duì)HDN 患兒進(jìn)行輸血治療時(shí)依照常規(guī)方式操作干預(yù)，在對(duì)患兒進(jìn)行輸血干預(yù)前可對(duì)應(yīng)性檢測(cè)母體內(nèi)抗體水平，避免出現(xiàn)溶血反應(yīng)[11]。在對(duì)HDN 患兒進(jìn)行輸血干預(yù)前采取合理科學(xué)的血液檢測(cè)方案對(duì)患兒及母體血液進(jìn)行評(píng)估，具有十分重要的意義[12，13]。MGCT 是臨床應(yīng)用較為廣泛的血液檢測(cè)方法，具有簡(jiǎn)單、便捷的特點(diǎn)，且與傳統(tǒng)檢驗(yàn)計(jì)數(shù)相比，可減少紅細(xì)胞洗滌等步驟，檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度較高，臨床應(yīng)用價(jià)值較高[14，15]。

本研究采用MGCT 對(duì)ABO-HDN 患兒溶血三項(xiàng)、紅細(xì)胞不規(guī)則抗體進(jìn)行檢測(cè)，這對(duì)ABO-HDN患兒具有重要價(jià)值。本研究觀察組直接抗球蛋白陽(yáng)性檢出率為97.00%高于對(duì)照組的66.50%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；觀察組游離抗體檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率為93.50%高于對(duì)照組的48.50%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；表明采用MGCT 對(duì)ABO-HDN患兒輸血前進(jìn)行檢測(cè)可有效提高直接抗球蛋白及游離抗體檢測(cè)陽(yáng)性率。此外，觀察組患兒檢測(cè)的不規(guī)則抗體及抗體放散檢出率明顯高于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。不規(guī)則抗體也能導(dǎo)致患兒出現(xiàn)免疫溶血反應(yīng)、嚴(yán)重輸血反應(yīng)，且抗體以IgG為主，不規(guī)則抗體抗-C、抗-c、抗-E、抗-e、抗-D 均屬于IgG 抗體，其屬于溫抗體類型，長(zhǎng)度約24nm，當(dāng)發(fā)生妊娠或輸血時(shí)，可刺激機(jī)體免疫產(chǎn)生相關(guān)抗體，并使紅細(xì)胞發(fā)生致敏反應(yīng)。輸血過程產(chǎn)生的IgG 效價(jià)與發(fā)生輸血反應(yīng)的嚴(yán)重程度直接相關(guān)，而且IgG 抗體經(jīng)常誘發(fā)遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)。

綜上所述，采用MGCT 對(duì)ABO-HDN 患兒溶血三項(xiàng)、紅細(xì)胞不規(guī)則抗體進(jìn)行檢測(cè)，具有檢出率高的優(yōu)點(diǎn)。受臨床樣本數(shù)較少的限制，更深入的研究有待后續(xù)進(jìn)行。