沈 雪，趙福陽，吳 越，崔新宇

（牡丹江醫(yī)學(xué)院，黑龍江牡丹江 157000）

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀（美國賽默飛U3000）；十二孔固相萃取裝置；Seq-Pak C18固相萃取柱；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。0.45 μm 超微孔濾膜；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)滅草煙（咪唑煙酸，純度≥99%）。甲醇為色譜純，二氯甲烷、丙酮、乙腈為分析純。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品的處理

準(zhǔn)確稱取牛奶樣品1 g 于離心管之中，取2 個離心管分別標(biāo)號為Y1（樣品1）、Y2（對照1）作為兩個樣品樣管，用二氯甲烷定容至10 mL，渦旋混合，離心機(jī)離心，轉(zhuǎn)速為4 000 r/min。取下層有機(jī)層5 mL 于容量瓶之中，用二氯甲烷定容至10 mL 以待凈化。

1.2.2 樣品凈化

將樣品提取液沿SPE C18柱（活化后使用）的管壁緩緩傾入。在流速約為2 mL/min 的條件下將5 mL 丙酮、5 mL 乙腈、5 mL 甲醇，依次加入SPE 柱進(jìn)行淋洗。用5 mL 體積比為5 ∶95的5%氨水-甲醇混合溶液進(jìn)行洗脫。

1.2.3 樣品的濃縮

在45 ℃下將待濃縮溶液蒸發(fā)至近干，使用流動相溶解并定容。溶液用0.45 μm 的有機(jī)相濾膜過濾之后加入進(jìn)樣瓶中進(jìn)行高效液相色譜分析。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取適量滅草煙標(biāo)準(zhǔn)品（精確至 0.000 1 g）于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成10 mg/mL標(biāo)樣儲備液，儲存于冰箱內(nèi)。滅草煙標(biāo)準(zhǔn)儲備液用甲醇稀釋成2 mg/mL、4 mg/mL、6 mg/mL、8 mg/mL 和10 mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.5 HPLC 條件

色譜柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；檢測波長：240 nm；流動相：甲醇∶水=90 ∶10，需要用磷酸調(diào)節(jié)pH 值為3.5，經(jīng)過濾膜過濾并脫氣；流速，1.0 mL/min[1-5]。

1.2.6 樣品的測定

滅草煙根據(jù)色譜保留時間定性，外標(biāo)法定量。以滅草煙質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算試樣溶液濃度，按式（1）計算土壤樣品中乙草胺和烯草酮的殘留量[6-8]。

式中，X-牛奶中滅草煙的質(zhì)量，mg；ρ-試樣溶液中滅草煙的質(zhì)量濃度，mg/mL；V-所配的溶液體積，mL。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，所測得的色譜圖見圖1，測得樣品色譜圖見圖2，標(biāo)準(zhǔn)曲線圖見圖3，線性方程為y=546 883x+17 754，r=0.999 7，線性范圍2～10 mg/mL。

圖1 滅草煙標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜圖

圖2 滅草煙檢測樣品的色譜圖

圖3 滅草煙標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.2 回收率實驗和精密度計算

取不含待測物品的樣品，按照1.2 方法分3 組，每組5支加標(biāo)回收樣品管，進(jìn)行加標(biāo)回收實驗和精密度計算，結(jié)果見表1。在6～10 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的添加條件下，實驗的加標(biāo)回收率在84%以上，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.7%～7.5%，實驗證明本方法準(zhǔn)確度和精密度較為良好。

表1 不同濃度滅草煙的加標(biāo)回收率

3 結(jié)論

本實驗對牛奶中滅草煙的測定過程中，采用二氯甲烷作為提取劑，C18固相萃取小柱進(jìn)行萃取、凈化。利用高效液相色譜法檢測樣品牛奶中咪唑啉酮類除草劑滅草煙的殘留，本次實驗所得線性方程為y=546 883x+17 754，r=0.999 7，線性范圍2～10 mg/mL。加標(biāo)回收率84%以上，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.7%～7.5%。本方法準(zhǔn)確度和精密度較為良好，可廣泛推廣應(yīng)用。